Inducción de la inmunidad de la mucosa mediante la administración pulmonar de una nanopartícula dirigida a células

ABSTRACTO

Anteriormente, descubrimos que una nanopartícula construida con un antígeno, cloruro de benzalconio (BK) y ácido c-poliglutámico (c-PGA) mostró una alta inducción inmune de tipo Th1 y Th2-después de la administración subcutánea. Sin embargo, para la profilaxis de las infecciones respiratorias, se debe inducir la inmunidad de las mucosas. En este estudio, investigamos el efecto de la administración pulmonar de una nanopartícula que comprende ovoalbúmina (OVA) como antígeno modelo, BK y c-PGA en la inducción de inmunidad de la mucosa en los pulmones y el suero.

El complejo fue absorbido fuertemente por las células RAW264.7 y DC2.4. Después de la administración pulmonar, la retención pulmonar fue más prolongada para el complejo OVA/BK/c-PGA que para OVA solo. La inmunoglobulina (Ig)G sérica específica de OVA fue altamente inducida por el complejo. También se indujeron niveles elevados de IgG e IgA en el líquido de lavado broncoalveolar y no se observaron toxicidades in vivo. En conclusión, indujimos la inmunidad de la mucosa de manera eficaz y segura mediante la administración pulmonar de un complejo OVA/BK/c-PGA.

En los últimos años, cada vez más estudios han demostrado que la inmunidad de las mucosas juega un papel importante en el sistema inmunológico del cuerpo. La inmunidad de las mucosas se refiere al sistema inmunitario basado en las membranas mucosas del cuerpo humano, y sus capacidades de defensa están dirigidas principalmente a la invasión de patógenos en las membranas mucosas humanas, como el tracto respiratorio, el tracto digestivo y el tracto reproductivo.

La inmunidad de la mucosa en sí misma no hace que el cuerpo sea más inmune, pero puede ayudar a nuestro cuerpo a lidiar con la invasión de patógenos extraños de manera más efectiva. Al estimular continuamente la inmunidad de las mucosas, nuestro cuerpo produce más anticuerpos, lo que aumenta nuestra inmunidad.

Entonces, ¿cómo se puede estimular la inmunidad de las mucosas? Aqui hay algunas sugerencias:

1. Obtenga suficiente vitamina C. La vitamina C es un antioxidante natural que estimula la función de las células inmunitarias, lo que ayuda a combatir las infecciones. Las frutas y verduras de hoja verde como los limones, las naranjas y las fresas son ricas en vitamina C.

2. Aumentar la ingesta de bacterias del ácido láctico. Las bacterias del ácido láctico pueden promover el equilibrio de la flora intestinal e inhibir el crecimiento de bacterias dañinas. Los alimentos comunes de bacterias del ácido láctico incluyen yogur, chucrut, kimchi, etc.

3. Practica la respiración Respiraciones profundas. La respiración profunda aumenta el suministro de oxígeno y la ventilación a los pulmones, lo que puede ayudar a eliminar los patógenos acumulados en los pulmones.

En resumen, estimular la inmunidad de las mucosas es un medio importante para mejorar la inmunidad. Debemos hacer todo lo posible para mejorar nuestra inmunidad de las mucosas a través de la dieta y los hábitos de vida, para proteger nuestra salud. Desde este punto de vista, necesitamos mejorar la inmunidad. Cistanche puede mejorar significativamente la inmunidad porque la ceniza de carne contiene una variedad de componentes biológicamente activos, como polisacáridos, dos hongos y Huang Li, que pueden estimular el sistema inmunológico. Varios tipos de células, aumentan su actividad inmunológica.

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1. Introducción

Es casi seguro que las infecciones respiratorias agudas son la principal causa de muerte entre los niños < 5 años en los países en desarrollo (Williams et al., 2002). Se han desarrollado varias vacunas, como las de influenza, tos ferina y neumococo, para infecciones respiratorias (White, 1988; Pittman, 1991; Chen et al., 2020). La mayoría de esas vacunas se administran por vía intramuscular y subcutánea, lo que podría inducir eficazmente la inmunoglobulina (Ig)G sérica. Sin embargo, otras rutas son más útiles para estimular la inmunidad de las mucosas para prevenir infecciones respiratorias agudas. Se ha informado que las administraciones mucosales, como la intranasal y la pulmonar, inducen IgA mucosal de manera efectiva y previenen infecciones respiratorias (Giri et al., 2005; Ainai et al., 2017).

Por otro lado, las vacunas para administración intranasal y pulmonar no deben contener adyuvantes que se haya informado que causan reacciones inflamatorias y ulceración en el sitio de administración (Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). Otro enfoque para mejorar la eficacia de las vacunas sin adyuvantes es desarrollar un sistema que pueda administrar vacunas de manera efectiva en las células presentadoras de antígeno (APC) de la mucosa.

En un estudio anterior, desarrollamos un nuevo vector de administración de vacunas construido con un antígeno, cloruro de benzalconio (BK) y ácido c-poliglutámico (c-PGA). Un complejo que comprende ovoalbúmina (OVA) como antígeno modelo, BK y c-PGA (complejo OVA/BK/c-PGA) entregó efectivamente OVA en células dendríticas y mejoró la inducción de IgG sérica específica de OVA después de la administración subcutánea en ratones (Kurosaki et al. ., 2012). El presente estudio tuvo como objetivo investigar el efecto de la administración pulmonar de un complejo OVA/BK/c-PGA en la inducción de inmunidad de la mucosa en los pulmones y el suero.

2. Materiales y métodos

2.1. quimicos

OVA se adquirió de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EE. UU.). BK se obtuvo de Nacalai Tesque, Inc. (Kyoto, Japón). El c-PGA fue proporcionado por Yakult Pharmaceutical Industry Co., Ltd. (Tokio, Japón). El OVA marcado con isotiocianato de fluoresceína (FITC-OVA) y el OVA marcado con Alexa Fluor 647- (Alexa647- OVA) se obtuvieron de Invitrogen (Carls, CA, EE. UU.). El suero bovino fetal (FBS) se adquirió de Biological Industries Ltd. (Kibbutz Beit Haemek, Israel). OPTI-MEM I se obtuvo de GIBCO BRL (Grand Island, NY, EE. UU.), y una solución de antibióticos premezclada que contenía penicilina, estreptomicina y L-glutamina se obtuvo de Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka, Japón). El medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) y el medio RPMI1640 se obtuvieron de Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. (Tokio, Japón).

2.2. Preparación compleja

Previamente, construimos un complejo OVA/BK/c-PGA con una relación de peso de 1:0.2:0.2 (Kurosaki et al., 2012). Para preparar el complejo OVA/BK, se mezcló una cantidad apropiada de solución BK (pH 5.0) disuelta en glucosa al 5 por ciento con solución OVA (pH 7.0) disuelta en glucosa al 5 por ciento y se dejó durante 15 minutos a 4 °C. Para recubrir el complejo OVA/BK con c-PGA, se añadió una solución de c-PGA (pH 7,0) disuelta en glucosa al 5 % al complejo OVA/BK y se dejó durante 15 min más a 4 C. El tamaño de partícula y el potencial f de cada complejo se midieron utilizando un Zetasiser Nano ZS (Malvern Instruments, Ltd., Malvern, Reino Unido).

2.3. Células

Se utilizaron la línea celular de macrófagos de ratón RAW264.7 y la línea celular dendrítica DC2.4. Las células RAW264.7 se cultivaron en DMEM suplementado con FBS al 10 por ciento y antibióticos. Las células DC2.4 se cultivaron en medio RPMI1640 complementado con FBS al 10 %, antibióticos, aminoácidos no esenciales 1 mM y 2-mercaptoetanol 1 nM. Estas celdas se evaluaron en una atmósfera humidificada de 5 por ciento de CO2 en aire a 37 °C.

2.4. Experimento de absorción celular in vitro

Las células RAW264.7 y las células DC2.4 se sembraron en 24-placas de pocillos (Corning, NY, EE. UU.) a una densidad de 2.0 104 células/pocillo y se cultivaron en 50{ {21}} mL de medio de cultivo. Después de 24- h de preincubación, el medio se reemplazó con medio OPTI-MEM I y las células se incubaron con 5 mg de FITC-OVA y el complejo que contenía 5 mg de FITC-OVA durante 2 h. Después de la incubación, esas células se lavaron con PBS y se observaron bajo un microscopio fluorescente (BIOREVO BZ-9000; Keyence Co., Osaka, Japón). Después de la observación, esas células se lisaron en 300 l de tampón de lisis (pH 7,8 y tampón Tris/HCl 0,1 M que contenía Triton X-100 al 0,05 por ciento y EDTA 2 mM). Los lisados ​​se colocaron en 96-placas de pocillos y se midió la fluorescencia de FITC-OVA a una longitud de onda de emisión de 530 nm con una longitud de onda de excitación de 480 nm, utilizando un lector de microplacas fluorométricas (Infinite-200Pro M-Plex, Tecan Japan Co., Ltd., Kanagawa, Japón). El contenido de proteínas del lisado se determinó mediante un ensayo de Bradford usando BSA como estándar. La absorbancia se midió utilizando el lector de microplacas a 570 nm. La captación de FITC-OVA se indicó como mg por mg de proteína.

2.5. animales

El cuidado de los animales y los procedimientos experimentales fueron realizados por las Directrices para la Experimentación Animal de la Universidad de Nagasaki con la aprobación del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales. Se adquirieron ratones C57BL/6N macho (5 semanas de edad) de Japan SLC (Shizuoka, Japón). Después de ser transportados, se permitió que los ratones se aclimataran a su nuevo entorno durante 1 día antes de los experimentos. La administración pulmonar (40 mL) se realizó mediante el uso de un bajalenguas con luz por respiración espontánea en ratones anestesiados por inhalación de isoflurano (Horiguchi et al., 2015).

2.6. Acumulación pulmonar de complejo

Para examinar la acumulación de OVA, se administraron 40 mg de Alexa647-OVA y el complejo que contenía 40 mg de Alexa647- OVA en un volumen de 40 ml por ratón por vía pulmonar. Seis días después de la administración, se sacrificaron los ratones y se diseccionaron los pulmones. La intensidad fluorescente de Alexa647-OVA en el pulmón del ratón se observó con un sistema Xenogen IVIS Lumina junto con el software Living Image para la adquisición de datos (Xenogen, Co, Almeda, CA, EE. UU.). Después de la observación, esos pulmones se homogeneizaron con tampón de lisis y los homogeneizados se centrifugaron a 15,000 rpm (Kubota-3500, Kubota Corporation, Tokio, Japón) durante 5 min y la fluorescencia de Alexa647 en esos sobrenadantes se determinó con microplaca líder a una longitud de onda de excitación y emisión de 640 y 670 nm, respectivamente.

2.7. Inmunización

Los ratones se inmunizaron con una solución de glucosa al 5 %, 40 mg de OVA, un complejo vacío de 8 mg de BK y 8 mg de c-PGA (vehículo) y un complejo de OVA/BK/c-PGA que contenía 40 mg de OVA por administración pulmonar, 4 veces semanalmente. Dos semanas después de la última inmunización, se obtuvieron líquido de lavado broncoalveolar (BALF) y suero. El BALF y el suero se utilizaron para ensayos de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA).

2.8. Determinación de la inducción de anticuerpos específicos de OVA

Para el recubrimiento con OVA, se agregaron 100 mL de solución de OVA (10 mg/mL, en carbonato ácido de sodio 1 M) a cada pocillo de las placas ELISA (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, EE. UU.) y se incubaron durante la noche a 4 °C. Las placas se lavaron tres veces con solución salina tamponada con fosfato que contenía Tween-20 al 0,05 % (PBST), 200 ml de reactivo de bloqueo N 102 (Nichiyu, Co., Ltd., Tokio, Japón). ) se añadió para bloquear la unión no específica y luego se incubó durante 6 horas a 4 °C. Las placas se lavaron dos veces con PBST. Luego, se agregaron alícuotas de 100 mL de suero diluido 1000-veces y muestras de BALF sin diluir a cada pocillo y se incubaron durante la noche a 4 °C. -ratón IgG, IgA, IgM, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3 (1:10, 000) (Abcam, Cambridge, Reino Unido) - se agregaron a cada pocillo y se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se lavó cinco veces con PBST. Se utilizó la solución TMB One (Promega, WI, EE. UU.) y se preparó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. A continuación, la reacción se detuvo a los 15 min mediante la adición de ácido clorhídrico 1 N. La absorbancia se leyó a 450 nm utilizando un lector de microplacas.

2.9. Toxicidad in vivo del complejo OVA/BK/c-PGA

OVA y el complejo OVA/BK/c-PGA se administraron a ratones por vía pulmonar. BALF se obtuvo 3 y 24 h después de la administración de ratones. Veinticuatro horas después de la administración, también se diseccionó el pulmón. La actividad de lactato deshidrogenasa (LDH) en el BALF se midió utilizando el kit de lactato deshidrogenasa QuantiChromTM (BioAssay Systems, CA, EE. UU.) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las muestras de pulmón se fijaron en una solución tampón de fosfato de paraformaldehído al 4 por ciento. El corte y la tinción con hematoxilina-eosina (HE) se confiaron a GenoStaff (Tokio, Japón). Se observaron secciones del pulmón teñidas con HE mediante microscopía a 20 aumentos.

2.10. análisis estadístico

La significación estadística de las diferencias entre los dos grupos se evaluó realizando la prueba t de Student. Se realizaron comparaciones múltiples entre los grupos mediante la realización de la prueba de Tukey. Los valores de p < 0,05 se consideraron indicativos de significación estadística.

3. Resultados

3.1. Propiedades fisicoquímicas del complejo.

Construimos un complejo aniónico OVA/BK/c-PGA en una relación de peso de 1:0.2:0.2. El complejo revestido con c-PGA tenía un tamaño de partícula de aproximadamente 105,4 nm y un potencial f de aproximadamente 35,5 mV.

3.2. Captación celular del complejo.

Las células RAW264.7 y las células DC2.4 se trataron con el complejo FITC-OVA y FITC-OVA/BK/c-PGA, y se visualizó la captación celular de FITC-OVA, como se muestra en la Figura 1. FITC-OVA/BK/ Las células RAW264.7 y las células DC2.4 absorbieron mucho el complejo c-PGA, y se observó una fuerte fluorescencia verde de FITC-OVA (Figura 1 (A, B), respectivamente). Al mismo tiempo, se observaron pequeñas cantidades de FITC-OVA en ambas células tratadas con FITC-OVA.

Las captaciones celulares de FITC-OVA se cuantificaron en las células RAW264.7 y las células DC2.4 (Figura 1 (C)). El complejo FITC-OVA/BK/c-PGA mostró una captación significativamente mayor que el FITC-OVA en ambas células (p < 0,01).

3.3. Acumulación pulmonar de Alexa647-OVA tras administración pulmonar

Alexa647-OVA y el complejo Alexa647-OVA/BK/c-PGA se administraron a ratones por vía pulmonar para determinar la acumulación pulmonar de Alexa647-OVA como antígeno. Seis días después de la administración, se diseccionaron los pulmones y se visualizó su intensidad de fluorescencia utilizando un sistema Xenogen IVIS Lumina. En la figura 2(A) se muestra una imagen fluorescente ex vivo. Se observó una alta intensidad de fluorescencia en todo el pulmón 6 días después de la administración pulmonar, aunque no hubo intensidad de fluorescencia en el bazo, corazón, riñón e hígado (datos no mostrados). La acumulación pulmonar fue mayor para el complejo Alexa647-OVA/BK/c-PGA que para Alexa647-OVA el día 6. Como se muestra en la Figura 2(B), la acumulación pulmonar fue significativamente mayor para Alexa complejo 647-OVA/BK/c-PGA que para Alexa647- OVA (p < .05).

3.4. Anticuerpo específico de OVA en suero después de la administración pulmonar del complejo

Se administró una solución de glucosa al 5 por ciento, complejo BK/c-PGA (vehículo), OVA y complejo OVA/BK/c-PGA por vía pulmonar a ratones cuatro veces, y luego IgG, IgA, IgM, e IgE se determinaron mediante ELISA como se muestra en la Figura 3. La administración pulmonar de OVA y el complejo OVA/BK/c-PGA aumentó los niveles de IgG en ratones, aunque no se detectó IgG específica de OVA en ratones a los que se administró glucosa al 5 % y vehículo. Además, la producción de IgG e IgA fue significativamente mayor después de la administración del complejo OVA/BK/c-PGA que después de la administración de OVA (p < 0,05 o 0,01). Por otra parte, las IgM e IgE específicas de OVA no fueron inducidas por OVA ni por el complejo OVA/BK/c-PGA.

3.5. Anticuerpo específico de OVA en BALF después de la administración pulmonar del complejo

También se determinaron las IgG, IgA, IgM e IgE específicas de OVA en el BALF, como se muestra en la Figura 4. El nivel de IgG aumentó significativamente con OVA en relación con los niveles después de la administración del control y el vehículo (p < 0,05 o .01). Sin embargo, el complejo OVA/BK/c-PGA aumentó significativamente no solo IgG sino también IgA en el BALF (p < 0,01). Sin embargo, las IgM e IgE específicas de OVA no fueron inducidas por OVA o el complejo OVA/BK/c-PGA.

3.6. Subtipos de IgG en suero después de la administración pulmonar del complejo

Los efectos de inducción de subtipos de IgG específicos de OVA, como IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3 en el suero, se determinaron como se muestra en la Figura 5. En comparación con el control y el vehículo, OVA aumentó significativamente solo IgG1 (p < 0,01). Los niveles de anticuerpos de todos los subtipos inducidos por el complejo OVA/BK/c-PGA fueron significativamente más altos que los niveles inducidos por el control y el vehículo (p < 0,05 o 0,01).

3.7. Subtipos de IgG en BALF tras la administración pulmonar del complejo

También se determinaron los subtipos de IgG específicos de OVA, como IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3 en el BALF, como se muestra en la Figura 6. OVA aumentó significativamente solo los niveles de IgG1 en relación con los inducidos por el control y el vehículo (p < 0,01) . En comparación con el control, el vehículo y OVA, el complejo OVA/BK/c-PGA indujo niveles de anticuerpos significativamente más altos de todos los subtipos (p < 0,05 o 0,01).

3.8. Toxicidad in vivo del complejo OVA/BK/c-PGA

A los ratones se les administró una solución de glucosa al 5 por ciento, OVA y el complejo OVA/BK/c-PGA. La actividad de LDH en el BALF se determinó 3 o 24 h después de la administración (Figura 7). La administración de OVA y del complejo OVA/BK/c-PGA tuvo poco efecto sobre los niveles de LDH en el BALF.

Veinticuatro horas después de la administración, se diseccionaron los pulmones de esos ratones para el análisis histológico. Las secciones de pulmón teñidas con HE se muestran en la Figura 8. No se observaron anomalías histológicas en los ratones tratados con OVA y el complejo OVA/BK/c-PGA.

4. Discusión

El pulmón controla la respiración y está expuesto a muchos patógenos, como virus y bacterias que causan infecciones respiratorias. Esos patógenos infectan a través de la membrana de la mucosa pulmonar, por lo que se debe inducir la inmunidad de la mucosa para proteger contra las infecciones respiratorias. Prevenir las infecciones respiratorias, la inmunidad de las mucosas tiene un papel importante; sin embargo, la administración intradérmica e intramuscular de la vacuna no puede estimular fuertemente la inmunidad de las mucosas (Ito et al., 2003; Amorij et al., 2007). El sistema inmunitario de la mucosa que induce la secreción de IgA se desarrolla en la superficie de la mucosa. Se ha informado que varias APC, como las células dendríticas y los macrófagos, se encuentran en la superficie de la mucosa (Kopf et al., 2015). Además, el tejido linfoide asociado a bronquios (BALT) se encuentra en la mucosa bronquiolar y es un folículo linfoide que tiene un papel central en la inmunidad de la mucosa del tracto respiratorio (Bienenstock, 1980). Se espera que la administración pulmonar de la vacuna estimule eficazmente el sistema inmunitario de las mucosas. Por lo tanto, construimos el complejo OVA/BK/c-PGA para evaluar su utilidad como vacuna administrada por vía pulmonar.

La figura 4 muestra la concentración BALF de anticuerpos específicos de OVA después de la administración pulmonar de OVA y el complejo OVA/BK/c-PGA. La administración pulmonar de OVA aumentó la IgG pero tuvo poco efecto sobre la IgA en BALF. Por otro lado, el complejo OVA/BK/c-PGA indujo significativamente la secreción de IgA en el BALF. Además, la inducción de IgG sérica fue significativamente mayor tras la administración del complejo OVA/BK/c-PGA que tras la administración de OVA (Figura 3). La IgG sérica es importante para prevenir el agravamiento de cualquier infección que ocurra (Huber et al., 2006; Schroeder & Cavacini, 2010). Los resultados indican que el complejo OVA/BK/c-PGA podría prevenir las infecciones respiratorias por la inducción de IgA mucosal alta y el agravamiento de la infección respiratoria por la inducción de IgG sérica alta. Además, no se observó inducción de IgE por el complejo OVA/BK/c-PGA, y este resultado indicó poco riesgo de reacción alérgica por el complejo OVA/BK/c-PGA.

El complejo OVA/BK/c-PGA también podría inducir no solo IgG1 e IgG2b sino también IgG2a e IgG3 (Figura 5). IgG1 e IgG2b se conocen como inmunoglobulinas de tipo Th2-que median la respuesta inmunitaria humoral, e IgG2a e IgG3 se conocen como inmunoglobulinas de tipo Th1-que median la respuesta inmunitaria celular (Firacative et al., 2018) . Por lo tanto, el complejo OVA/BK/c-PGA podría inducir respuestas inmunitarias tanto humorales como celulares. Estos resultados sugieren que este sistema podría ser útil para vacunas contra infecciones y cánceres. El efecto preventivo, las respuestas de citocinas de tipo Th1- y Th2-inducidas por antígeno en BALT inducible, la población Treg y la inducción de IL-10 deben evaluarse utilizando antígenos reales de infecciones o cánceres en el futuro. estudios.

La fuerte inducción de la respuesta inmunitaria por parte del complejo OVA/BK/c-PGA debe deberse a la alta retención del complejo en el pulmón y al suministro eficaz de OVA a las APC en la mucosa pulmonar. Nuestros resultados confirmaron esto al mostrar que 6 días después de la administración, el complejo Alexa647-OVA/BK/c-PGA permaneció en el pulmón y mostró una fluorescencia significativamente mayor que Alexa647- OVA (Figura 2). La formación del complejo podría prevenir la difusión de OVA y proteger a OVA de la degradación por proteasas en la mucosa pulmonar. Además, el complejo OVA/BK/c-PGA fue capaz de administrar OVA de manera efectiva en células de macrófagos RAW264.7 y células dendríticas DC2.4 (Figura 1). Esos resultados indicaron que el complejo OVA/BK/c-PGA sería absorbido por las APC alveolares e induciría una respuesta inmunitaria alta después de la administración pulmonar. Se ha informado que las nanopartículas recubiertas con c-PGA fueron absorbidas por la vía endocitótica mediada por gamma-glutamil transpeptidasa (Du et al., 2015). También confirmamos que las nanopartículas recubiertas con c-PGA fueron absorbidas por la vía endocitótica específica de c-PGA (Kurosaki et al., 2009). El complejo OVA/BK/c-PGA podría ser absorbido por las APC en el pulmón a través de los mismos mecanismos. Sin embargo, aún no está claro qué células son responsables de la captación de OVA y la subsiguiente presentación de antígenos en la inducción de inmunidad específica. En el futuro, se deben realizar más estudios sobre los mecanismos de inducción inmune detallados.

Se han desarrollado muchos adyuvantes para mejorar la eficacia de las vacunas; sin embargo, se ha informado que los adyuvantes provocan reacciones inflamatorias en el lugar de la inyección (Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). Por lo tanto, la administración de adyuvantes en el pulmón puede causar efectos secundarios graves, como neumonía. Después de la administración pulmonar del complejo OVA/BK/c-PGA, los niveles de LDH en BALF no aumentaron (Figura 7) y no se observaron anomalías histológicas en la sección teñida con HE (Figura 8). Según se informa, c-PGA es un polímero biocompatible y biodegradable que no muestra reacciones inmunoinflamatorias (Prodhomme et al., 2003; Ye et al., 2006). BK es un compuesto de amonio cuaternario seguro que ha sido ampliamente utilizado clínicamente como aditivo antimicrobiano (Marple et al., 2004). Estos informes también respaldan la seguridad del complejo OVA/BK/c-PGA. Por otro lado, se observaron niveles de LDH más altos a las 3 h después de la administración pulmonar que a las 24 h, incluso en el grupo control. Esos resultados indican que la administración pulmonar provocó una ligera irritación. Se necesitan más estudios de seguridad antes de la aplicación clínica del complejo OVA/BK/c-PGA.

En el presente estudio, demostramos una alta inducción del sistema inmunitario en las mucosas mediante un nuevo vector de administración de vacunas construido con una proteína antigénica, BK y c-PGA después de la administración pulmonar. El sistema se puede utilizar para vacunas contra diversas infecciones respiratorias.

Declaración de divulgación

Los autores no informaron ningún posible conflicto de intereses.

Fondos

Este trabajo fue apoyado por la Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia (JSPS) KAKENHI mediante subvenciones [JP20K12649 y JP20K07156].

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