La dieta rica en grasas exacerba la lesión renal por isquemia-reperfusión
Mar 23, 2022
para más información:ali.ma@wecistanche.com
PARTE Ⅰ: La modificación de la dieta altera el microambiente inmunológico intrarrenal y la susceptibilidad a la lesión renal aguda isquémica
Junseok Jeon'f, Kyungho Leef, Kyeong Eun Yang, Jung Eun Lee, Ghee Young Kwon, Wooseong Huh y otros.
INTRODUCCIÓN
isquémicoLesión renal aguda(AKI) es la causa más común de AKI y con frecuencia contribuye al desarrollo y progresión deenfermedad renal cronica(CKD) tanto en nativos como trasplantadosriñones(1,2). Lesión por isquemia-reperfusión(IRI) induce la lesión del injerto, una consecuencia inevitable deriñóntrasplante (3). En muchos estudios se ha demostrado el papel sustancial de los mecanismos inmunológicos, más allá de la simple lesión hipóxica, en la patogenia de la LRA isquémica (4,5).riñónsiguiente IRI(Lesión por isquemia-reperfusión), una fuerte respuesta inflamatoria causada por los sistemas inmunes innato y adaptativo da como resultadoDaño en el riñón(6). Además de la infiltración de las células inmunitarias circulantes, el microentorno inmunológico intrarrenal, incluidas las células inmunitarias intrarrenales residentes (7) y los receptores tipo Toll (TLR) en los túbulos renales (8), contribuye significativamente a la lesión renal después de la IRI.(Lesión por isquemia-reperfusión) (6).
Estudios recientes han informado una relación entre la dieta y la función inmunológica (9). Los cambios en la composición de la dieta tienen el potencial de exacerbar o aliviar la gravedad de enfermedades en las que los mecanismos inmunitarios desempeñan un papel importante en la patogenia, como la hipertensión en un modelo murino de hipertensión sensible a la sal o la hipertensión relacionada con la obesidad.Daño en el riñónen unRica en grasas(HF) modelo de obesidad inducida por dieta (10-12). Sin embargo, aún no se ha determinado si la modificación de la dieta puede alterar el microentorno inmunológico intrarrenal y la susceptibilidad a la LRA isquémica, aunque se ha informado el papel de la intervención dietética en la ERC (13). Teniendo en cuenta el potencial de los efectos preventivos o terapéuticos de la intervención dietética en la LRA isquémica, es importante investigar los efectos de la modificación dietética en pacientes normales.riñones.
En este estudio, nuestro objetivo fue revelar los efectos de HF(Rica en grasas) o dieta alta en sal (HS) en riñones normales y el desarrollo de LRA isquémica con un enfoque en el micromedio inmunológico intrarrenal.
Haga clic en orgánicoCITANCHE PARA LA ENFERMEDAD RENAL
MATERIALES Y MÉTODOS
Modificación Dietética y el IRI Renal(Lesión por isquemia-reperfusión)Modelo
Este estudio fue aprobado por el Comité de Uso y Cuidado de Animales del Centro Médico Samsung y la Junta de Revisión Institucional del Centro Médico Samsung (IACUC No.20180314002) y se realizó de conformidad con las pautas de investigación con animales: informes de experimentos in vivo (14,15). Se adquirieron ratones macho C57BL/6 de 9-semanas de edad de Orient Bio Inc. (Seongnam, Kyoungki-do, Corea). Todos los ratones se alojaron en una instalación de barrera libre de patógenos específica.
Investigamos los efectos de la HF(Rica en grasas)o dieta HS en riñón normal y riñones post-isquémicos en un modelo de LRA isquémica inducida por IRI bilateral(Lesión por isquemia-reperfusión)cirugía. En cada modelo, los ratones se asignaron aleatoriamente a cuatro regímenes dietéticos; dieta normal (0.25 por ciento de NaCl por peso, 10 por ciento de grasa por calorías), HF(Rica en grasas) (0.25 por ciento de NaCl por peso, 60 por ciento de grasa por calorías), dieta HS (8 por ciento de NaCl por peso, 10 por ciento de grasa por calorías) y dieta alta en grasas con alto contenido de sal (HF(Rica en grasas)más HS) (8 por ciento de NaCl por peso, 60 por ciento de grasa por calorías). La composición de las dietas normal y HS fue 20 por ciento de proteína (caseína de fuente principal), 70 por ciento de carbohidratos (sacarosa de fuente principal) y 10 por ciento de grasa (aceite de soya de fuente principal) (D12450B, Research Diets, New Brunswick, NJ). La composición del HF(Rica en grasas)la dieta y la IC(Rica en grasas) más la dieta HS era 20 por ciento de proteína (fuente principal de caseína), 20 por ciento de carbohidratos (fuente principal de Lodex 10) y 60 por ciento de grasa (fuente principal de manteca de cerdo) (D12492, Research Diets). Todos los regímenes dietéticos tenían las mismas concentraciones de minerales y vitaminas excepto NaCl.
En cuanto a los ratones normales, cada grupo se mantuvo con la dieta asignada durante 42 días y luego se cambió a una dieta normal durante 14 días.
En cuanto al modelo de AKI isquémico, utilizamos un IRI murino establecido(Lesión por isquemia-reperfusión)modelo con abordaje por laparotomía(16, 17). IRI bilateral(Lesión por isquemia-reperfusión)se indujo después de 1-semanas o 6-semanas de duración de la modificación dietética. Brevemente, los ratones se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de ketamina (100 mg/kg; Yuhan, Seúl, Corea) y xilazina (10 mg/kg; Bayer, Leverkusen, Alemania). Después de una incisión en la línea media abdominal, ambos pedículos renales se aislaron y pinzaron durante 27 minutos con una pinza microvascular (Roboz Surgical Instrument, Gaithersburg, MD). Durante la operación, los ratones anestesiados se mantuvieron bien hidratados con solución salina estéril tibia y se colocaron sobre una mesa de calentamiento controlada termostáticamente. Después de 27 min, las pinzas microvasculares se liberaron de los pedículos renales para la reperfusión. Después de aplicar las suturas, se permitió que los ratones se recuperaran con libre acceso a la dieta y el agua asignados. Todos los ratones fueron sacrificados el día 2 después de la IRI.(Lesión por isquemia-reperfusión)operación, y los riñones post-isquémicos fueron recolectados después de la exanguinación.
CITANCHE EXTRACTOPUEDE PREVENIR EL RIÑÓN DE DAÑOS
Evaluación de la función renal
En ratones normales, las concentraciones de nitrógeno ureico en sangre (BUN; Fujifilm, Bedford, Reino Unido) y creatinina en plasma (Arbor Assays, Ann Arbor, MI) se midieron en muestras de plasma recolectadas de las venas de la cola en serie los días 0,7,14 , 28, 42 y 56 después de la modificación de la dieta. Se utilizaron kits colorimétricos de acuerdo con los métodos recomendados por el fabricante. en el IR(Lesión por isquemia-reperfusión)modelo, las muestras de plasma se midieron los días 0, 1 y 2 después de la operación utilizando los mismos métodos.
Análisis histológico de tejidos
en el IR(Lesión por isquemia-reperfusión)En el modelo, las secciones de tejido renal posisquémico se fijaron con formalina tamponada al 10 por ciento y se tiñeron con hematoxilina y eosina.
Inmunohistoquímica de CD45 y análisis FAXS de tejido
Las secciones de tejido renal fijadas con formalina se inmunoteñeron para la detección de CD45 como sigue. Las secciones (4-μm de espesor) se desparafinaron con xileno, se rehidrataron en una serie graduada de alcohol y se colocaron en una solución tampón de citrato (pH6.0). Los portaobjetos se colocaron en una olla a presión y se calentaron durante 10 min para mejorar la recuperación de antígenos. Después de enfriar, las secciones de riñón se sumergieron en una solución de peróxido de hidrógeno (Dako, Carpinteria, CA) durante 30 minutos para bloquear la actividad de la peroxidasa endógena, seguido de una incubación durante la noche a 4 grados con bloqueo de proteínas sin suero (Dako). Al día siguiente, los portaobjetos se incubaron con una dilución 1:100 de anticuerpo monoclonal anti-CD45 de ratón (BD Biosciences, San Jose, CA) durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de enjuagar, las secciones teñidas con CD45-se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente con un anticuerpo secundario utilizando un kit Dako REAL EnVison (Dako). Posteriormente, se aplicó tetrahidrocloruro de 3,3'-diaminobencidina (Dako) a los portaobjetos para producir un color marrón, y los portaobjetos se contrastaron con solución de hematoxilina de Mayer (Dako).
Se utilizó una estación de trabajo TissueFAXS (Tissue Gnostics, Viena, Austria) para analizar y calcular el porcentaje de células CD45-positivas en muestras de riñón, como se describió anteriormente (18).
Análisis de citometría de flujo de células mononucleares infiltrantes de riñón
El aislamiento de células mononucleares renales (KMNC) se basó en un protocolo establecido (19). Brevemente, los riñones decapsulados se sumergieron en tampón RPMI (Mediatech, Manassas, VA) que contenía 5 por ciento de FBS y se rompieron mecánicamente usando un Stomacher 80 Biomaster (Seward, Worthing). , REINO UNIDO). Las muestras se filtraron, lavaron y resuspendieron en Percoll al 36 por ciento (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) seguido de una superposición suave sobre Percoll al 72 por ciento. Las muestras se centrifugaron a 1,000g durante 30 min a temperatura ambiente. Los KMNC se recolectaron de la interfaz de 36 por ciento y 72 por ciento de Percoll.
Los KMNC aislados se resuspendieron en tampón FACS y se preincubaron con anticuerpos anti-CD16/CD32 durante 10 minutos para minimizar la unión no específica a través de los receptores Fc. Los KMNC se incubaron con anti-ratón anti-CD3, CD4, CD8, CD19, CD21, CD25, CD44, CD45, CD62L, CD69, CD126, CD138, Gr-1, F4/80, FoxP3 y NK1.1 (todos de BD Biosciences, San Jose, CA) durante 25 min a 4 grados, se lavaron con tampón FACS y se fijaron con una solución de paraformaldehído al 1 por ciento. Las muestras se adquirieron usando un citómetro de flujo BD FACSVerse. Los datos se analizaron utilizando el programa FACSuite (BD Biosciences).
Ensayo multiplex de citocinas/quimiocinas
El análisis multiplex de citocinas y quimiocinas en extractos de proteína de riñón completo se realizó utilizando un kit Milliplex MAP Mouse Cytokine/Chemokine (Luminex, Austin, TX) siguiendo las instrucciones del fabricante. En este ensayo de citometría de flujo basado en partículas multiplexadas, se utilizaron anticuerpos monoclonales anti-citocina unidos a microesferas que incorporan distintas propiedades de dos colorantes fluorescentes. Nuestro ensayo fue diseñado para cuantificar interleucina(I)-2;IL-4; IL-6; I-10;interferón (IFN)-y; proteína quimioatrayente de monocitos (MCP)-1; regulada en la activación, expresión y secreción de células T normales (RANTES/CCL5); factor de necrosis tumoral (TNF)-; y factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). El valor de cada citocina o quimiocina se normalizó dividiendo la concentración bruta (pg/ml) por la concentración de proteína renal (mg/ml, medida con un kit de ensayo de proteína Pierce BCA, Thermo Fisher Científico, Waltham, MA).
Análisis de transferencia Western de los receptores tipo Toll intrarrenales 2 y 4
Los receptores tipo Toll intrarrenales 2 y 4 (TLR-2 y TLR-4) se analizaron mediante análisis de transferencia Western. De acuerdo con las instrucciones del fabricante, se separaron cantidades iguales de extracto de proteína de riñón completo (30 ug) mediante electroforesis en un sistema de mini gel NuPAGE Bolt (Thermo Fisher Scientific). Los geles se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa utilizando un sistema de transferencia en seco iBlot 2 (Thermo Fisher Scientific) después de la electroforesis. Las membranas se bloquearon con solución salina tamponada con tris de leche descremada al 5 por ciento con Tween20 al 0,1 por ciento (TBST) durante 1 hora a temperatura ambiente y luego se incubaron durante la noche a 4 grados con uno de los siguientes anticuerpos: anticuerpo monoclonal de ratón anti-TLR2 (MyBioSource, San Diego ,CA) o anticuerpo anti-TLR4 (Novus Biologicals, Centennial, CO). El anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa de rábano picante se aplicó durante 30 min a temperatura ambiente después de lavar con TBST. La señal se visualizó usando un sistema de detección Amersham ECL (GE Healthcare, Chicago, IL), siguiendo las instrucciones del fabricante. Las bandas se analizaron densitométricamente utilizando el software ImageJ 1.8 (Wayne Rasband, Institutos Nacionales de Salud, MD) y se normalizaron frente a la intensidad de la banda de actina correspondiente como control interno.
Modelo de hipoxia celular HK-2 y ensayo de proliferación
El modelo de hipoxia de células -2(HK-2) de riñón humano (una línea cll epitelial del túbulo proximal inmortalizada de un riñón humano adulto normal) se usó para un estudio in vitro para investigar los efectos de un HS o HF(Rica en grasas) entorno a nivel celular.
Se compraron células de riñón humano-2(HK-2) de la American Type Culture Collection (CRL-2190, Manassas, VA) y se cultivaron en medio libre de suero de queratinocitos (Thermo Fisher Scientific) complementado con extracto de hipófisis bovina y factor de crecimiento epidérmico recombinante humano. Las células se incubaron a 37 grados en una atmósfera humidificada de 5 por ciento de CO2 y los medios se cambiaron cada 2-3 días. La hipoxia se indujo mediante la exposición al 1 % de O2 y al 5 % de CO2 balanceado con nitrógeno en una incubadora multigás (APM-30D, Astec, Fukuoka, Japón) durante 48 h.
Las células HK-2 se dividieron en cuatro grupos. El primer y segundo grupo fueron controles bajo normoxia (21 por ciento de O2) e hipoxia (1 por ciento de O2), respectivamente. El tercer y cuarto grupo fueron tratados con NaCl adicional 25 mM y concentrado de lípido diluido 1:250 (Thermo Fisher Scientific), respectivamente. , antes y después del insulto hipóxico.
El grado de proliferación de células HK{{0}} en los días 0, 1 y 2 después de la hipoxia se evaluó con un ensayo de proliferación celular en una solución acuosa Cell Titer96 (Promega, Madison, WI) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Para la cuantificación de la expresión de la molécula de señalización inflamatoria en las células hipóxicas HK{{0}}, se midieron TLR-2 y TLR-4 con análisis de transferencia Western usando anti-TLR2 monoclonal de ratón (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX) y anticuerpos anti-TLR4 (Novus Biologicals, Centennial, CO) los días 0 y 2. Brevemente, las células se colocaron en tampón RIPA (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) que contenía un cóctel inhibidor de proteasa (Sigma-Aldrich). El homogeneizado se centrifugó a 13,000ga 4 grados durante 10 min, y el sobrenadante se sometió a los procedimientos de transferencia Western antes mencionados.
Análisis estadístico
Todos los datos se expresaron como media ± error estándar de la media (SEM). Las diferencias entre grupos o puntos temporales se analizaron mediante la prueba U de Mann-Whitney o el análisis de varianza bidireccional (ANOVA) seguido del análisis post-hoc de Tukey. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software GraphPad Prism versión 8 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Valores de P<0.05 were="" considered="" statistically="">
RESULTADOS
Efectos de la modificación de la dieta sobre los cambios fisiológicos en ratones normales Para investigar los cambios fisiológicos causados por la modificación de la dieta en ratones normales, se midieron en serie el peso corporal, el colesterol total en plasma, la creatinina y la concentración de BUN. La cantidad total de ingesta dietética en HE, HF(Rica en grasas)más HS, y los grupos de control fueron similares, mientras que el grupo HS tendió a consumir un poco más de comida (Figura 1 complementaria). El peso corporal del HF(Rica en grasas)grupo de dieta aumentó significativamente a partir del día 7 después de iniciar el HF(Rica en grasas)dieta. El grupo de dieta HS tenía un peso corporal más bajo que el grupo de control el día 42 y un peso corporal comparable al del grupo de control desde la semana 1 después de cambiar a una dieta normal (Figura 1A). Nivel de colesterol total en plasma del HF(Rica en grasas)El grupo de dieta fue significativamente mayor en comparación con el del grupo de control el día 14 y se volvió comparable al del grupo de control 1 semana después de cambiar a una dieta normal. Nivel de colesterol plasmático en el control, dieta HS y HF(Rica en grasas)más los grupos de dieta HS fue comparable durante las 6 semanas de modificación de la dieta (Figura 1B). El BUN fue mayor en los grupos HF(Rica en grasas)grupo de dieta y el HF(Rica en grasas)más el grupo de dieta HS en el día 7. La función renal general fue comparable entre los grupos durante 6 semanas de modificación de la dieta (Figura 1C).
FIGURA 1|Efectos de la modificación de la dieta en los cambios fisiológicos de ratones normales.(A) AF(Rica en grasas)El grupo de dieta ganó peso significativamente a partir del día 7 después de comenzar el HF(Rica en grasas)dieta y mostró un peso corporal estacionario después de cambiar a una dieta normal. El grupo de dieta HS tenía un peso corporal más bajo que el grupo de control el día 42 y volvió a un peso corporal comparable al del grupo de control 1 semana después de cambiar a una dieta normal. (B) AF(Rica en grasas)la dieta aumentó significativamente la concentración de colesterol total en plasma desde el día 14 después de la modificación de la dieta. El nivel de colesterol total de la HF(Rica en grasas)grupo de dieta volvió a una concentración comparable después de cambiar a una dieta normal. (C) El nivel de BUN en el día 7 fue significativamente mayor en el HF(Rica en grasas)grupos de dieta y dieta HS. La función renal general medida por la creatinina plasmática fue comparable entre los grupos durante todo el período de estudio.*P < {{0}}.05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" control="" en="" cada="" momento.="" †p="">< 0,05,="" en="" comparación="" con="" el="" día="" 7="" en="" el="" mismo="" grupo="" (n="5" para="" cada="" grupo="" en="" cada="" momento).="" los="" análisis="" estadísticos="" se="" realizaron="" con="" la="" prueba="" anova="" de="" dos="" vías="" seguida="" de="" la="" prueba="" de="" tukey.="">(Rica en grasas), Rica en grasas; HS, alta en sal; AF(Rica en grasas)más HS, alto en grasa con alto contenido de sal.
Efectos de la modificación de la dieta en los leucocitos intrarrenales de ratones normales El tráfico de leucocitos totales en riñones normales se evaluó mediante tinción inmunohistoquímica de CD45, seguida de análisis semicuantitativo con TissueFAXS (Figura 2A). La proporción de leucocitos totales intrarrenales entre las células nucleadas totales fue comparable entre grupos en cada punto de tiempo (Figura 2B).
FIGURA 2|Efectos de la modificación de la dieta en los leucocitos intrarrenales de ratones normales.Los leucocitos residentes se analizaron con inmunohistoquímica de CD45 y citometría de flujo en tejido renal normal. (A) Hallazgos inmunohistoquímicos representativos y análisis semicuantitativo de leucocitos CD45-positivos en riñón normal del grupo de control el día 0. Las flechas indican leucocitos CD45-positivos (×200). (B) Los porcentajes de leucocitos totales que expresan CD45 entre las células nucleadas totales fueron comparables entre los grupos alimentados con dieta.
Se analizaron con citometría de flujo las principales células efectoras de los sistemas inmunitario innato y adaptativo transportadas a los riñones después de la modificación de la dieta. Con respecto al subtipo de células T, las células T CD8 totales, las células CD4T de memoria efectora y las células T NK aumentaron con el tiempo durante la modificación de la dieta, mientras que las células T CD4 totales disminuyeron.(Rica en grasas)grupo y el HF(Rica en grasas)plus HSgroup mostró una mayor proporción de células CD8T entre las células T totales el día 42 después de la modificación de la dieta en comparación con el grupo de dieta de control. el HF(Rica en grasas)más el grupo HS también mostró proporciones más grandes de los subconjuntos de memoria efectora de células CD4 y CD8T y células T CD4 y CD8 activadas (Figuras 3A, B, Figura complementaria 2). Con respecto a las poblaciones de células no T, las células B totales disminuyeron y las células NK aumentaron el día 14 en comparación con el día 7 después de la modificación de la dieta. Las células plasmáticas alcanzaron números máximos en el HF(Rica en grasas)los grupos de dieta y dieta HS en el día 42 y disminuyó a niveles comparables con los del grupo de control después de una dieta normal durante 2 semanas. La proporción de células NK y células B maduras activadas entre las células B totales fue significativamente mayor en el HF(Rica en grasas)la dieta y la IC(Rica en grasas)más grupos de dieta HS el día 14 después de la modificación dietética.(Rica en grasas)Los grupos de dieta y dieta HS mostraron una mayor infiltración intrarrenal de neutrófilos el día 14 después de la modificación de la dieta (Figuras 3C, D, Figura complementaria 2).
FIGURA 3|Análisis de citometría de flujo de KMNC aislados de riñones de ratones normales.(A) Cambios en la subpoblación de células T intrarrenales por modificación de la dieta. AF(Rica en grasas)y las dietas HF más HS aumentaron la proporción de células T CD8 totales entre las células T totales en el día 42 después de la modificación de la dieta. AF(Rica en grasas)Además, la dieta HS también aumentó la proporción de células T CD4 y CD8 de memoria efectora. (B) Los diagramas de puntos representativos que analizan las células T el día 42. Las células seleccionadas indican células T CD4 y células T CD8 entre las células T totales. (C) AF(Rica en grasas)la dieta y la dieta HS aumentaron la infiltración de células plasmáticas y neutrófilos en los días 42 y 14 después de la modificación de la dieta, respectivamente. AF(Rica en grasas)La dieta y la dieta HF más HS aumentaron la infiltración de células B maduras activadas y células NK en el día 14 después de la modificación de la dieta. (D) Diagramas de puntos representativos que analizan las células plasmáticas el día 42. Las células cerradas indican células plasmáticas que expresan CD138 y CD126 entre las células mononucleares renales totales. *P < 0.05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" control="" en="" cada="" momento.="" †p="">< 0,05,="" en="" comparación="" con="" el="" día="" 7="" en="" el="" mismo="" grupo="" (n="5" para="" cada="" grupo="" en="" cada="" momento).="" los="" análisis="" estadísticos="" se="" realizaron="" con="" la="" prueba="" anova="" de="" dos="" vías="" seguida="" de="" la="" prueba="" de="" tukey.="" alta="">Rica en grasas; HS, alta en sal; AF(Rica en grasas)más SA,Rica en grasascon mucha sal.
Efectos de la modificación de la dieta en las citocinas/quimiocinas intrarrenales de ratones normales
En comparación con la dieta normal, la dieta HS o la dieta HF(Rica en grasas)Además, la dieta HS mejoró la expresión intrarrenal de citocinas/quimiocinas proinflamatorias, incluidas TNF-, INF-y, MCP-1 y RANTES (Figura 4A). La expresión de IL-6 fue mayor en el HF(Rica en grasas)más el grupo de dieta HS el día 7 (Figura 3 complementaria). Por el contrario, la expresión intrarrenal de VEGF en ratones alimentados con la dieta HS y la dieta HF(Rica en grasas)más la dieta HS fue significativamente menor que la del grupo control (Figura 4B).
FIGURA 4|Efectos de la modificación de la dieta sobre las citocinas y quimiocinas intrarrenales de ratones normales.HS y HF(Rica en grasas)más las dietas HS aumentaron las expresiones intrarrenales de TNF-, INF-, MCP-1 y RANTES en el día 42. El HF(Rica en grasas)Además, la dieta HS también aumentó la expresión de IL-6 en el día 7 después de la modificación de la dieta. Aunque no hubo diferencias significativas en la expresión de IL-10, la expresión intrarrenal de VEGF fue menor en el grupo de dieta HS y el grupo HF(Rica en grasas)más el grupo de dieta HS el día 7 y el día 42 después de la modificación de la dieta. *P < 0.05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" control="" en="" cada="" momento.="" †p="">< 0,05,="" en="" comparación="" con="" el="" día="" 7="" en="" el="" mismo="" grupo="" (n="5" para="" cada="" grupo="" en="" cada="" momento).="" los="" análisis="" estadísticos="" se="" realizaron="" con="" la="" prueba="" anova="" de="" dos="" vías="" seguida="" de="" la="" prueba="" de="" tukey.="" alta="">Rica en grasas; HS, alta en sal; HF más HS,Rica en grasascon mucha sal.
La modificación dietética afecta la susceptibilidad a la LRA isquémica
Para investigar los efectos de la modificación de la dieta en los riñones posisquémicos, IRI bilateral(Lesión por isquemia-reperfusión)se realizó 1 o 6 semanas después de la modificación de la dieta. En general, deterioro de la función renal después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión)fue más prominente en los ratones que recibieron la modificación de la dieta basada en HS durante 1 semana y 6 semanas en comparación con el grupo de control. Tanto las concentraciones de BUN como de creatinina en plasma fueron significativamente más altas en los ratones alimentados con HS o HF(Rica en grasas)más dieta HS durante 1 semana en comparación con el grupo de control el día 2 después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión)(Figura 5A). Concentración de creatinina en plasma en los ratones alimentados con HF(Rica en grasas)más la dieta HS durante 6 semanas fue significativamente mayor que la del grupo de control en los días 1 y 2 después de la IRI(Lesión por isquemia-reperfusión)(Figura 5B).
FIGURA 5|Efectos de la modificación de la dieta en el desarrollo de insuficiencia renal aguda (IRA) después de IRI bilateral(Lesión por isquemia-reperfusión)cirugía.(A,B) Los cambios funcionales renales después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión)en cada grupo de dieta. Deterioro de la función renal después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión)tendía a agravarse con la IC(Rica en grasas)o una dieta HS alimentada durante 1 semana y 6 semanas. Los niveles de BUN y creatinina plasmática fueron significativamente más altos en HS y HF(Rica en grasas)más grupos de dieta HS alimentados durante 1 semana después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión). Nivel de creatinina plasmática en la IC(Rica en grasas)más el grupo de dieta HS alimentado durante 6 semanas fue significativamente mayor que el del grupo de control en el día 2 después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión). *P < 0.05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" control="" en="" cada="" punto="" de="" tiempo="" (n="5–10" para="" cada="" grupo).="" el="" análisis="" estadístico="" se="" realizó="" utilizando="" la="" prueba="" u="" de="" mann-whitney.="" alta="">Rica en grasas; HS, alta en sal; HF más HS,Rica en grasascon mucha sal.
Las proporciones de túbulos necróticos tendieron a ser mayores en los ratones alimentados con HS o HF(Rica en grasas)dieta en comparación con el grupo control (Figura 6). El grupo alimentó un HF(Rica en grasas)más la dieta HS durante 1 semana mostró una proporción significativamente mayor de túbulos necróticos que el grupo de control (Figura 6C).
FIGURA 6|Efectos de la modificación de la dieta sobre la lesión estructural después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión)cirugía.(A,B) Tinción con hematoxilina y eosina de riñones posisquémicos el día 2 después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión). Las flechas indican túbulos dañados o necróticos (×200). (C) Los porcentajes de túbulos necróticos tendieron a ser más altos en los ratones alimentados con HF(Rica en grasas)o dieta HS en comparación con el grupo de control. el HF(Rica en grasas)más el grupo de dieta HS alimentado durante 1 semana mostró un porcentaje significativamente mayor de túbulos necróticos que el grupo de control. *P < 0.05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" control="" (n="5–10" para="" cada="" grupo).="" el="" análisis="" estadístico="" se="" realizó="" utilizando="" la="" prueba="" u="" de="" mann-whitney.="" alta="">Rica en grasas; HS, alta en sal; HF más HS,Rica en grasascon mucha sal.
El porcentaje de leucocitos totales que expresan CD45 entre los núcleos totales en los riñones posisquémicos fue significativamente mayor en el grupo alimentado con un HF(Rica en grasas)más dieta HS tanto para la semana 1 como para las 6 semanas (Figuras 7A,B). El grupo alimentó un HF(Rica en grasas)la dieta durante 6 semanas también mostró una mayor proporción de células CD45-positivas que el grupo de control (Figura 7C).
FIGURA 7|Efectos de la modificación de la dieta en el tráfico de leucocitos hacia el riñón posisquémico.(A,B) Hallazgos inmunohistoquímicos representativos y análisis semicuantitativos de leucocitos CD45-positivos en los riñones posisquémicos el día 2 después de la IRI(Lesión por isquemia-reperfusión). Hubo infiltraciones más pronunciadas de leucocitos en los riñones posisquémicos de ratones alimentados con un HF(Rica en grasas)o dieta HS para 1 semana y 6 semanas. Las flechas indican leucocitos CD45-positivos (×200). (C) Los porcentajes de leucocitos totales que expresan CD45 entre el total de células nucleadas fueron mayores en los riñones post-isquémicos de IC(Rica en grasas)- o ratones alimentados con HS en comparación con ratones alimentados con una dieta normal. *P < 0.05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" control="" (n="5–10" para="" cada="" grupo).="" el="" análisis="" estadístico="" se="" realizó="" utilizando="" la="" prueba="" u="" de="" mann-whitney.="" alta="">Rica en grasas; HS, alta en sal; HF más HS,Rica en grasascon mucha sal.
Expresión intrarrenal de TLR-2 y TLR-4 el día 2 después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión)se evaluó con Western Blot de muestras de proteínas extraídas de riñones posisquémicos. La expresión de TLR-2 y TLR-4 tendió a aumentar en ratones alimentados con HF(Rica en grasas)o dieta HS durante l semana (Figuras 8A,C). Ratones alimentados con un HF(Rica en grasas)más la dieta HS durante 6 semanas mostró una expresión significativamente mayor tanto de TLR-2 como de TLR-4 (Figuras 8B,C).
FIGURA 8|Western blotting de muestras de proteínas extraídas de riñones posisquémicos el día 2 después de IRI(Lesión por isquemia-reperfusión).(A) La expresión general de TLR2 y TLR4 tendía a ser mayor en los riñones posisquémicos de ratones alimentados con una dieta HF o HS durante 1 semana en comparación con los de los ratones alimentados con una dieta normal. (B,C) La expresión de TLR-2 y TLR-4 fue significativamente mayor en el HF(Rica en grasas), SA y HF(Rica en grasas)más grupos de dieta HS alimentados durante 6 semanas en comparación con el grupo de control. *P < 0.05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" control="" (n="3–4" para="" cada="" grupo).="" el="" análisis="" estadístico="" se="" realizó="" utilizando="" la="" prueba="" u="" de="" mann-whitney.="" alta="">Rica en grasas; HS, alta en sal; HF más HS,Rica en grasascon mucha sal.
Efectos del alto contenido de sodio y lípidos en las células HK-2 hipóxicas
La Figura 9A muestra el grado de proliferación de células HK después de la agresión hipóxica dependiendo del tratamiento adicional con NaClandlipid. El día 0, el final de la hipoxia, fue el día en que se extrajeron las células HK-2 de la incubadora multigás después de 48 h de hipoxia. El tratamiento con alto contenido de sal (NaCl adicional 25 mM) suprimió la proliferación de células HK-2 hipóxicas. Por el contrario, el tratamiento con lípidos facilitó la proliferación de células HK-2hipóxicas.
El análisis de transferencia Western de TLR-2 y TLR-4 en extractos de proteínas de células HK-2 hipóxicas mostró que el tratamiento con lípidos redujo la expresión de TLR-2 y mejoró la expresión de TLR{ {4}}, en comparación con el grupo de control de hipoxia el día 2 después del ataque hipóxico (Figuras 9B,C). El tratamiento adicional con NaCl no cambió significativamente la expresión de TLR-2 o TLR-4 en comparación con las del grupo de control de hipoxia.
FIGURA 9|Efectos del tratamiento con sodio y lípidos en las células HK-2 hipóxicas.(A) El tratamiento adicional con NaCl inhibió la proliferación de células HK{{0}} después de la agresión hipóxica en comparación con el grupo de control de hipoxia. Por el contrario, el tratamiento adicional con lípidos facilitó la proliferación de células HK-2 después de la agresión hipóxica. (B,C) La transferencia Western de TLR-2 y TLR-4 mostró que el tratamiento con lípidos redujo las expresiones de TLR-2 y mejoró la expresión de TLR-4 en comparación con la hipoxia grupo de control el día 2 después del insulto hipóxico. Día 0: día en el que se retiraron las células HK-2 de la incubadora multigás 48 h después de la hipoxia. *P < 0.05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" control="" de="" normoxia.="" †p="">< 0,05,="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" control="" de="" hipoxia.="" el="" análisis="" estadístico="" se="" realizó="" utilizando="" la="" prueba="" u="" de="">
La hierba medicinal china tradicional:cistanche
Nota: La medicina tradicional chinahierba cistanche(también conocido como "hierba de dragón" y "ginseng del desierto"), crece solo en los desiertos áridos y cálidos. Como una de las nueve hierbas inmortales,Cistanche(cistanche tubulosa/Cistanche desertica/desertliving cistanche/cistanche salsa) contenido con ingredientes ricos y efectivos como echinacoside, acteoside, glucósidos feniletanoides totales, flavonoides, polisacáridos, etc. y neuronas, etc. Los estudios farmacológicos modernos han confirmado lo siguienteefectos de la cistanche(beneficios de la cistanche): mejorar la inmunidad; mejorar la función sexual y la función renal; anti fatiga; antienvejecimiento; mejorar la memoria; enfermedad anti-Parkinson; enfermedad anti-Alzheimer; antioxidación; alivio del estreñimiento; antiinflamatorio; promover el crecimiento óseo, blanquear la piel; proteger el hígado; etc.
