Parámetros de extracción y métodos de secado de Cistanche Deserticola

Cistanche es la Cistanche deserticola YC Ma oCistanche tubulosa (Schenk) WightTallo carnoso seco con hojas escamosas de la planta Orobanchiaceae.Cistanche deserticola YC Ma[1]. El principal ingrediente activo de Cistanche deserticola son los glucósidos de feniletanol [2-4]. Los estudios farmacológicos han demostrado que tiene las funciones deafrodisiaco, mejorar la inmunidad, ymejorar la memoria[4-9].

En los últimos años, la metodología de superficie de respuesta se ha utilizado ampliamente en la extracción de la medicina tradicional china [{{0}}]. El método de superficie de respuesta tiene las ventajas inherentes de una alta precisión de detección, una menor cantidad de experimentos necesarios, una predicción precisa de los modelos de funciones y la capacidad de reflejar la relación entre factores y valores predichos [15-17]. Por lo tanto, este experimento utiliza la puntuación integral del contenido de los cinco glucósidos de feniletanol como valor de respuesta y utiliza el software Design-Expert 8.0.6.1 para diseñar el experimento, optimizar el proceso de extracción de Cistanche deserticola y proporcionar información para la identificación y establecimiento de estándares de calidad deCistanche desierto.

Actualmente, el índicecomponentes equinácea y verbascósidoson temas candentes de investigación en la tecnología de extracción y procesamiento deCistanche desierto. La edición de 2015 de la Farmacopea China estipula que el método de procesamiento de la Cistanche deserticola es "eliminar las impurezas, lavar, humedecer, cortar en rodajas gruesas y secar". [1], no existen regulaciones claras sobre el método de secado. Por lo tanto, este experimento utilizó ocho métodos de secado diferentes, incluido el secado al sol, el secado a la sombra, el secado en horno (40, 60, 80, 100, 120 grados) y la liofilización, para procesar Cistanche deserticola [18], lo que proporcionó una base teórica para el Proceso de secado de Cistanche deserticola.

Sobre la orientación.

EXTRACTO DE CISTANCHE CON 30% DE EQUINCAÓSIDO

1 Materiales e instrumentos

La Cistanche deserticola fresca se cosechó en octubre de 2018. El lugar de origen es el municipio de Mitan, condado de Minqin, Baiyin, provincia de Gansu. El profesor asociado Guo Yehong de la Universidad Agrícola de Gansu lo identificó como Cistanche deserticola YC Ma, un tallo carnoso con hojas escamosas. Sustancias de referencia equinácea (número de lote 82854-37-3, fracción de masa mayor o igual al 98 %), cistancheasida A (número de lote 93236-42-1, fracción de masa mayor o igual al 95 %), verbascósido (número de lote { {5}}, fracción de masa mayor o igual al 98 %), isomurabasina (número de lote 61303-13-7, fracción de masa mayor o igual al 98 %), 2′-acetil verbascósido (número de lote 94492-24-7 , fracción de masa mayor o igual al 95%) se compraron en Chengdu Pu. Feide Biotecnología Co., Ltd.; el ácido fórmico y el metanol son de calidad cromatográfica, Merck Company de Alemania; el agua es agua purificada y los demás reactivos son de calidad analítica.

Cromatógrafo líquido Waters Acquity, detector PDA, estación de trabajo de cromatografía Empower y sistema de gestión de disolventes cuaternarios; Limpiador ultrasónico KQ-100E, Kunshan Ultrasónico Instrument Co., Ltd.

Compañía; balanza analítica AL104, Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.; Liofilizador LyoQuest-85, Telstar, España.

2 Métodos y resultados

2.1 Preparación de la solución de referencia.

Pesar con precisión las cantidades apropiadas deequinácea, cistanqueósido A, verbascósido, isorbascósido, y estándares de referencia de 2'-acetil verbascósido, y agregue 70 % de metanol para obtener concentraciones en masa de 1.04, 0.61, 0.63, 0,39 y 0,48 mg/mL de solución de referencia mixta.

2.2 Condiciones cromatográficas de Cistanche deserticola

Simetría de Waters C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 µm); temperatura de la columna 30 grados, flujo volumétrico 1,0 ml/min; la fase móvil es metanol-0.Solución acuosa de ácido fórmico al 1%, gradiente de elución: 0~12 min, 29%~34% de metanol; 12-40 min, 34 %-40 % de metanol; 30-35 min, 40 %-35 % de metanol; 35-40 min, 30% metanol;

1-equinacósido 2-cistanche A 3-verbascósido 4-isoactósido 5-2′-acetilactósido

Fig. 1 HPLC de referencia mixta (A) y muestra de C. deserticola (B)

2.3 Preparación de la solución de prueba.

Pesar con precisión 1 g de polvo seco de Cistanche deserticola en un matraz Erlenmeyer (pasado a través de un tamiz de malla 65-), agregar 50 ml de metanol al 50 %, pesar la masa, realizar ultrasonidos a 40 kHz a 150 W, enfriar a temperatura ambiente. , y armar la masa para conseguirlo.

2.4 Investigación de relaciones lineales

Tome {{0}}.1, {{20}}.5, 1, 2, 4 y 8 ml de la solución de referencia mezclada anterior en un recipiente de 10 ml. matraz aforado y agregar 70% de metanol hasta la marca. Extraer con precisión 10 μL y medir según las condiciones cromatográficas de "2.2". La concentración de masa es la abscisa (X) y el área del pico es la ordenada (Y). Realice una regresión lineal y las ecuaciones de regresión son: Equinácea Y=128 049 X -830 189, r=0.999 5, rango lineal 10,4~832,0 ug/mL; Cistancheside AY=87 980 -447 963, r＝0.999 8, rango lineal 6.3-504.0 ug/mL; Isomurabasina Y＝92 831Glucósido Y=79 207 X-304 428, r=0.999 4, rango lineal 4,8~384,0 ug/mL.

2.5 Revisión metodológica

2.5.1 Inspección de precisión

Tome 20 μL de la solución de referencia mixta en el punto "2.1" e inyecte 6 veces continuamente para medir las áreas máximas de equinácea, cistancheaside A, verbascósido, isorebascósido y 2'-acetilverbascósido. Los RSD son 0.23% respectivamente. , {{10}}.71%, 0.59%, 0.41%, 0.29%, lo que indica que el instrumento tiene buena precisión.

2.5.2 Prueba de repetibilidad

Tomar 6 porciones de la misma muestra de Cistanche deserticola, preparar la solución problema según el punto "2.3", inyectar la muestra en las condiciones cromatográficas del punto "2.2" y medir el área del pico. Resultados Las fracciones de masa promedio de equinácea, cistanqueósido A, verbascósido, isorebascósido y 2′-acetil verbascósido fueron 1,83%, 0.21%, 2,34%, 0.13% y {{15). }}.68% respectivamente, y los RSD fueron 1,32 respectivamente. %, 0.83%, 1,24%, 2,19%,

0.78%, lo que indica que el método tiene buena repetibilidad.

2.5.3 Prueba de estabilidad

Determinar la estabilidad de la misma solución de prueba (preparada según "2.3") a las 0, 2, 4, 8, 12, 24 y 48 horas para obtener equinácea, cistanqueósido A, verbascósido e isolebascósido. , área del pico de 2′-acetil verbascósido, RSD fueron 0.58 %, 0.21 %, 1,58 %, 1,46 %, 2,19 % respectivamente, lo que indica que la solución de prueba fue estable dentro de las 48 h.

2.5.4 Prueba de recuperación de muestras

Tome 1 g de 6 muestras de Cistanche deserticola con contenido conocido y agregue con precisión una cierta cantidad de solución de referencia mixta (Echinaceaside 1.06 mg/mL, Cistancheoside A 0.86 mg /mL, verbascósido 2,17 mg/mL, isolebascósido 0.79 mg /mL, 2′-acetil verbascósido 0.91 mg/mL), agregue metanol al 70 % hasta completar 50 ml y inyectar muestras de acuerdo con las condiciones cromatográficas de "2.2". Las recuperaciones promedio medidas son 101,52%, 99,21% y 102,62% respectivamente. , 98,62%, 97,36%, RSD son 1,64%, 1,95%, 0,87%, 1,59%, 1,13% respectivamente y la tasa de recuperación de la muestra es buena.

Cistanche es una conocida hierba tónica que puede nutrir y proteger los riñones. En la teoría de la medicina tradicional china, Cistanche es la mejor hierba para los riñones. Cistanche es rico en echinacósido, acteosido y flavonoides. Estos ingredientes eficaces de Cistanche pueden reducir la apoptosis de las células renales y aumentar la proliferación de las células renales. Por tanto, Cistanche es un complemento natural para el riñón.