La dieta rica en fósforo induce una regulación positiva de la expresión de ARNm de Bmp2 y Spp1 en el riñón de rata

Para aclarar el mecanismo del desarrollo denefrocalcinosisinducido por undieta rica en fósforo (P), nos centramos en proteínas relacionadas con los huesos, como la proteína morfogenética ósea 2 y la osteopontina. Este estudio investigó los efectos de una dieta rica en P sobre la expresión de ARNm de Bmp2 y Spp1 en el riñón de rata. Las ratas Wistar se dividieron en dos grupos y se alimentaron con una dieta de control (grupo de control) o una dieta rica en P (grupo rico en P).Calcio renaly las concentraciones de P aumentaron significativamente en el grupo con alto contenido de P en comparación con el grupo de control. La expresión de ARNm tanto de Bmp2 como de Spp1 aumentó significativamente en el grupo con alto contenido de P en comparación con el grupo de control. Estos resultados indican que una dieta rica en P induce una regulación positiva de Bmp2 y Spp1.ARNm en el riñón.

Palabras clave:dieta rica en fósforo, nefrocalcinosis, Bmp2, Spp1,riñón, rata

HAGA CLIC AQUÍ PARA OBTENER EXTRACTO DE CISTANCHE ORGÁNICO NATURAL CON 25% DE EQUINACOSIDO Y 9% DE ACTEÓSIDO PARA LA FUNCIÓN RENAL

Introducción

nefrocalcinosisSe caracteriza por depósitos de calcio (Ca) en laparénquima renal. Fósforo dietético(P), en particular, es un factor fundamental en el desarrollo de este trastorno. Se ha demostrado que la administración de una dieta rica en P produce un aumento de la concentración de Ca en elriñóny depósitos de Ca en el parénquima renal1-6). Aunque el efecto de una dieta rica en P sobre el desarrollo de la nefrocalcinosis ha sido el foco de los estudios en curso, se sabe poco sobre el mecanismo responsable del desarrollo de este trastorno. Por lo tanto, es necesaria una solución oportuna a esta cuestión.

Informamos que tras un examen histológico mediante microscopía electrónica de transmisión, se observaron cristales en forma de aguja similares a hidroxiapatita en los túbulos renales de ratas alimentadas con una dieta rica en P6, 7). El microanálisis de rayos X indicó que los depósitos de Ca inducidos por una dieta rica en P comprenden principalmente Ca y P7). Estos resultados revelaron que los depósitos de Ca inducidos por una dieta rica en P son una forma de hidroxiapatita. Con base en este hallazgo, postulamos que el desarrollo de nefrocalcinosis está controlado por un mecanismo similar al de la formación ósea. Por lo tanto, el presente estudio se centró en proteínas asociadas a los huesos, como la proteína morfogenética ósea 2 (BMP2). BMP2 es un factor osteogénico que exhibe actividad inductora de osteogénesis, 9). Es de destacar que BMP2 fue identificada como un factor que induce la formación de hueso ectópico10, 11). Por lo tanto, planteamos la hipótesis de que si BMP2 desempeña un papel importante en el desarrollo de la nefrocalcinosis, la expresión de esta proteína en el riñón estaría regulada positivamente por una dieta rica en P. El presente estudio tuvo como objetivo determinar si una dieta rica en P afecta la expresión de ARNm deBmp2 en el riñón.

Mientras tanto, nuestro estudio anterior informó que una dieta rica en P eleva la expresión de osteopontina (OPN) en los túbulos renales mediante análisis inmunohistoquímico, lo que sugiere que la OPN puede estar implicada en el desarrollo de depósitos de Ca inducidos por una dieta rica en P12). Por lo tanto, también investigamos los cambios en la expresión del ARNm de Spp1 en el riñón.

Los resultados del presente estudio pueden proporcionar información valiosa sobre el mecanismo responsable del desarrollo de nefrocalcinosis inducida por una dieta rica en P.

Materiales y métodos

Animales y dietas. El presente estudio fue aprobado por el Comité de Uso de Animales de la Universidad de Agricultura de Tokio, y todos los animales se mantuvieron según las pautas de la universidad para el cuidado y uso de animales de laboratorio (Aprobación No. 300049).

Es importante señalar que las ratas hembras desarrollan nefrocalcinosis más fácilmente que las ratas macho13, 14). Además, informamos que una dieta rica en P aumenta la expresión de OPN en los túbulos renales de ratas hembra12). Luego, el presente estudio utilizó ratas hembra como animales de experimentación. Se alojaron ratas Wistar hembra de cuatro semanas de edad (Clea Japón, Tokio, Japón) en jaulas individuales de malla de alambre de acero inoxidable. Durante el período experimental, las jaulas se ubicaron en una habitación con iluminación controlada bajo un ciclo de 12-h luz: oscuridad (luz, 0800-2000 h), temperatura de 22 ± 1 grado y humedad relativa de 60% a sesenta y cinco%.

La composición de las dietas experimentales se muestra en la Tabla 1. Las dietas experimentales se prepararon en referencia a la dieta AIN-93G15). Las dietas experimentales contenían dos concentraciones diferentes de P (dieta de control, 0.3%; dieta alta en P, 1,5%). La concentración de P en la dieta rica en P se fijó en 1,5%, ya que nuestros estudios anteriores observaron que unaconcentración de P en la dietadel 1,5% induce nefrocalcinosis grave6, 7, 12, 14) y alta expresión de OPN12). Todas las dietas experimentales tuvieron la misma concentración de Ca (0.5%). Las concentraciones de P y Ca, determinadas mediante el análisis de las dietas experimentales, se muestran en la Tabla 1. Antes de comenzar el estudio, todas las ratas se aclimataron durante 7 días, tiempo durante el cual se les dio libre acceso a la dieta de control y agua desionizada. . Después del período de aclimatación, las ratas se dividieron aleatoriamente en dos grupos con pesos corporales medios similares y se alimentaron con la dieta de control (grupo de control) o con la dieta alta en P (grupo alto en P) durante 14 días. Las ratas tuvieron libre acceso a las dietas experimentales asignadas y al agua desionizada durante todo el período experimental. Al final del período experimental, las ratas fueron sacrificadas mediante inyección intraperitoneal de la mezcla anestésica (medetomidina, midazolam y butorfanol) y se recogieron muestras de sangre y riñón para su análisis. Las muestras de sangre se centrifugaron y los sobrenadantes se utilizaron como muestras de suero. Se extirparon los riñones y se descartó la cápsula renal. Elmuestras de suero y riñónse almacenaron a -80 grados hasta que se necesitaron para el análisis. El riñón derecho se utilizó para el análisis cuantitativo del ARNm de Bmp2 y Spp1, y el riñón izquierdo se utilizó para el análisis de las concentraciones de Ca y P.

Análisis de minerales.

Las muestras de las dietas experimentales y los riñones se incineraron a 550 grados durante 48 h en un horno de mufla y los minerales se extrajeron en 1 mol/L de HCl para su análisis. Las concentraciones de Ca en las dietas experimentales y en los riñones se determinaron mediante espectrofotometría de absorción atómica16). Las concentraciones de P en las dietas experimentales y en los riñones se analizaron utilizando el método de Gomori17).

Análisis cuantitativo de ARNm de Bmp2 y Spp1.

El ARN total se aisló del riñón homogeneizado utilizando el reactivo TRIzol (Life Technologies, CA, EE. UU.) de acuerdo con las especificaciones del fabricante. La cantidad y pureza del ARN se evaluaron utilizando un NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific, MA, EE. UU.). El ADNc se sintetizó utilizando SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix para qRT-PCR (Life Technologies) y luego se sometió a RT PCR cuantitativa en tiempo real utilizando SYBR Select Master Mix (Life Technologies). Se utilizaron cebadores específicos18-20) para el análisis de Bmp2 (directo, 5'-ACCGTGCTCAGCTTCCATCAC-3'; inverso, 5'-TTCCTGCATTTGTTCCCGAAA-3'), Spp1 (directo, 5'- TGAGACTGGCAGTGGTTGC-3'; inverso, 5'-CCACTTTCACCGGGAGACA-3') y Gapdh (adelante, 5'-TGGGAAGCTGGTCATCAAC-3'; inverso, 5'-GCAT CACCCCATTTGATGTT-3 '). La reacción de PCR en tiempo real se realizó utilizando un sistema de PCR en tiempo real StepOne (Applied Biosystems, CA, EE. UU.) y los niveles de expresión de ARNm se normalizaron a los niveles de ARNm de Gapdh. Se consideró que el valor del grupo control era 1,00.

Análisis estadístico.

Los resultados se presentan como medias ± SEM para cada grupo de 6 ratas. Después de realizar una prueba F para determinar la homogeneidad de las varianzas, se utilizó una prueba t de Student para determinar diferencias significativas entre los dos grupos. Si la homogeneidad de las varianzas no era igual, se utilizó la prueba t de Welch en lugar de la prueba t de Student. Las diferencias se consideraron significativas en p ＜ 0.05

Resultados

Peso corporal, ingesta de alimentos y análisis de suero.

El peso corporal final y la ingesta de alimentos disminuyeron significativamente en el grupo con alto contenido de P en comparación con el grupo de control (Tabla 2).

Peso del riñón y concentraciones de minerales.

Los pesos húmedo y seco de los riñones aumentaron significativamente en el grupo con alto contenido de P en comparación con el grupo de control (Tabla 3). Las concentraciones de Ca y P en los riñones también aumentaron significativamente en el grupo con alto contenido de P en comparación con el grupo de control.

Expresión renal de ARNm de Bmp2 y Spp1. Los niveles de ARNm de Bmp2 en el grupo con alto contenido de P aumentaron significativamente en comparación con el grupo de control (Fig. 1A). La expresión de ARNm de Spp1 también aumentó significativamente en el grupo con alto contenido de P en comparación con el grupo de control (Fig. 1B).

Servicio de apoyo de Wecistanche: el mayor exportador de cistanche de China:

Correo electrónico:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Compre para obtener más detalles de especificaciones:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop