Actividad antioxidante, perfil fenólico y potencial nefroprotector de los extractos etanólicos y acuosos de Anastatica Hierochuntica contra la nefrotoxicidad inducida por CCl4-en ratas

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Tariq I. Almundarij et al.

Resumen:Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica L.) se usa ampliamente para tratar una variedad de problemas de salud, sobre todo para facilitar el parto y aliviar los trastornos relacionados con el sistema reproductivo. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de A. hierophantic etanolic (KEE) y extracción acuosa (KAE) CCl4-indujo estrés oxidativo y nefrotoxicidad en ratas usando los marcadores bioquímicos pararenalfuncionesy estado antioxidante, así como exámenes histopatológicos del tejido renal.A. hierophantic contenía 67,49 mg GAE g−1 de compuestos fenólicos totales (TPC), 3,51 µg g−1 de carotenoides totales (TC) y 49,78 y 17,45 mg QE g−1 de flavonoides totales (TF) y flavonoles totales (TFL), respectivamente. Resultó en 128,71 µmol de TE g−1 de DPPH-RSA y 141,92 µmol de TE g−1 de ABTS-RSA. A. hierofántico presentado superioractividad antioxidanteinhibiendo los radicales del ácido linoleico y quelando los metales de oxidación. El análisis HPLC resultó en 9 y 21 ácidos fenólicos y 6 y 2 flavonoides enKEEy KAE con predominio de los ácidos sinápico y siríngico, respectivamente. Inyección intramuscular de vit. E más Se y la administración oral de KEE, KAE y KEE más KAE a 250 mg kg-1 de peso corporal restauraron significativamente los niveles de creatinina sérica, urea, K, proteína total y albúmina. Además, redujeron el malondialdehído (MOD), restauraron los niveles de glutatión reducido (GSH) y mejoraron los niveles de superóxido dismutasa (SOD). KEE, KAE y KEE más KAE protegieron elriñonesde la nefrotoxicidad por CCl4-ya que atenuaban principalmente el estrés oxidativo inducido. El totalnefronasección fue de aproximadamente 83,27 por ciento, 97,62 por ciento y 78,85 por ciento para KEE, KAE y KEE más KAE, respectivamente. Ambos de vit. Los extractos hierofánticos de E más Se y A. atenuaron la alteración histopatológica en ratas tratadas con CCl4-. En conclusión, A. hierophantic, especialmente KAE, tiene la capacidad potencial de restaurar la estabilidad oxidativa y mejorarriñónfunción después de CCl4Lesión renal agudamejor que KEE. Por lo tanto, A. hierophantic tiene el potencial de ser un agente terapéutico útil en el tratamiento de la nefrotoxicidad inducida por fármacos.

Palabras clave:Kaff-e-Maryam; polifenoles; bioactividad; metabolitos secundarios;marcadores renales; enzimas antioxidantes;renaldisfunción

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1. Introducción

Enfermedad del riñones la novena causa principal de muerte con más de 1 de cada 7, es decir, se estima que el 15 por ciento de los adultos estadounidenses o 37 millones de personas tienenenfermedad renal cronica(ERC) [1]. Sorprendentemente, la causa más común de ERC registrada en 2015 es la diabetes mellitus, seguida de la presión arterial alta y la glomerulonefritis [2]. Otras causas de ERC incluyen la idiopática (a menudo asociada con riñones pequeños en la ecografía renal) [3]. Anteriormente, el CCl4 se usaba para desengrasar metales, limpieza en seco, manchas de telas, fluidos para extintores de incendios y fumigación de granos [4]. Provoca trastornos graves en el hígado, los pulmones y los testículos, así como en la sangre al generar radicales libres activos [5]. De acuerdo con los hallazgos de Ogeturk et al. [6], la exposición a este solvente produce daño renal agudo y crónico. Se cree que la peroxidación de lípidos inducida por radicales libres es una de las principales causas del daño de la membrana celular, lo que lleva a una variedad de condiciones patológicas [7]. La generación de radicales reactivos se ha implicado en la nefrotoxicidad inducida por CCl4-, que está implicada en la peroxidación de lípidos y la acumulación de proteínas disfuncionales, lo que provoca lesiones en los riñones [8]. Sorprendentemente, los usos tradicionales de las plantas medicinales han crecido en los últimos años, y numerosas investigaciones han confirmado su papel terapéutico contra varias enfermedades [9-12].

2. Materiales y métodos

2.1. preparación de la muestra

Se compró una muestra de la planta Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) en un mercado nativo en la ciudad de Buraydah, región de Qassim, Arabia Saudita. El material vegetal fue autenticado por el Departamento de Producción y Protección Vegetal, Facultad de Agricultura y Medicina Veterinaria, Universidad de Qassim, Arabia Saudita. La muestra se lavó con agua limpia del grifo para eliminar la arena y la suciedad de las hojas y luego el material vegetal secado al aire (a 28 ± 1 ◦C durante 48 h.) se pulverizó mecánicamente y se guardó en bolsas de polietileno opaco a 4 ± 1 ◦C. hasta su uso.

2.2. Preparación de Extractos Etanólicos y Acuosos

Aproximadamente 200 g de A. hierophantic seco se extrajeron con 300 ml de etanol al 70 por ciento en un extractor Soxhlet para preparar la extracción etanólica (KEE). El extracto se concentró en un evaporador rotatorio a 40 ◦C para evaporar el solvente remanente, luego a sequedad bajo una corriente de N2. La extracción acuosa (KAE) se llevó a cabo según lo descrito por Asuzu [23] con modificaciones menores. Se agregaron 200 gramos de material vegetal seco a 500 mL de agua destilada estéril caliente. A continuación, la mezcla se agitó bien y se dejó reposar durante 1 hora. Luego se unió un condensador de reflujo al matraz y luego se calentó hasta que hierva suavemente durante 10 min, se enfrió, se agitó bien y se filtró a través de papel de filtro Whatman No. 1. El filtrado se evaporó en un evaporador rotatorio y luego se secó bajo una corriente de N2. Los extractos alcohólico y acuoso (250 mg mL−1) fueron recién formulados en agua destilada para ser utilizados para administración oral.

2.3. Contenido fenólico total (TPC)

El contenido de TPC de A. hierophantic se determinó según el método adaptado por Bettaieb et al. [24]. Los resultados se compararon con una curva estándar de ácido gálico (GA) trazada en el rango de 50–500 mg mL−1 (R2=0.99), y el TPC se calculó como mg de ácido gálico equivalente (GAE ) por gramo de A. hierofántico (mg de GAE g−1 ).

2.4. Carotenoides totales (TC), flavonoides totales (TF) y flavonoles totales (TFL)

Según lo informado por Al-Qabba et al. [10], 5 g de A. hierophantic se extrajeron repetidamente con una mezcla de acetona y éter de petróleo (1:1, v/v). El contenido total de carotenoides (TC) se determinó espectrofotométricamente a 451 nm. TC se expresó como mg g-1 DW. El contenido de TF de A. hierophantic se analizó de acuerdo con el protocolo descrito por Mohdaly et al. [25]. El contenido de TF se calculó como mg de equivalente de quercetina (QE) por 100 g−1 DW. En el mismo contexto, se llevó a cabo el contenido de TFL [26]. Se registró la absorbancia a 440 nm y se calculó el TFL como mg de equivalente de quercetina (QE) por 100 g−1 DW.

2.5. Determinación de la capacidad antioxidante

Ensayo de captación de radicales de DPPH: el RSA se probó espectrofotométricamente según el blanqueo de la solución de color púrpura de DPPH según una técnica alterada por Lu et al. [27]. La capacidad antirradical se presentó como µmol de equivalentes de Trolox (TE) por gramo de A. hierophantic (µmol TE g−1). Actividad eliminadora de radicales ABTS: El RSA de A. hierophantic frente a los radicales ABTS se probó mediante el método adaptado de Lu et al. [27]. Los resultados se expresaron como µmol TE g−1. Ensayo de blanqueo de ácido linoleico-caroteno: El porcentaje de antioxidantes de A. hierophantic se evaluó en términos de blanqueo de caroteno en comparación con hidroxianisol butilado (BHA) aplicando un protocolo espectrofotométrico adaptado designado por Koleva et al. [28]; los resultados se dieron como porcentaje relacionado con BHA. Acción quelante de A. hierophantic sobre iones ferrosos: La actividad quelante de A. hierophantic se midió según el protocolo de Zhao et al. [29]. El porcentaje de inhibición de la creación del complejo ferrozina-Fe2 plus como acción quelante de metales se midió y se presentó como mg mL−1 cuando se utilizó ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) como control positivo.

2.6. Fraccionamiento de compuestos polifenólicos de extractos acuosos y etanólicos de A. hierophantic

La determinación de polifenoles a partir de extractos etanólicos y acuosos se realizó mediante un sistema HPLC HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, EE. C18 150 × 4,6 mm, 5 µm) con una precolumna Altima C18 de 5 mm (Alltech, Nettetal, Alemania) según Goupy et al. [30]. El sistema disolvente utilizado fue un gradiente de A (ácido acético al 2,5 por ciento), B (ácido acético al 8 por ciento) y C (acetonitrilo). La tasa de solvente compañero fue de 1 mL min−1, y la separación se realizó a 35 ◦C. El volumen inyectado fue de 10 µL. Los compuestos fenólicos se analizaron mediante una calibración estándar externa y se expresaron como mg g−1 DW de equivalentes (+) de catequina para flavan-3-oles y cumarina equivalente para compuestos aromáticos polares. Se determinó una variabilidad del 8 por ciento en cinco extracciones de compuestos fenólicos de la misma muestra. Todos los valores fueron la media de inyecciones duplicadas. Los polifenoles y sus derivados se identificaron y cuantificaron a 280 y 320 nm, mientras que los flavonoides se identificaron a 360 nm.

2.7. Diseño experimental

Todos los experimentos fueron aprobados por el Comité Institucional de Ética Animal (IAEC) de QU (No. {{0}}), KSA, que está regulado por el Propósito del Control y la Supervisión de Experimentos con Animales (CPCSEA) Comité dependiente del Comité Nacional de Bioética (NCBE), Reglamento de Aplicación de la Ley de Ética de la Investigación en Seres Vivos. Se utilizaron un total de 36 ratas albinas macho en el estudio actual y se dividieron en 6 grupos de 6 animales cada uno y se trataron de la siguiente manera: el grupo I (control) recibió una inyección intraperitoneal (ip) de aceite de oliva (1.0 mL kg−1 dos veces por semana) y 0.5 mL de agua destilada por vía oral/diariamente durante 21 días consecutivos. El grupo II recibió una inyección ip de una mezcla fresca de volúmenes iguales de CCl4 y aceite de oliva (a una dosis de 1.0 mL kg−1 dos veces por semana) y 0.5 mL de agua destilada por vía oral/ diariamente según Al-Qabba et al. [10] con modificaciones menores. El grupo III (grupo de referencia) recibió una inyección intramuscular (im) de 50 mg kg−1 de vit. E más Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, Francia) dos veces por semana, según Asuka et al. [31] y El-Desoky et al. [32] y 0,5 ml de agua destilada por vía oral/diaria. El grupo IV sirvió como prueba y recibió 250 mg kg−1 de KEE por vía oral/diaria junto con CCl4 ip dos veces por semana. El grupo V recibió 250 mg kg−1 de KAE por vía oral/diaria junto con CCl4 ip dos veces por semana. El grupo VI recibió 250 mg kg−1 de KEE más KAE (1:1) por vía oral/diaria junto con CCl4 ip dos veces por semana. Veinticuatro horas después del último tratamiento (día 21), las ratas fueron anestesiadas por la mezcla (alcohol:cloroformo:éter, 1:2:3). Se recogieron muestras de sangre por punción cardíaca de todos los animales, y el suero se separó por centrifugación a 4000 rpm durante 10 min y se mantuvo a -20 ◦C para el examen bioquímico.

2.7.1. Análisis Bioquímico de Riñón

Las concentraciones séricas de creatinina, urea, proteínas totales y albúmina se determinaron mediante métodos espectrofotométricos automatizados (autoanalizador BM/Hitachi-911; Boehringer Mannheim, Alemania) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los niveles de potasio se determinaron por fotometría de llama a 766 nm.

2.7.2. Estimación de la actividad antioxidante renal

Luego de la recolección de muestras de sangre, se sacrificaron animales de todos los grupos; Correctoriñonesse aislaron rápidamente y se lavaron con solución salina helada. A continuación, se cortó el tejido, se enjuagó con solución salina fría, se secó con papel secante y se colocó en hielo inmediatamente. Usando un homogeneizador de tejido eléctrico, se pesaron porciones del tejido (1,0 g) y se homogeneizaron con 9 volúmenes de tampón de fosfato 0,05 M enfriado con hielo a pH 7,4. Los restos celulares se eliminaron mediante centrifugación a 12,000 rpm (4 ◦C) durante 20 min para recolectar sobrenadantes para la determinación de la concentración de malondialdehído (MDA) [33], actividad de superóxido dismutasa (SOD) [34] y reducción contenido de glutatión (GSH) [35]. concentración de proteína enriñónhomogeneizado se determinó utilizando el método de Bradford [36].

2.7.3. Porcentaje de nefroprotección

Los porcentajes de nefroprotección (F) de vit. E más Se, KEE, KAE y KEE más KAE se calcularon para cada parámetro bioquímico por separado según Wakchaure et al. [37] usando la siguiente ecuación:

donde T=valor medio del grupo de tratamiento, C=valor medio del grupo de control positivo y N= valor medio del grupo de control negativo. Además, se comparó el porcentaje de nefroprotección total (porcentaje de TFP) con la vit. E más mares sigue:

2.7.4. Estudios Histopatológicos

Las muestras de la autopsia se recogieron del lado izquierdo.riñónde grupos separados de ratas y se fijaron en solución salina con formalina al 10 por ciento durante 24 h. El lavado con agua del grifo fue seguido por la deshidratación con diluciones seriadas de alcohol (metílico, etílico y etílico absoluto). Las muestras se aclararon en xileno y se incluyeron en parafina durante 24 h a 56 ◦C en un horno de aire caliente. Se prepararon bloques de tejido de cera de abejas de parafina para seccionarlos a 4-micras de espesor utilizando un micrótomo de trineo. Los cortes de tejido se recogieron en portaobjetos de vidrio, se desparafinizaron y se tiñeron con hematoxilina y eosina para una inspección periódica con un microscopio eléctrico óptico [38].

2.8. Análisis estadístico

Los resultados se muestran como media ± error estándar (SE). La importancia de las diferencias entre las medias en varios grupos se examinó utilizando un análisis de varianza de una vía (ANOVA) seguido de la prueba de Duncan, y se proporcionó un valor de p entre las medias en el nivel p < 0.05="" [39="">

3. Resultados

3.1. Fitoquímicos y Capacidad Antioxidante de A. hierophantic

Se realizó el análisis cuantitativo de los fitoquímicos hierofánticos de A. y las actividades antioxidantes relacionadas mediante la eliminación de radicales DPPH y ABTS, las actividades de blanqueo del ácido -caroteno-linoleico y la capacidad quelante (CA). Como puede verse claramente en la Tabla 1, el contenido de TPC fue de 67,49 mg GAE g−1. El contenido de CT fue de 3,51 µg g−1. Los contenidos de TF y TL fueron de 49,78 y 17,45 mg QE g−1, respectivamente. Además, se utilizaron DPPH-RSA y ABTS-RSA para medir la progresión de las actividades antioxidantes. Los resultados indicaron 128,71 µmol de TE g−1 y 141,92 µmol de TE g−1 para DPPH-RSA y ABTS-RSA, respectivamente. Además, elactividad antioxidante(AOA) de A. hierophantic se presenta en la Tabla 1. El porcentaje de inhibición de los radicales de ácido linoleico se calculó como 45,74 por ciento en comparación con BHA utilizando el ensayo de blanqueo de -caroteno ( -CB). Además, la evaluación de la actividad quelante de metales reveló 42,89 mg g-1, que parece interferir con la formación del complejo Fe2 más ferrozina, lo que indica su capacidad para quelar metales de oxidación.

3.2. Cuantificación de A. compuestos fenólicos hierofánticos

Se llevó a cabo el análisis cuantitativo de compuestos fenólicos para KEE y KAE mediante análisis HPLC, y los datos se tabulan en la Tabla 2. Se identificaron nueve ácidos fenólicos separados y seis flavonoides en cantidades detectables a partir del KEE de A. hierophantic. Los ácidos fenólicos más abundantes fueron los ácidos hidroxicinámicos como el ácido sinápico (28,704 mg 100 g−1 ) seguido del ácido cafeico (6,621 mg 10{ {61}} g-1 ), ácido rosmarínico (2,884 mg 100 g-1 ), ácido ferúlico (1,854 mg 100 g-1 ) y ácido cinámico (0,094 mg 100 g-1 ); y ácidos hidroxibenzoicos tales como ácido p-hidroxibenzoico (3,440 mg 100 g−1), ácido protocatequiico (1,811 mg 100 g−1), ácido vanílico (3,326 mg 100 g−1) y ácido siríngico (1,083 mg 100 g −1 ). Flavonoides como miricetina (16,269 mg 100 g−1), D-catequina (2,410 mg 100 g−1), kaempferol (0,434 mg 100 g−1), rutina (0,539 mg 100 g−1), apigenina{{56} Se detectaron cantidades invaluables de }glucósido (0.192 mg 100 g-1) y quercetina (0.184 mg 100 g-1). También se determinaron los compuestos fenólicos en KAE de A. hierophantic, y los datos se tabulan en la Tabla 2. El ácido siríngico se registró como el ácido fenólico más alto entre los 21 fenoles identificados. El catecol y el pirogalol fueron 2,526 y 1,589 mg 100 g−1, respectivamente. Datos

indicó que algunos ácidos fenólicos como el cafeico, catequina, clorogénico, epicatequina, e-vainílico, p-hidroxibenzoico y protocatequiico se detectaron en cantidades moderadas de 0.725, 0.256, { {6}}.136, 0.193, {{10}}.443, 0.223 y 0.454 mg 100 g−1, respectivamente. En el mismo contexto, cantidades bajas de 3,4,5-tiempo etoxicinámico, 4-aminobenzoico, benzoico, cinámico, cumarínico, elágico, ferúlico, gálico, isoferúlico, -cumárico, p-cumárico , y el ácido salicílico se cuantificaron después de ser identificados. La epicatequina y la D-catequina como flavonoides también se cuantificaron en KAE de A. hierophantic.

3.3. Niveles séricos de creatinina, urea, potasio, proteína total y albúmina

La inyección de CCl4 elevó sustancialmente los niveles séricos de creatinina, urea y k en ratas GII en comparación con las ratas de control (GI). Por el contrario, los niveles de proteína total y albúmina se redujeron significativamente en las ratas tratadas con CCl4- (Tabla 3). Vit. Los extractos hierofánticos de E más Se y A. (G III, IV, V y VI) redujeron sustancialmente las alteraciones en la creatinina y la urea provocadas por la inyección de CCl4, mientras que aumentaron la albúmina y las proteínas totales para estar cerca de los valores normales en GI (Tabla 3 ). El nivel sérico de k aumentó notablemente en ratas tratadas con CCl4- (GII) en comparación con GI (Tabla 3). La inyección de vit. E más Se y la administración de extractos alcohólicos y acuosos de A. hierophantic (G IV, V y VI) también mejoraron positivamente el nivel de k en comparación con GI (Tabla 3).

3.4. Biomarcadores antioxidantes renales

Como se muestra en la Tabla 4, la administración de CCl4 redujo significativamente los niveles de SOD y GSH y aumentó el nivel de MDA en GIIriñóntejido homogeneizado. Sin embargo, en comparación con GI, las ratas tratadas con vit. Los extractos hierofánticos de E más Se y A. (GIII, VI, V y VI) exhibieron una mejora sustancial en la actividad de las enzimas antioxidantes SOD y GSH, así como una reducción en los niveles de MDA (Tabla 4). A. extracto alcohólico hierofántico (GIV) superó a A. extracto acuoso hierofántico (GV) y A. extractos alcohólicos y acuosos combinados hierofánticos en la atenuación de los niveles de antioxidantes, y la lucha contra el proceso de autooxidación dio como resultado niveles bajos de MDA en comparación con GI.

3.5. Porcentaje de nefroprotección

El porcentaje de nefroprotección (relativo a los grupos control negativo (GI) y positivo (GII)) deriñónfunciones tales como creatinina, urea, k, TP y albúmina, así como actividades antioxidantes en homogeneizado de riñón (MDA, SOD, GSH) se ilustra en la Tabla 5. El porcentaje de nefroprotección registró el valor más alto como creatinina, urea, k en GIII, TP y albúmina en GV, MDA y GSH en GIII y SOD en GV (tabla 5). El porcentaje de nefroprotección total relativo a la vit. El tratamiento con E más Se registró niveles máximos en el grupo tratado con KAE (GV, 97,62 por ciento), luego KEE (GIV, 83,27 por ciento) y luego KEE más KAE (GVI, 78,85 por ciento), como se revela en la Tabla 5.

3.6. Efectos de los extractos hierofánticos de A. en la histoarquitectura renal

Los resultados de las investigaciones bioquímicas fueron respaldados por un examen histopatológico. La Tabla 6 y la Figura 1 muestran el grado de cambios histológicos en la estructura subyacente de la ratariñonesen varios grupos experimentales tratados con A. extractos hierofánticos. En la investigación actual, elriñóndel grupo de control (GI) se encontró que tenía una estructura histológica normal (Figura 1 (I.1)). La histoarquitectura de las ratas tratadas con CCl4- (GII) mostró infiltración de células inflamatorias focales (más más) entre los túbulos en la corteza, congestión (más más) de los vasos sanguíneos entre los túbulos (Figura 1 (II.2) ), múltiples formaciones de cilindros eosinofílicos ( plus plus ) en la luz de algunos túbulos y hemorragia focal ( plus plus ) entre los túbulos degenerados en la porción corticomedular (Figura 1(II.3), Tabla 6). En GIII, inyectando vit. E plus Se, administrando el extracto alcohólico de A. hierophantic (GIV), extracto acuoso de A. hierophantic (GV), y una combinación de extractos de A. hierophantic (GVI) atenuó los efectos citotóxicos de CCl4 y registró leve (+) a congestión moderada ( plus plus ) en los vasos sanguíneos entre los túbulos en la corteza (Figura 1(III.4–VI.8), Tabla 6) con cápsula de Bowman bien desarrollada con glomérulo y túbulos contorneados agrandados. Además, el extracto acuoso de A. hierophantic (GV) registró infiltración de células inflamatorias focales ( plus plus ) en la porción corticomedular (Figura 1 (V.7), Tabla 6).

4. Discusión

Los fitoquímicos son en su mayoría eliminadores de radicales libres efectivos y se consideran agentes antioxidantes superiores de origen vegetal. Se cree que las sustancias polifenólicas tienen propiedades anticancerígenas y antimutagénicas en humanos [40]. Un valioso contenido de TPC en A. hierophantic fue ligeramente superior al obtenido por Mohamed et al. [21] como 51,97 mg GAE g × 1 en A. hierophantic herb y por AlGamdi et al. [41], quienes encontraron 4 mmol L × 1 GAE en A. semillas hierofánticas. Recientemente, Zin et al. [42] indicaron la presencia de taninos en A. hierophantic como un compuesto bioactivo y recomendaron su bioactividad, que necesitaba ser investigada en profundidad. El contenido de -caroteno, como parte de los carotenoides totales, fue de 2.27 µg g × 1 como lo menciona Mohamed et al. [21], e incluso los resultados actuales presentan un total de carotenoides de 3,51 µg g × 1 . Hallazgos similares en el contenido de flavonoides y flavonoles han sido indicados por Mohamed et al. [21]. Los componentes biológicamente activos, como los compuestos fenólicos, presentesactividad antioxidantecomo rupturas de las reacciones en cadena de oxidación de lípidos al dar hidrógeno a los radicales libres activos. Este potencial depurador de los compuestos fenólicos para inhibir los radicales fue elucidado por sus grupos hidroxilo fenólicos [8,10,22]. Este ácido fenólico se ha descrito como un componente antioxidante eficaz, incluido el peróxido de hidrógeno, el radical hidroxilo y el anión superóxido [43]. A. La actividad quelante de metales hierofánticos parece interferir con la construcción del complejo "Fe2 más –ferrozina", lo que sugiere su capacidad para capturar iones "ferrosos" antes que "ferrozina". Una relación positiva entre un aumento en su contenido de compuestos fenólicos está directamente indicada con su capacidad antioxidante [42]. Andjelkovi´c et al. [44] establecieron la actividad de numerosos ácidos fenólicos para formar complejos con metales. El valioso TPC y las actividades antioxidantes relevantes utilizando diferentes enfoques de medición brindan una placa clara y confirman la bioactividad de A. hierophantic como hierba medicinal para aplicaciones de alimentos o bebidas.

Componentes antioxidantes efectivos, incluidos el peróxido de hidrógeno, el radical hidroxilo y el anión superóxido [43,45,47]. Los compuestos identificados y cuantificados por HPLC en KAE de A. hierophantic fueron más altos que el número de compuestos identificados en KEE, pero los compuestos identificados en KEE de A. hierophantic se presentaron en cantidades más altas [22]. Los resultados reflejan que el A. hierophantic consumidor podría presentar muchos componentes tanto en formas polares como no polares. Estos resultados son presentados de manera similar por AlGamdi et al. [41] ya que identificaron y cuantificaron 20 compuestos polifenólicos en semillas de A. Hirerochuntica. El extracto contenía ácidos clorogénicos y ácidos hidroxibenzoicos, pero los componentes principales eran glucósidos C de flavona, diglucósidos C, glucósidos O y glucósidos O-C-glucósidos que se presentan predominantemente como conjugados de luteolina. Además, 14 de los 20 compuestos en el extracto hierofántico de A. exhibieronactividad antioxidanteutilizando un sistema de detección de antioxidantes HPLC en línea [41]. Curiosamente, los datos actuales confirmaron que A. hierophantic es rico en compuestos fitoquímicos y es una buena fuente de antioxidantes naturales con beneficios potenciales para la salud, como apenas se ha destacado antes en las semillas [41]. Por lo tanto, el té preparado a partir del polvo de toda la planta es la forma tradicional de consumo; los datos ilustraron nuevos compuestos bioactivos identificados en KEE y KAE de A. Hirerochuntica, que diferían de los encontrados en AlGamdi et al. [41]

En numerosos estudios, la nefrotoxicidad inducida por CCl4- se utiliza como un sistema modelo para probar el efecto nefroprotector de extractos de plantas/fármacos [48,49]. El estudio actual analizó el efecto de los extractos hierofánticos de A. en CCl4-inducidoriñóndaño, así como su potencial nefroprotector y antioxidante en ratas. En el estudio actual, el grupo de tratamiento con CCl4 (GII) aumentó significativamente los niveles de creatinina, urea y k y disminuyó las concentraciones totales de proteína y albúmina en comparación con GI. Esto podría deberse a que la intoxicación por CCl4 es una fuente importante de producción de radicales libres en numerosos órganos, incluidos el hígado, los riñones, los pulmones, el cerebro y la sangre [50]. También se ha observado que después de la inyección de CCl4 en ratas, la concentración de CCl4 se distribuye de manera más uniforme en los riñones que en el hígado [51], ya que elriñóntiene una alta afinidad por CCl4 y contiene citocromo P450, predominantemente en la corteza. Los radicales libres más comunes del CCl4 son el radical triclorometilo (CCl3•) y el radical peroxilo triclorometilo (CCl3O2•) [52]. Estos radicales se adhieren a una proteína intracelular, a los lípidos de la membrana celular y al ADN, lo que provoca la desnaturalización de la proteína, la peroxidación de lípidos y el daño oxidativo del ADN que conduce a la muerte celular [53]. Por el contrario, el tratamiento de ratas CCl4-con vit. Los extractos de E más Se (GIII) y A. hierophantic (GVI: VI) atenuaron eficientemente estos aumentos en los niveles de creatinina y urea, así como también aumentaron la albúmina sérica y las proteínas totales para estar muy cerca de sus niveles en GI. Esto puede deberse a las propiedades antioxidantes y al rico contenido fenólico de los extractos hierofánticos de A. y a la capacidad antioxidante y actividad quelante de la vit. E plus Se, que elimina los radicales libres inhibiendo así el daño renal. Los fitoquímicos son los eliminadores de radicales libres más efectivos y se consideran agentes antioxidantes superiores de las plantas [54]. Los compuestos fenólicos más abundantes fueron los ácidos hidroxicinámicos, como el ácido sinápico, entre los nueve compuestos fenólicos identificados en KEE, mientras que el ácido siríngico fue el ácido fenólico más alto entre los 21 ácidos fenólicos identificados en KAE. Se identificaron seis flavonoides en KEE y dos en KAE mediante análisis HPLC [55]. Además, como antioxidante, la vit. Se cree que E protege los tejidos del daño causado por los metabolitos reactivos del oxígeno. El selenio también es reconocido como un oligoelemento esencial para la salud humana, ya que protege a las células de los efectos dañinos de los radicales libres [22].

En el estudio actual, la administración de CCl4 disminuyó notablemente el GSH y la SOD y aumentó los niveles de MDA enriñónhomogeneizados en relación con GI. Vit. Los extractos hierofánticos de E más Se y A. mejoraron los diversos efectos de CCl4 al restaurar la actividad alterada de agentes antioxidantes como SOD y GSH y pueden desactivar el proceso de producción de MDA, como se informó recientemente [15,21,40,41] . GSH es un antioxidante no enzimático que se encuentra en todas las células de mamíferos. Con su forma oxidada, GSSG, GSH actúa como cofactor de numerosas enzimas desintoxicantes (GPx, GST y otras) contra el estrés oxidativo y mantiene el equilibrio redox celular [47]. Este hallazgo sigue a los de Khan y Siddique [56] y Makni et al. [57], quienes informaron que CCl4 disminuyó el nivel de GSH en riñones de rata. Tratamiento con vit. Los extractos hierofánticos de E más Se y A. mostraron protección contra la reducción en el nivel de GSH provocada por CCl4. En el mismo contexto, la SOD cataliza la dismutación de dos moléculas de anión superóxido (*O2) en peróxido de hidrógeno (H2O2) y oxígeno molecular (O2), lo que hace que el anión superóxido, potencialmente dañino, sea menos peligroso [58,59]. La intoxicación por CCl4 altera el nivel de expresión génica al agotar la SOD renal [60]. Una disminución en la actividad de SOD es un índice sensible de daño celular. Nuestros extractos hierofánticos de A. probados mejoraron la toxicidad renal al aliviar el nivel de SOD. Participa en varios procesos enzimáticos para reducir la concentración de las reacciones de desintoxicación [61]. La MDA es el primer producto de la peroxidación lipídica y es uno de los marcadores importantes del estrés oxidativo. Los extractos hierofánticos de A. disminuyeron el aumento de los niveles de MDA y restauraron el poder antioxidante total en los riñones de rata tratados con CCl4-. Estos efectos protectores pueden deberse a la poderosa actividad antioxidante de los extractos hierofánticos de A. [15,21,40,41]. Estos resultados también sugieren que los extractos hierofánticos de A. pueden atenuar el estrés oxidativo al disminuir los niveles de peróxido de lípidos en riñones de rata expuestos a CCl4-y prevenir el daño renal. Estos resultados coincidieron con los resultados de las actividades antioxidantes de Zn sobre la nefrotoxicidad aguda inducida por CCl4- [62,63].

Los extractos de A. Hirerochuntica presentaron una valiosa capacidad de nefroprotección frente ariñónpruebas de función (creatinina, urea, K, TP y albúmina) y actividades antioxidantes del homogeneizado renal (GSH, SOD, MDA) en GIV, V y IV, respectivamente. El porcentaje de nefroprotección total relativo a la vit. El tratamiento con E más Se registró niveles máximos en el grupo tratado con KAE (GV, 97,62 por ciento), luego KEE (GIV, 83,27 por ciento) y luego KEE más KAE (GVI, 78,85 por ciento), respectivamente, en orden descendente. Esto puede deberse a las diferencias en la cantidad y calidad de los contenidos fenólicos y antioxidantes de los extractos de A. Hirerochuntica, que tienen una relación con la capacidad antioxidante [15,19,22,40,42].

Los hallazgos histopatológicos enriñonesson consistentes con las estimaciones bioquímicas de los grupos experimentales investigados. La administración de CCl4 (GII) provocó una lesión glomerular y tubular con vasocongestión en los riñones. Dogukan et al. [64] descubrieron un patrón histológico similar en tejido renal de rata en respuesta al tratamiento prolongado con CCl4. También se considera que los cambios histológicos son causados ​​por la sobrecarga funcional de las nefronas, lo que conduce a la disfunción renal [65], y/o se deben a la destrucción de tejido provocada como consecuencia de la generación de radicales libres a través del metabolismo de CCl4 [56,66]. . El efecto de la vit. E más Se y A. extracto hierofántico para reparar y restaurar los efectos de destrucción de los riñones de CCl4 fueron notables. Esto puede deberse a que la vit. E plus Se (como un potente antioxidante) actúa sobre las ROS inducidas por CCl4 [67]. Los extractos hierofánticos de A. suprimen la nefrotoxicidad aguda inducida por CCl4- debido al papel antioxidante y las propiedades de eliminación de radicales libres de los compuestos fenólicos presentes en los extractos de A. rentrochuntica [22]. Nuestros hallazgos son consistentes con los de otros investigadores que han demostrado que varios derivados de plantas tienen efectos farmacológicos al eliminar los abusos de CCl4 y restaurar la normalidad [6].

5. Conclusiones

Los resultados de este estudio demostraron claramente que A. hierophantic plant es rica en compuestos fenólicos polares y no polares con una capacidad antioxidante superior, que está directamente relacionada con el contenido fitoquímico. A. hierophantic (particularmente extracto acuoso) protege a las ratas contra el estrés oxidativo inducido por CCl4-yriñónlesión, como lo demuestra una caída significativa en los niveles de MDA y un aumento de la actividad de GSH y SOD, así como el cese de las alteraciones bioquímicas e histológicas en los riñones. La eficacia protectora podría surgir de las propiedades antioxidantes y de eliminación de radicales libres de los compuestos fenólicos presentes en los extractos hierofánticos de A.. Estas características ayudan a explicar la eficacia medicinal de la planta como medicamento a base de hierbas. Se necesita más investigación para describir completamente los principios activos de A. hierophantic, y este estudio pretende estimular una investigación relacionada más integral para ofrecer suficientes datos y recomendaciones para definir sus mecanismos y dosis seguras.

Contribuciones de autor:Conceptualización, TIA, YMA y HB; metodología, investigación, HB y HAA-R.; curación de datos, TIA y YMA; redacción—preparación, revisión y edición del borrador original; HB y HAA-R. Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito.

Fondos:Los investigadores desean agradecer al Decanato de Investigación Científica de la Universidad de Qassim por financiar la publicación de este proyecto.

Declaración de disponibilidad de datos:Los datos presentados en este estudio están disponibles previa solicitud al autor correspondiente.

AbreviaturasABTS:2,2'-azino-bis(3-etilbenceno tiazolina-6-ácido sulfónico); AOA:actividad antioxidante; BHA: hidroxianisol butilado; BHA: hidroxianisol butilado; DPPH: 1,1-difenil-2-picrilhidrazina; PS: peso seco; GA: ácido gálico; GAE: equivalente de ácido gálico; GSH: glutatión reducido; HPLC-DAD: detección de matriz de diodos por cromatografía líquida de alta resolución; KAE: A. extracto acuoso hierofántico; KEE: A. extracto etanólico hierofántico; MDA: malonaldehído; QE: equivalente de quercetina; RAA: actividad antioxidante relativa; ROS: especies reactivas de oxígeno; RSA: actividad captadora de radicales; Se: selenio; SE: error estándar; SOD: superóxido dismutasa; CT: carotenoides totales; CT: carotenoides totales; TF: flavonoides totales; TE: equivalentes de Trolox; TFL: flavonoles totales; TPC: compuestos fenólicos totales.

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