La recuperación de células T CD4+ específicas de la vacuna intratumoral infantil coordina las células T CD8+ antitumorales y los eosinófilos
Oct 17, 2023
ABSTRACTO
Fondo
Los mecanismos antitumorales de las células T CD4+ siguen estando poco definidos y faltan medios para aprovechar eficazmente la ayuda de las células T CD4+ para la inmunoterapia contra el cáncer. Las células T CD4+ de memoria preexistentes tienen el potencial de aprovecharse para este propósito. Además, aún no está claro el papel de la inmunidad preexistente en la viroterapia, en particular en la inmunoterapia con poliovirus recombinantes, donde la inmunidad específica de la vacuna contra la polio infantil es ubicua. Aquí probamos la hipótesis de que las células T de memoria específicas de la vacuna infantil median la inmunoterapia antitumoral y contribuyen a la eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio.
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Métodos
Se probaron el impacto de la inmunización contra la polio en la viroterapia contra la polio y los efectos antitumorales de la polio y el tétanos en modelos murinos singénicos de melanoma y cáncer de mama. Eliminación de células T CD8+ y células B, agotamiento de células T CD4+, transferencia adoptiva de células T CD4+, bloqueo de CD40L, evaluaciones de inmunidad de células T antitumorales y el agotamiento de eosinófilos definió los mecanismos antitumorales de los antígenos de recuperación. Se utilizaron conjuntos de datos de transcriptomas pan-cáncer y correlatos de ensayos clínicos de viroterapia contra la polio para evaluar la relevancia de estos hallazgos en humanos.
Resultados
La vacunación previa contra el poliovirus reforzó sustancialmente la eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio en ratones, y la recuperación intratumoral del poliovirus o la inmunidad contra el tétanos retrasó el crecimiento del tumor. Los antígenos de recuperación intratumoral aumentaron la función de las células T antitumorales, causaron una marcada infiltración tumoral de células linfoides innatas tipo 2 y eosinófilos, y disminuyeron las proporciones de células T reguladoras (Treg). Los efectos antitumorales de los antígenos de recuperación estuvieron mediados por células T CD4+, limitados por células B, independientes de CD40L y dependientes de eosinófilos y células T CD8+. Se observó una relación inversa entre las firmas de eosinófilos y Treg en todos los tipos de cáncer del Atlas del genoma del cáncer (TCGA), y el agotamiento de eosinófilos impidió las reducciones de Treg después del retiro de la polio. Los títulos de anticuerpos neutralizantes de la polio previos al tratamiento fueron más altos en los pacientes que vivieron más tiempo y los niveles de eosinófilos aumentaron en la mayoría de los pacientes después de la viroterapia contra la polio.
Conclusión
La inmunidad antipolio preexistente contribuye a la eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio. Este trabajo define el potencial de inmunoterapia contra el cáncer de las vacunas infantiles, revela su utilidad para activar la ayuda de las células T CD4+ para las células T CD8+ antitumorales e implica a los eosinófilos como efectores antitumorales de las CD4+ Células T.
INTRODUCCIÓN
Aunque las células T CD4+ son mediadores clave de la memoria y la funcionalidad inmunitaria adaptativa, faltan entre 1 y 3 rutas para aprovechar su potencial para la inmunoterapia contra el cáncer. La memoria inmune adaptativa permite respuestas inmunes sólidas a patógenos encontrados previamente. En consecuencia, las respuestas de recuerdo, es decir, la activación de las células de memoria adaptativa por un antígeno afín, orquestan la inflamación innata y adaptativa localizada.4 5 Basado en un trabajo reciente que demuestra la utilidad de la inmunoterapia contra el cáncer de las respuestas de las células T CD antivirales intratumorales8+ , 6 7 planteamos la hipótesis de que la recuperación de células T CD4+ localizadas en tumores y asociadas a vacunas infantiles puede activar funciones antitumorales de las células T CD4+. PVSRIPO (ahora conocida como 'Lerapolturev'), la vacuna contra la poliovirus vivo atenuado tipo 1 (Sabin) modificada con el sitio de entrada ribosómica interna del rinovirus humano tipo 2,8 ha mostrado evidencia temprana de eficacia en el glioblastoma recurrente (rGBM)9 y , melanoma no resecable10 11 después de la administración intratumoral (it). La vacunación contra el poliovirus (polio) forma parte del calendario estándar de vacunación pediátrica a nivel mundial, ya sea con vacunas vivas atenuadas (Sabin) o inactivadas (IPOL). La secuencia codificante de PVSRIPO es idéntica a la de la vacuna Sabin tipo 1. Se confirmó la reactividad sérica preexistente de los anticuerpos anti-PVSRIPO/polio en todos los pacientes que recibieron la terapia PVSRIPO.9 10 12 Además, el uso clínico de PVSRIPO implica un refuerzo previo con IPOL trivalente al menos 1 semana antes de su administración, lo que provocó la neutralización sérica de PVSRIPO. los anticuerpos aumentan en todos los pacientes.9 10 Los efectos antitumorales de la viroterapia contra la polio abarcan el daño celular neoplásico y la infección viral subletal de las células mieloides que impulsan la señalización sostenida del interferón tipo I (IFN).12–15 La memoria inmune contra la polio probablemente impide la replicación de PVSRIPO dentro del tumor, pero puede proporcionar un mecanismo de acción antitumoral alternativo mediante la recuperación de células T específicas de la vacuna contra la polio. Utilizando modelos tumorales de melanoma y cáncer de mama en ratones, demostramos que la inmunidad preexistente a la polio potencia la eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio al activar las funciones antitumorales de las células T CD4+. La recuperación de la polio o el tétanos desencadenó células T CD4+ marcadas, células linfoides innatas tipo 2 (ILC2) y afluencia de eosinófilos; mediando la eficacia antitumoral a través de células T CD8+ y eosinófilos de manera independiente de CD40L. En cohortes de pacientes con rGBM tratados con Lerapolturev (PVSRIPO), niveles más altos de anticuerpos neutralizantes de la polio antes del tratamiento se asociaron con una supervivencia más larga, y se observó una inducción periférica de eosinófilos en pacientes con melanoma después del tratamiento con Lerapolturev. Por lo tanto, la viroterapia contra la polio y los antígenos asociados a la vacuna infantil coordinan la inmunidad antitumoral de tipo I y II mediante la recuperación de células T CD4+.
Beneficios del suplemento cistanche: aumentar la inmunidad.
MATERIALES Y MÉTODOS
Los materiales y métodos ampliados se presentan en información complementaria en línea.
Ratones, líneas celulares, virus, poli(I:C) y anticuerpos de grado in vivo
(Tokio, Japón). Ratones de tipo salvaje (peso) (#000664), CD8 knockout (k/o) (#002665), células B k/o (#002288), OT-I (#003831) y CD45.1 C57BL/6 (# 002014) eran del Laboratorio Jackson. Se cruzaron ratones OT-I y CD45.1 C57BL/6 para generar ratones CD45.1+OT-I. B16.F10 (Colección Americana de Cultivos Tipo), E0771 (G. Palmer, Universidad de Duke, EE. UU.), E0771hCD155, B16.F10hCD155 y B16. Se cultivaron células F10.9hCD155-OVA en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, Gibco) con alto contenido de glucosa que contenía suero bovino fetal (FBS) al 10 % (Sigma-Aldrich). B16. Se derivaron previamente células F10.9hCD155-OVA, B16-F10hCD155 y E0771hCD155.12 13 Se confirmó que todas las líneas celulares eran negativas para micoplasmas. Se generaron PVSRIPO de laboratorio, PVSRIPO adaptado a ratón (mRIPO) y PVSRIPO inactivado por UV (UVP) en células HeLa, seguido de una purificación por exclusión de tamaño del sobrenadante resultante como se describió anteriormente.12 13 Se usó PVSRIPO para la vacunación; La UVP se utilizó para aislar los efectos de la cápside de la polio (que contiene epítopos específicos de la vacuna contra la polio); mRIPO es una versión de PVSRIPO adaptada a ratones que se utilizó para probar el impacto total de la viroterapia contra la polio en ratones. Se reconstituyó poli(I: C) de alto peso molecular VacciGrade (InvivoGen) según las instrucciones del fabricante. Anticuerpos de grado in vivo contra interleucina (IL)-5 (TRFK5) o control (HRPN), CD4 (GK1.5) o control (LTF-2), CD40L (MR-1) o el control (#BP0091) y CD40 (FGK4.5) o el control (2A3) eran de Bio X Cell.
Vacunas, inmunizaciones y títulos virales.
A menos que se indique lo contrario, las vacunas que utilizan PVSRIPO (1×107 unidades formadoras de placa (ufp)/ratón), toxoide tetánico (Tet) (MilliporeSigma; 0,5 µg/ratón) o lapa californiana con hemocianina (KLH, Sigma -Aldrich; 100 µg/ratón) se diluyeron en solución salina tamponada con fosfato (PBS) con Alhidrogel (1:1; InvivoGen); Se administraron 50 µL de vacuna bilateralmente en los músculos cuádriceps. Se administraron unilateralmente inmunizaciones combinadas de IPOL y Tenivac (Sanofi Pasteur) para cada vacuna. Los refuerzos de la vacuna se produjeron 14 días después. Para los títulos virales, los tumores se recogieron, pesaron y homogeneizaron mecánicamente en 1 ml de PBS. El homogeneizado se analizó mediante ensayo de placa.16
Experimentos con modelos de tumores murinos.
Beneficios de la cistanche tubulosa-Antitumoral
Para las implantaciones de B16, se implantaron 2 × 105 células por vía subcutánea en el flanco de ratones machos y hembras; para las implantaciones de E0771, se implantaron 5 x 105 células en la cuarta almohadilla de grasa mamaria de ratones hembra. Se utilizaron ratones hCD155-tg C57BL/6 con mRIPO para recapitular la viroterapia contra la polio (replicación viral activa ± inmunidad preexistente); mientras que se utilizaron ratones wt C57BL/6, que no son permisivos a la polio, con UVP para aislar los efectos de la recuperación de la polio. Los tumores se trataron con DMEM o PBS (vehículo), mRIPO (1 x 107 pfu), UVP (1 x 108 pfu preinactivados), Tet (0,5 µg) y/o poli(I: C) (30 µg) como se indica. en leyendas de figuras. Los grupos de tratamiento se aleatorizaron según el volumen del tumor (mediciones con calibre, utilizando la ecuación L × W × W/2) el primer día de tratamiento. Los ratones fueron sacrificados cuando el volumen del tumor excedía los 1000 mm3, a menos que estuviera precedido por una ulceración (que era poco frecuente y no estaba asociada con ningún tratamiento en particular), en cuyo caso los ratones fueron excluidos del estudio. Los tamaños de los grupos se basaron en evaluaciones de potencia de experimentos piloto o experiencias previas.12 Las mediciones del tumor se realizaron de forma ciega al grupo de tratamiento con it, comenzando después de la última dosis de terapia/antígeno. Se excluyeron los ratones con un volumen tumoral inicial atípico en el momento de la aleatorización (1 DE de la media).
Análisis de citometría de flujo de tumores.
Los tumores se recolectaron en los puntos temporales indicados en las leyendas de las figuras y se disociaron en medio RPMI-1640 (Thermo Fisher) que contenía 100 µg/ml de Liberase-TM (Sigma-Aldrich) y 10 µg/ml de ADNasa I (Roche) durante 30 minutos a 37 grados. , seguido del paso a través de un filtro celular de 70 µM (Olympus Plastics), centrifugación y lavado en PBS. Para los experimentos que utilizaron Zombie Aqua (BioLegend), las células se tiñeron con Zombie Aqua en PBS (1:500) siguiendo las instrucciones del fabricante. Luego, las suspensiones celulares se incubaron con TruStain FcX (BioLegend) de ratón 1:50 seguido de tinción específica del panel en PBS que contenía FBS al 2%. La tinción de factores de transcripción intracelulares, citocinas y granzima B se realizó utilizando el conjunto de tampones de tinción Foxp3/factor de transcripción (Thermo Fisher) siguiendo las instrucciones del fabricante. Consulte la información complementaria en línea para obtener información sobre los paneles y los anticuerpos utilizados. Los datos se recopilaron en un Fortessa X20 en las instalaciones centrales de citometría de flujo del Duke Cancer Institute; Los archivos FCS se analizaron utilizando FlowJo V.10 (BD Biosciences). Las estrategias de activación se presentan en información complementaria en línea; Para definir la positividad se utilizaron controles de isotipo, controles de fluorescencia menos uno y comparación con poblaciones de células negativas establecidas.
Análisis asociados a ensayos clínicos.
Los ensayos de títulos de neutralización de PVSRIPO se realizaron según el protocolo del ensayo clínico9, y los valores para ambos ensayos clínicos de rGBM se utilizaron a partir de los ensayos de inscripción en ensayos clínicos. Los títulos de polio de fase I rGBM (NCT01491893) se informaron previamente y la supervivencia se actualizó el 29 de abril de 2020; La supervivencia de la fase II (NCT02986178) se actualizó el 27 de abril de 2021. Melanoma (NCT03712358)10 11 Los porcentajes de glóbulos blancos de los participantes en el ensayo clínico se adquirieron a partir de pruebas clínicas de hemograma completo (CBC).
Análisis estadístico y cohortes de ensayos clínicos.
Las pruebas estadísticas específicas del ensayo se indican en las leyendas de las figuras correspondientes. Se utilizó GraphPad Prism V.8 para realizar análisis estadísticos. Se utilizó un análisis de varianza bidireccional (ANOVA) para evaluar la diferencia en el crecimiento tumoral a lo largo del tiempo entre los grupos, y se utilizó una prueba ANOVA post hoc para tener en cuenta comparaciones múltiples, a menos que se indique lo contrario en la figura y/o en la leyenda de la figura. Una probabilidad estadística de (p<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
RESULTADOS
La inmunización contra la polio potencia la viroterapia contra la polio
Primero probamos la producción de anticuerpos contra la polio (es decir, seroconversión) en ratones transgénicos para el receptor CD155 del virus de la polio humano (hCD155-tg) tras la inmunización con IPOL o PVSRIPO (para imitar el Sabin tipo 1) con y sin adyuvante de alumbre ( Alhidrogel; ALH), parte de formulaciones de vacunas autorizadas (p. ej., Pentacel, Pediarix, Kinrix).17 45 días entre la inmunización inicial y la implantación del tumor permitieron el establecimiento de una memoria inmunológica.18 IPOL logró una seroconversión limitada y la inmunización con PVSRIPO provocó una mayor respuesta de anticuerpos; ALH reforzó las respuestas de anticuerpos a ambos (figura complementaria en línea S1A, B). Para recapitular los altos niveles de anticuerpos antipolio en pacientes con cáncer,9 elegimos la vacunación PVSRIPO+ALH (en adelante, 'polio') para determinar el papel de la inmunidad preexistente contra la polio en la inmunoterapia PVSRIPO. Anteriormente se desarrollaron modelos de tumores murinos y ratones que expresaban hCD155 para permitir la entrada y replicación de PVSRIPO, y PVSRIPO se adaptó a células murinas para recapitular la replicación viral en células cancerosas murinas (mRIPO).13 19 En estudios anteriores en personas sin tratamiento previo con la vacuna contra la polio, En modelos de tumores de ratón singénicos, una única inyección it de mRIPO requería el bloqueo de la proteína de muerte celular programada-1 (PD1)/ligando de muerte programada-1 o la expresión tumoral de la proteína inmunogénica ovoalbúmina (OVA) para mediar efectos antitumorales duraderos. .12 13 Sin embargo, mRIPO medió una eficacia antitumoral duradera en ratones inmunizados contra la polio en modelos de cáncer de melanoma (B16) y de mama (E0771), en relación con sus homólogos inmunizados de control (KLH) (figura 1A, B, figura complementaria en línea S1C) . Por tanto, la vacunación previa contra la polio refuerza la eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio. La viroterapia contra la polio se asocia con la inflamación de las células T dentro del tumor.12 13 La replicación de mRIPO dentro de los tumores se redujo sustancialmente en ratones inmunizados contra la polio 2 días y 5 días después del tratamiento (figura 1C, D), lo que coincide con un nivel alto de anticuerpos neutralizantes. títulos (figura complementaria en línea S1B). Sin embargo, observamos un aumento de la densidad total de células inmunes (CD45.2+ ) en ratones inmunizados contra la polio después de la terapia mRIPO, explicado en gran medida por una afluencia de células T CD4+ convencionales y células mieloides (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+ ) (figura 1E, figuras complementarias en línea S2A, S3). El análisis posterior reveló que el aumento de células mieloides CD11b+ en ratones inmunizados contra la polio tratados con mRIPO eran eosinófilos (figura 1F); Los niveles de células dendríticas (CD) no se alteraron significativamente. Niveles elevados de factor de necrosis tumoral (TNF), factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), IL-1 e IL-17A en el homogeneizado tumoral y niveles más altos de IL-4 e IL{ {51}} en cultivos de ganglios linfáticos de drenaje tumoral (TDLN) explantados de ratones inmunizados contra la polio tratados con mRIPO indicaron distintas respuestas inflamatorias después de la terapia con mRIPO (figura complementaria en línea S2B). GM-CSF e IL-5 son inductores conocidos de la producción y el reclutamiento de eosinófilos,20 lo que posiblemente explica la afluencia de eosinófilos en los tumores (figura 1F). También se observaron células T CD4+ convencionales e infiltración de eosinófilos en respuesta al tratamiento con mRIPO de ratones inmunizados contra la polio en un modelo separado, E0771 (figura complementaria en línea S2C, D). Por tanto, la inmunidad preexistente a la polio acentúa las respuestas inflamatorias a mRIPO que se asocian con una mayor eficacia antitumoral.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000 mm3; consulte la figura complementaria en línea S1C; representativo de dos experimentos. (C) Esquema para experimentos en D – H. (D) Títulos virales del homogeneizado tumoral post-mRIPO; ND, no detectado. (E) Análisis de citometría de flujo de tumores en el día 7 (n=13/grupo simulado; n=14/grupo mRIPO). (F) Análisis de citometría de flujo para células mieloides y células dendríticas (DC: Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) el día 11. (G) Marcadores de activación en TIL los días 7 y 12; se agruparon a partir de dos experimentos; Se muestran los valores medios de KLH-DMEM. (H) Expresión del factor de transcripción TIL en el día 12; mismas muestras que el día 12 de (A); Se muestran datos representativos de tres repeticiones. Consulte las figuras complementarias en línea S1 a S4 para obtener datos ampliados. (E – H) Prueba post hoc de Tukey p< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
Fenotipos funcionales de células T aumentadas en ratones inmunizados contra la polio tratados con mRIPO
Los linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) CD8+ y CD4+ en ratones vacunados contra la polio expresaron niveles más altos de IFN-, TNF y granzima B intracelular después del tratamiento con mRIPO, lo que implica un estado funcional mejorado (figura 1G). , figura complementaria en línea S4). Los TIL de ratones inmunizados contra la polio tratados con mRIPO también mostraron una mayor expresión de los factores de transcripción T-bet, GATA3 y ROR t; así como la inducción de IRF4, un promotor de la activación y función de las células T (figura 1H).21 Expresión de los marcadores de agotamiento de las células T PD1 y la inmunoglobulina de las células T y la proteína 3 que contiene el dominio de mucina (TIM3) en CD{{20 }} Se redujeron las células T en el tumor y los TDLN de ratones vacunados contra la polio tratados con mRIPO (figura complementaria en línea S2E). Los cambios en los marcadores de activación/diferenciación de células T fueron consistentes en el modelo de cáncer de mama ortotópico E0771 (figuras complementarias en línea S2F, G). Por lo tanto, las respuestas de recuerdo a la polio aumentan los fenotipos funcionales en los TIL después de la viroterapia intratumoral contra la polio.
Los antígenos de recuperación de la polio y el tétanos median la eficacia antitumoral
Las células T CD8+ de memoria específicas del reovirus matan directamente las células cancerosas infectadas con reovirus durante la terapia oncolítica con reovirus,22 y las células T CD4+ de memoria específicas del tétanos matan las células cancerosas infectadas con Listeria que expresa Tet.23 Alternativamente, Las respuestas inflamatorias causadas por la memoria de las células T en el microambiente tumoral (TME) también pueden reforzar la vigilancia inmune.6 7 Nuestra hipótesis es que la inflamación inducida por la memoria explica la acentuada eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio en ratones vacunados contra la polio desde la replicación viral. requerido para la producción de antígeno viral en células tumorales, oncólisis e inflamación antiviral12, se redujo drásticamente en ratones inmunizados contra la polio (figura 1D). Para probar los efectos antitumorales de la recuperación de la polio en el TME, utilizamos un modelo sin hCD155 (ratones y tumores; ratones wt C57BL/6) y tratamos los tumores con PVSRIPO (UVP) inactivado por UV para impedir la infección/replicación viral. Incluimos comparaciones con otro antígeno de recuperación asociado a la vacuna, Tet, que se ha demostrado que media en los efectos antitumorales en otros estudios.23 24 La terapia con UVP ejerció eficacia antitumoral exclusivamente en ratones inmunizados contra la polio; El tratamiento con Tet medió efectos antitumorales transitorios en ratones inmunizados con Tet (figura 2A-C, archivo complementario en línea 1). Las respuestas de recuerdo natural ocurren en presencia de una respuesta inmune innata localizada a la replicación del patógeno. Para imitar esto, se trataron ratones inmunizados con Tet o contra la polio con poli(I:C) solo o en combinación con UVP o Tet. Tanto la UVP como el Tet mediaron efectos antitumorales pronunciados en este contexto (figura 2D). Estos datos revelan que la recuperación de las células T de memoria en el TME, independientemente de la expresión/presentación del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de su antígeno afín por parte de las células malignas, media la eficacia antitumoral.
Las células T CD4+ median la eficacia antitumoral de los antígenos de recuperación
Para determinar qué compartimento(s) adaptativo(s) explica(n) la eficacia antitumoral de las respuestas de recuperación de la polio (independiente de la replicación viral), comparamos el tratamiento con UVP en ratones k/o de células T CD8+ y células B en relación con el peso. ratones (figura 3A). No se probaron ratones CD4 k/o debido a la función de las células T CD4+ a la hora de permitir respuestas de las células T CD8+ y de las células B a la vacunación. Como se esperaba, la inmunización contra la polio en ratones WT y CD8 k/o, pero no en ratones k/o de células B, condujo a la producción de anticuerpos anti-PVSRIPO (figura 3B). El crecimiento del tumor B16 fue similar en cada contexto genético después del tratamiento simulado. En relación con los ratones wt, la eficacia antitumoral de la UVP en ratones inmunizados contra la polio fue limitada en ratones CD8 k/o en momentos posteriores, pero aumentó en ratones k/o de células B (figura 3C; p=0.007wt vs curvas tratadas con UVP k/o de células B, ANOVA de dos vías). Además, la k/o de células B no impidió la entrada de eosinófilos o CD4+ TIL (figura complementaria en línea S6A) asociada con el recuerdo de la polio (figura 1). Por tanto, la eficacia antitumoral de la recuperación de la polio depende parcialmente de las células T CD8+ y está limitada por las células B. Estas observaciones, junto con el aumento de CD4+ TIL después de la terapia mRIPO en ratones inmunizados contra la polio (figura 1E), implican que las células T CD4+ dictan la eficacia antitumoral de las respuestas de recuerdo de la polio. Por lo tanto, a continuación probamos el efecto antitumoral de la recuperación de la polio con y sin agotamiento transitorio de células T CD4+ (figura 3D, inicio del pretratamiento 1-día). A pesar del fuerte agotamiento de las células T CD4+ en el TDLN, el agotamiento de las células T CD4+ dentro del tumor fue incompleto y redujo preferentemente las poblaciones de células T reguladoras (Treg), lo que posiblemente explica los modestos efectos antitumorales y el aumento de la CD. 8+ Densidades de células T después del agotamiento de células T CD4+ (figura 3D, figura complementaria en línea S6B). No obstante, el agotamiento de las células T CD4+ casi eliminó la eficacia antitumoral de la UVP en ratones inmunizados contra la polio y evitó el reclutamiento de eosinófilos en respuesta a la UVP (figura 3D); El agotamiento de las células T CD4+ también impidió la inducción de la granzima B en las células T CD8+ después del tratamiento con UVP (figura complementaria en línea S6B). En conjunto, estos hallazgos indican que los efectos antitumorales e inflamatorios de la recuperación de la polio dependen de las células T CD4+. Confirmando que las células T CD4+ específicas de la polio son suficientes para potenciar la eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio (con replicación viral activa), la transferencia adoptiva de células T CD4+ de bazos de ratones inmunizados contra la polio, pero no el de Tet, reforzó la eficacia antitumoral de mRIPO (figura 3E, figura complementaria en línea S6C).
Recuerda que la terapia con antígenos potencia la función antitumoral de las células T CD8+
Se demostró que las células T CD4+ específicas de tumores destruyen directamente las células tumorales,25–27 atacan a las células inmunes innatas citotóxicas,28 29 y brindan ayuda a las células T CD8+ efectoras.1–{ {7}} De acuerdo con lo último, se observaron efectos antitumorales de los antígenos de recuperación después de su administración al TME (figuras 2 y 3), que dependían parcialmente de las células T CD8+ (figura 3C) y de las células CD{{12). }} Los TIL habían mejorado los fenotipos polifuncionales después de la terapia mRIPO en ratones vacunados contra la polio (figura 1G).
Figura 2 Los antígenos de recuperación de la polio y el tétanos median la eficacia antitumoral. Se trataron ratones portadores de tumores B16 (A) o E0771 (B) inmunizados con polio o Tet intratumorales con Tet o PVSRIPO (UVP) inactivado por UV. (C) Se trataron ratones inmunizados con Tenivac e IPOL de la misma edad con PBS, Tet o UVP. (D) Los ratones inmunizados como en (A, B) se trataron intratumoralmente con poli(I:C) (30 µg), poli(I:C) + Tet o poli(I:C) + UVP como se muestra. (A – D) Se muestra la media + SEM de un experimento representativo de al menos dos repeticiones; los asteriscos indican la prueba de Dunnett p< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
Por lo tanto, a continuación intentamos determinar si la polio (UVP) y la recuperación de Tet mejoran la función de las células T CD8+ antitumorales. Con este fin, transferimos adoptivamente células T CD45.1+OT-I CD8+ (específicas de OVA) a ratones vacunados contra la polio o Tet y determinamos el impacto de la recuperación inducida por UVP y Tet en B{. {7}}Fenotipos de OVA OT-I TIL (figura 4A). La inducción de respuestas de recuerdo en el tumor después de UVP o Tet se asoció con un retraso en el crecimiento del tumor y una mayor infiltración tumoral de células CD45.2+ endógenas, eosinófilos y células T CD4+ convencionales; en particular, los niveles de células T OT-I antitumorales aumentaron de manera no significativa (figura 4B). Sin embargo, el análisis de las células T OT-I CD8+ que se infiltran en el tumor reveló un aumento de granzima B, TNF e IFN-; y expresión reducida del marcador de agotamiento terminal TIM3 después de la polio o el retiro de Tet (figura 4C). Se observó una expresión variada del factor de transcripción asociado a Th tanto en OT-I como en células T endógenas, incluida la de GATA3, ROR t y BCL6 (figura 4C). El análisis transcriptómico de los OT-I TIL después del retiro de la polio reveló una mayor expresión de granzimas; genes relacionados con la activación, función u homeostasis de las células T (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 y BCL6); genes asociados con la inmunidad Th1 (Ptger4, Fgl2); así como genes asociados con la inmunidad Th2 (Alox15, Ccl8 y GATA3) (figura 4D, figura 8C complementaria en línea). Confirmamos estas observaciones probando el impacto de la recuperación de la polio en los CD8+ TIL endógenos específicos de TRP2- (un antígeno endógeno B16) en tumores B16 sin expresión de OVA. Los CD8+ TIL específicos de TRP2-exhibieron un aumento de la granzima B y una expresión reducida de TIM3 después de la recuperación de la polio de una manera dependiente de las células T CD4+ (figura S9 complementaria en línea). En conjunto, estos datos indican fenotipos citolíticos y funcionales mejorados de las células T antitumorales después del retiro de la polio. Al demostrar funcionalmente una inmunidad mejorada de las células T antitumorales después de su recuperación, las células T aisladas de bazos de ratones tratados con su antígeno de recuperación (UVP en vacunados contra la polio o Tet en vacunados con Tenivac) retrasaron el crecimiento del tumor después de la transferencia a receptores sin tratamiento previo (figura 4E). Las células T CD4+ ayudan a promover la función de las células T CD8+ antitumorales en parte a través de la señalización CD40L a CD40 en las células presentadoras de antígenos,1 pero también pueden ayudar a las células T CD8+ antitumorales independientes de CD40L.31 El bloqueo de CD40L no previno la afluencia de eosinófilos inducida por UVP, células T CD4+ convencionales o OT-I antitumorales; tampoco antagonizó los efectos antitumorales (figura complementaria en línea S10). Además, la ligadura de CD40 no recapituló la afluencia de eosinófilos observada después de la terapia con antígenos de recuerdo (figura complementaria en línea S10). Por lo tanto, la recuperación de células T CD4+ potencia la función antitumoral de las células T CD8+ antitumorales de una manera independiente de CD40L.
Figura 3 Las células T CD4+ median la eficacia antitumoral del recuerdo de la polio. (A) Diseño para experimentos en (B, C). (B) ELISA para anticuerpos antipolio en cada origen genético el día 0 (n=4/grupo). (C) Volumen tumoral medio+SEM después del tratamiento simulado (izquierda) o tratamiento simulado versus UVP (paneles de la derecha) para cada contexto de genotipo; Los valores de p provienen de la comparación del análisis de varianza bidireccional (ANOVA) de UVP con el grupo de control. (D) Los ratones inmunizados contra la polio se trataron con simulación o UVP como en (A), con inyecciones intraperitoneales (ip) de IgG (control) o anticuerpo agotador de células T CD4+ (250 µg administrados cada 3 días a partir del día −1); Se muestran el volumen medio del tumor + SEM y el análisis de citometría de flujo de las células T CD4 infiltrantes del tumor y los eosinófilos; n=9 por grupo; el valor de p proviene de un ANOVA de dos vías que compara UVP IgG versus UVP CD4; (*) indica la p post hoc de Tukey<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
Figura 4 La terapia con antígenos de recuperación intratumoral potencia la función antitumoral de las células T CD8+. (A) A ratones inmunizados contra la polio o Tet (Tenivac) se les implantaron tumores B16-OVA, seguido de una transferencia adoptiva de células OT-I activadas (CD45.1+) y tratamiento con Tet o UVP. . (B) Análisis de volumen tumoral y citometría de flujo de células inmunes (B) y subconjuntos de TIL (C); La figura complementaria en línea S7 presenta la activación de OT-I TIL. (D) Se analizaron los transcriptomas de OT-I TIL aislados de ratones inmunizados contra la polio 12 días después del tratamiento (DMEM o UVP). Se muestran los recuentos normalizados medios centrados y escalados para las transcripciones que fueron significativamente diferentes después del ajuste del valor p de la tasa de descubrimiento falso en dos experimentos separados (panel superior, n=4/grupo y n=3/grupo, respectivamente ) o para características relevantes para (C) que se acercaron a la importancia en ambos conjuntos de datos, incluidas las granzimas, IRF4, BCL6 y GATA3 (panel inferior); n=4 réplicas/grupo se muestran en un mapa de calor. La figura complementaria en línea S8B y C presenta recuentos normalizados para muestras individuales y datos ampliados. (E) Progresión tumoral en ratones vírgenes transferidos adoptivamente con células T del bazo de ratones en A – C. Se muestra el volumen medio del tumor + SEM; el valor p proviene de un análisis de varianza bidireccional. Todas las barras de datos representan media+SEM; los mapas de calor en (C) se normalizaron multiplicando el promedio del control de antígeno no coincidente; Prueba post hoc de Tukey p<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
Los eosinófilos que se infiltran en tumores se asocian inversamente con Tregs en tumores humanos
La participación de otros efectores inmunitarios antitumorales a través de la secreción de citoquinas es un mecanismo clave independiente de CD40L de las células T CD4+.31 32 La cápside de la polio (UVP) y la viroterapia (mRIPO) causaron consistentemente una sólida infiltración de eosinófilos ( figuras 1, 3 y 4), de manera dependiente de las células T CD4+ (figura 3D). La afluencia de eosinófilos tumorales se asocia con la respuesta a la inmunoterapia,33–35 y un trabajo reciente demostró que las células T CD4+ incorporan funciones antitumorales de los eosinófilos después del bloqueo de PD1 mediante IL-5.36 Primero, preguntamos si la densidad de eosinófilos se correlaciona con el de las células T CD4+ u otras características en el TME de tumores humanos consultando un conjunto de datos pan-cáncer del Atlas del Genoma del Cáncer (TCGA).37 Utilizando la predicción CIBERSORT38 de infiltrados celulares,37 muestras de cada tipo de cáncer se estratificaron según la presencia o ausencia de firmas de expresión del gen de eosinófilos detectadas (figura 5A, figura complementaria en línea S11,12); Los tumores de células germinales testiculares (TGCT) y el melanoma uveal (UVM) se excluyeron debido a los casos limitados con enriquecimiento de eosinófilos (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
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Inmunidad antitumoral tipo II después del tratamiento con mRIPO de ratones inmunizados contra la polio
A continuación, intentamos determinar la importancia de la infiltración de eosinófilos después del recuerdo de la polio en ratones. Los eosinófilos son mediadores de las respuestas inmunitarias de tipo II, que desempeñan funciones en la inmunidad antihelmíntica y la inflamación alérgica.39 El reclutamiento de eosinófilos puede estar mediado por otros mediadores inmunitarios de tipo II, incluidos los ILC2, que coordinan las respuestas Th2 a través de interacciones directas con las CD{{4} } Las células T,40 expresan el factor de transcripción GATA3 y la citocina promotora de eosinófilos IL-5, pero carecen de expresión del receptor de células T. De hecho, las células GATA3+ CD3Neg aumentaron en tumores de ratones después de su recuperación (figura 5C), lo que posiblemente refleja la afluencia de ILC2. A continuación, probamos cómo los eosinófilos impactan la viroterapia contra la polio (mRIPO) en ratones inmunizados contra la polio y medimos las ILC2 directamente. El agotamiento de eosinófilos (a través de la neutralización de IL-541) mitigó los efectos antitumorales de mRIPO en ratones inmunizados contra la polio portadores de B16-OVAhCD155 (figura 5D, E); no redujo la afluencia de células T CD4+; pero bloqueó las reducciones en la proporción de Treg (figura 5F). Además, la viroterapia contra la polio (mRIPO) provocó la afluencia de ILC2 (figura 5F) y fenotipos alterados de ILC2 en ratones inmunizados contra la polio, con IL-5 reducida e inducida expresión de PD1 y granzima B (figura 5G). Además de su papel en el control de los niveles de eosinófilos, la IL-5 también es fundamental para la diferenciación de las células B.42 Sin embargo, dado que los efectos antitumorales de la recuperación de la polio son independientes de las células B (y posiblemente contrarrestados por ellas) (figura 3C), y debido a la infiltración consistentemente robusta de eosinófilos en la recuperación de la polio, llegamos a la conclusión de que la neutralización de IL-5 disminuye los efectos antitumorales de la recuperación de la polio a través del agotamiento de eosinófilos. En conjunto, estos datos demuestran funciones antitumorales para los eosinófilos y el reclutamiento de ILC2 con fenotipos alterados después del retiro de la polio e implican que los eosinófilos regulan sus densidades Treg.
Los anticuerpos antipolio preexistentes se asocian con una supervivencia más prolongada después del tratamiento con Lerapolturev (PVSRIPO); Los eosinófilos periféricos aumentan después de Lerapolturev.
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 meses después de Lerapolturev (la mediana de supervivencia típica en rGBM es de aproximadamente 9 meses)9 43 tuvieron títulos de anticuerpos neutralizantes previos al tratamiento significativamente más altos (figura 6A, B). Para determinar si las respuestas inmunitarias de tipo II pueden participar o no en pacientes tratados con viroterapia contra la polio, analizamos los hemogramas longitudinales disponibles de un pequeño ensayo de aumento de dosis de Lerapolturev en melanoma recurrente e irresecable (fase I, n=12) .10 11 Estos datos revelaron un aumento de los niveles de eosinófilos en sangre después de Lerapolturev en 8/12 pacientes (figura 6C), coincidiendo con una reducción de los neutrófilos (10/12 pacientes). Estos hallazgos pueden indicar que la inmunidad preexistente contribuye a la eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio y que la viroterapia contra la polio induce respuestas inmunes de tipo II en pacientes con cáncer.
Figura 5 Los eosinófilos se asocian inversamente con las Treg en tumores humanos; mRIPO induce inmunidad antitumoral tipo II en ratones inmunizados contra la polio. (A) Subconjuntos de células T desconvolucionadas CIBERSORT en los tipos de cáncer del Atlas del Genoma del Cáncer (n=29) estratificados por estado de eosinófilos, valores de p de la prueba t pareada. (B) HR (supervivencia) ± IC del 95 % para el estado de eosinófilos por tipo de cáncer; se excluyeron los tipos de cáncer con menos de 20 muertes; Los valores de p provienen de la prueba de rangos logarítmicos de Mantel-Cox. (C) Porcentaje de células GATA3+ CD3Neg de los datos de la figura 4C, los valores de p son de la prueba t no apareada. (D) Diseño para (E–H): ratones transgénicos hCD155- portadores de tumor B16-OVAhCD155 inmunizados contra la polio fueron tratados con simulación o PVSRIPO ± agotamiento de eosinófilos (anti-IL-5 o IgG de control, 1 mg semanal). Volumen tumoral medio + SEM (E), densidad de eosinófilos y ILC2 en tumores (F) y fenotipo de ILC2 infiltrantes de tumores (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+) versus linaje CD negativo Se muestran 90+ celdas para comparación (G). (E) (*)Análisis de varianza bidireccional p<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
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DISCUSIÓN
Este trabajo revela el potencial de inmunoterapia contra el cáncer de la recuperación de células T CD4+ localizadas en tumores. La ayuda de las células T CD4+ es clave para generar inmunidad de células T antitumorales8+CD1 44 y memoria a largo plazo.2 45CD antitumoral8+ Las células T exhibieron mayores fenotipos polifuncionales después de la recuperación, la transferencia adoptiva de células T de ratones tratados con antígenos de recuperación retrasó el crecimiento tumoral en receptores ingenuos y los efectos antitumorales de la UVP se atenuaron en ratones inmunizados contra la polio que carecían de células T CD8+. Esto indica que el suministro de células T CD4+ ayuda a las células T CD8+ antitumorales. De hecho, la ayuda de las células T CD4+ está relacionada con la regulación negativa de los marcadores de agotamiento, la expresión elevada de TNF/IFN-/granzima B y la inducción de Tbet/IRF4 en las células T efectoras "ayudadas",3 todo lo cual ocurrió con la polio. viroterapia en ratones inmunizados. Esta ayuda de las células T probablemente sea multifacética, incluida la "licencia" para los países en desarrollo; CD4+ secreción de citocinas por parte de las células T (p. ej., IL-21, IFN-); reprogramación TME; o a través de los efectos positivos de los eosinófilos reclutados en la vigilancia inmunitaria de las células T CD8+.36 46 Posiblemente debido a la actividad de los anticuerpos neutralizantes de la polio que limitan la activación de las células T CD4+ al reducir la disponibilidad de antígenos de recuperación. o persistencia, las células B fueron contraproducentes para los efectos antitumorales del recuerdo de la polio. En nuestros estudios, el recuerdo de la polio medió consistentemente respuestas antitumorales e inflamatorias más fuertes que las del Tet. Una posibilidad es que esto se deba a diferencias en la intensidad y/o calidad de la inmunidad preexistente inducida después de la vacuna contra la polio versus la vacuna Tet en nuestros sistemas modelo. En apoyo de esta posibilidad, los efectos antitumorales de Tet y UVP fueron similares cuando los ratones fueron inmunizados con la vacuna IPOL de grado clínico (figura 2C), que indujo una inmunidad antipolio más débil que la estrategia de inmunización contra la polio (PVSRIPO+ALH) utilizada para otros experimentos en nuestro estudio (figura complementaria en línea S1B). Sin embargo, también está bien establecido que la naturaleza del antígeno (p. ej., la densidad del epítopo, que probablemente sea mayor en la cápside de la polio) puede influir en las respuestas inmunitarias adaptativas. 47 48 La eficacia antitumoral de la recuperación de la polio dependió solo parcialmente de las células T CD8+. Recordemos que la terapia con antígenos provocó una afluencia de eosinófilos e ILC2, y el agotamiento de eosinófilos disminuyó los efectos antitumorales en ratones inmunizados contra la polio tratados con mRIPO. Destacando la importancia del contexto, también se demostró que tanto los eosinófilos como las ILC2 median los efectos protumorigénicos.49 50 En el asma, las células T CD4+ reclutan eosinófilos51 a través de las ILC2.52 Las ILC2 expresan MHC clase II y propagan las respuestas Th2 en infecciones por helmintos.40 En el cáncer, la infiltración de eosinófilos tumorales está relacionada con la respuesta a la inmunoterapia,33 34 se demostró que los eosinófilos apoyan la vigilancia inmune de las células T CD8+,46 y las ILC2 contribuyen a la eficacia antitumoral anti-PD1. 35 53 Nuestro trabajo indica que las funciones antitumorales de los eosinófilos, y posiblemente la de las ILC2, pueden ser activadas por las células T CD4+. Aún no se ha determinado completamente cómo la recuperación de células T CD4+ recluta eosinófilos en el tumor; sin embargo, un trabajo reciente proporciona una posible explicación al mostrar que durante el bloqueo de PD1 la secreción de IL-5 por CD4+ Las células T inducen la expansión de los eosinófilos y su reclutamiento.36 Además, el análisis de citocinas de homogeneizados tumorales y explantes de TDLN después de la viroterapia contra la polio también reveló un aumento de GM-CSF e IL-5 promotores de eosinófilos en ratones inmunizados contra la polio (figura suplementaria en línea S2B ).
Figura 6 Los anticuerpos antipolio preexistentes se asocian con una supervivencia más prolongada después del tratamiento con Lerapolturev (PVSRIPO); Los eosinófilos periféricos aumentan después de Lerapolturev. (A, B) Los títulos de neutralización sérica de Lerapolturev previo al tratamiento se midieron en los ensayos de fase I (A, Ph1, NCT01491893) y de fase II (B, Ph2, NCT02986178) de glioblastoma recurrente (rGBM). Supervivencia después de la separación según el título de neutralización medio (1:2000), junto con el título medio+SEM para los pacientes que sobrevivieron
También descubrimos una relación inversa entre la afluencia de eosinófilos tumorales y la densidad de Treg en tumores humanos, y la terapia con antígenos de recuperación condujo a una disminución de las proporciones de Tregs que covariaban con la afluencia de eosinófilos, lo que implica un papel recíproco de los eosinófilos en el control de las células T CD4+ biología. Es necesario realizar más estudios para determinar con precisión cómo los eosinófilos median los efectos antitumorales después de la recuperación de las células T CD4+ y si las ILC2 contribuyen a este proceso. Las diferencias en la densidad de eosinófilos por sí solas no parecen ser pronósticas en la mayoría de los tipos de cáncer, con la posible excepción del LGG, donde los niveles de eosinófilos también fueron los más altos entre todos los demás tipos de tumores. Curiosamente, se ha informado una correlación negativa entre los eosinófilos periféricos y el grado del glioma54; y las alergias respiratorias y la atopia se asocian con una menor incidencia de glioma.55 Utilizamos estrategias de vacunación con polarización Th2, consistentes con el uso clínico de las vacunas contra la polio y el tétanos, para descifrar el potencial antitumoral de la recuperación de células T CD4+. Si bien, canónicamente, las polarizaciones Th1/Tc1, Th2/Tc2 y Th17/Tc17 son mutuamente excluyentes, la terapia con antígenos de recuerdo en este contexto produjo compromiso de células T Th1 (CD8+, expresión de Tbet/IFN en CD{{ 20}} células T); Th2 (reclutamiento de eosinófilos/ILC2, expresión de GATA3 en células T CD4+); y, en menor medida, características polarizantes de Th17 (expresión de ROR t en células T CD4+ /CD8+). Estos datos se suman a la creciente evidencia de que diversas polarizaciones de células T CD4+, más allá de la de Th1, pueden generar respuestas inmunes antitumorales compatibles y productivas.56–58 Nuestro trabajo muestra que, si bien la inmunidad preexistente limita la replicación viral dentro el tumor, mejora la eficacia antitumoral de la viroterapia contra la polio. Una limitación de este trabajo es que se realizó en sistemas murinos que no capturan la heterogeneidad de las respuestas de las células T CD4+ de memoria de polio/Tet ni del TME en humanos. Además, debido al rápido crecimiento de los modelos tumorales empleados, los tumores eran relativamente pequeños en el momento del inicio del tratamiento. No obstante, lo que sugiere la aplicabilidad de nuestras observaciones en humanos, los títulos de anticuerpos neutralizantes de la polio antes del tratamiento fueron mayores en pacientes con rGBM que vivieron más tiempo después de la viroterapia contra la polio, y los niveles de eosinófilos en sangre aumentaron en la mayoría de los pacientes con melanoma (8/12) después del tratamiento con viroterapia contra la polio (Lerapolturev). Como advertencia, los títulos más altos de anticuerpos neutralizantes contra la polio pueden reflejar un estado funcional inmunológico superior. Si bien no podemos excluir esta posibilidad, estos datos, como mínimo, revelan que la inmunidad preexistente no impide el éxito de la viroterapia contra la polio en los pacientes. Nuestras observaciones también implican que se pueden justificar dosis múltiples de Lerapolturev para acentuar los efectos antitumorales del recuerdo de la polio. De hecho, las respuestas en pacientes con melanoma tratados con Lerapolturev se agruparon en la cohorte con el mayor número de tratamientos.10 Dada la importancia eminente de las células T CD4+ en la inmunoterapia contra el cáncer,1 32 los crecientes esfuerzos apuntan a aprovechar Las células T CD4+ ayudan dentro de los tumores, por ejemplo, con anticuerpos agonistas de CD40,59 o con vacunas peptídicas que incluyen epítopos MHC de clase II44 que preparan CD4+ y CD8+ T específicos de neoantígenos. células.60 Nuestro trabajo descubre el potencial de aprovechar las células T CD4+ de memoria específicas de las vacunas infantiles para activar mecanismos antitumorales multifacéticos de las células T CD4+.
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