La deficiencia de Klotho intensifica la expresión de IFN-/ inducida por hipoxia a través de la regulación al alza de RIG-I en los riñones
Mar 25, 2022
Resumen La hipoxia es una vía común para la progresión de la etapa finalenfermedad del riñon.El gen inducible por ácido retinoico I (RIG-I) codifica una ARN helicasa que reconoce virus, incluido el SARS-CoV2, que es responsable de la producción de interferón (IFN)-a/ para prevenir la propagación de infecciones virales. Recientemente, se encontró activación de RIG-1 en condiciones hipóxicas, y se demostró que la deficiencia de klotho intensifica la activación de RIG-I en cerebros de ratones. Sin embargo, el papel de estas funciones en la inflamación renal sigue siendo difícil de alcanzar. Aquí, para el estudio in vitro, se examinó la expresión de RIG-I e IFN-a/ en ratas normales.riñón(NRK)-52Células E incubadas en condiciones hipóxicas (1 por ciento de O2). A continuación, se transfectó ARNip dirigido a RIG-I o ARNip codificado en células NRK52E para examinar la expresión de RIG-I e IFN-a/ß en condiciones hipóxicas. También investigamos los niveles de expresión de RIG-I e IFN-a/ en 33 humanosriñónmuestras de biopsia diagnosticadas con nefropatía IgA. Para el estudio in vivo, inducimos hipoxia renal sujetando la arteria renal durante 10 min en ratones de tipo salvaje (ratones WT) y ratones Klotho-knockout (KIT/ratones). La incubación en condiciones hipóxicas aumentó la expresión de RIG-lI e IFN-a/ en células NRK52E. Su regulación al alza fue inhibida en células NRK52E transfectadas con siRNA dirigido a RIG-I. En pacientes con nefropatía por IgA, la tinción inmunohistoquímica de muestras de biopsia renal reveló que la expresión de RIG-I estaba correlacionada con la de IFN-a/ (r=0.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">riñonesde ratones hipóxicos WT y se observó una mayor regulación en ratones hipóxicos. Estos hallazgos sugieren que la hipoxia induce la expresión de IFN-a/ a través de la regulación positiva de RIG-I y que la deficiencia de klotho intensifica esta expresión inducida por hipoxia enriñones
Palabras clave:enfermedad del riñon; células renales; reemplazo renal; daño renal; riñón
CITANCHE MEJORARÁ LA FUNCIÓN RENAL/RENAL
IntroducciónCrónicoenfermedad del riñon(ERC) afectó a 697,5 millones de personas en todo el mundo en 2017 [1], por lo que se reconoce como un problema de salud importante. Para retardar la progresión de la ERC, los inhibidores de la vía del sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA) se utilizan en un entorno clínico [2,3]. Sin embargo, sus efectos beneficiosos son limitados y muchos pacientes eventualmente requieren terapia de reemplazo renal[4]. Patológicamente, la inflamación crónica y la fibrosis intersticial son las características comunes de la ERC, independientemente de la enfermedad primaria [5]. Aunque el factor de crecimiento transformante (TGF)- 1 desempeña un papel fundamental en el desarrollo de la fibrosis intersticial [6-8], estudios anteriores demostraron que la infiltración de células inflamatorias es responsable de la producción de TGF{{12} } [9]. Estos hallazgos sugieren que la inflamación es el evento anterior a la fibrosis intersticial y que la inflamación es un objetivo terapéutico candidato para la ERC.
La hipoxia es una condición en la cual el oxígeno insuficiente llega a los tejidos. Como respuesta celular a la hipoxia, los factores inducibles por hipoxia (HIF) juegan un papel importante en la prevención del daño tisular [10-12]. Sin embargo, la hipoxia severa conduce a enfermedades vasculares agudas, como accidente cerebrovascular [13], angina de pecho [14] y enfermedad arterial periférica [15]. Recientemente, se ha informado que la hipoxia crónica, como la apnea del sueño, también contribuye al desarrollo de diversas enfermedades [16]. Con respecto ariñón, según se informa, la hipoxia se intensifica con la progresión de la etapa de ERC y actualmente se considera una fisiopatología común que lleva a la etapa finalenfermedad del riñon[17]. Como se mencionó anteriormente, la inflamación se considera un evento aguas arriba, por lo que el mecanismo por el cual la hipoxia induce la inflamación debe aclararse a nivel molecular. La inflamación se caracteriza por dolor, calor, enrojecimiento, hinchazón y pérdida de función[18]. Sin embargo, básicamente funciona para eliminar la causa inicial de la lesión celular y eliminar las células necróticas y el tejido dañado. En cualquier caso, la inflamación no es una respuesta específica, y se considera que la inmunidad innata participa principalmente en el proceso inicial de inflamación a través de la producción de interferón (IFN)- / [19]. Entre los factores involucrados en la inmunidad innata, un gen I inducible por ácido retinoico (RIG-I) es responsable de las respuestas inmunes a las infecciones virales[20. En particular, estudios recientes han demostrado que la hipoxia aumenta la expresión de RIG-I en el cerebro y el hígado, lo que resulta en la producción de IFN-/ [21,22]. Sin embargo, el papel de la hipoxia en la expresión de IFN-/B mediada por RIG-I en elriñónsigue siendo difícil.
Klotho se informó por primera vez como una proteína antienvejecimiento [23]. De hecho, los ratones con deficiencia de klotho exhiben una vida más corta acompañada de fenotipos que se asemejan al envejecimiento humano. Por el contrario, los ratones transgénicos klotho muestran una vida más larga [24]. En términos de efectos renoprotectores, se ha encontrado que la deficiencia de klotho intensifica el daño renal en modelos experimentales de enfermedades renales, mientras que la sobreexpresión de klotho o la administración de proteína klotho lo mejora [25]. La proteína Klotho existe en tres formas: koto de membrana, secretada e intracelular. Entre estos, se informa que el klotho intracelular suprime la expresión de RIG-I junto con la inflamación [26], lo que plantea la posibilidad de que la deficiencia de klotho exacerbe la regulación positiva inducida por hipoxia de RIG-I e IFN- / enriñonesEstos hallazgos nos llevaron a plantear la hipótesis de que la expresión de RIG-I e IFN-/ aumentó en condiciones hipóxicas en una línea celular de células tubulares renales y que su regulación positiva inducida por hipoxia se intensificó en ratones klotho-knockout (KI-7 ratones). En este estudio, mostramos que la hipoxia aumenta RIG-I así como IFN-a/ en ratas normales.riñóncélulas (NRK-52E) y riñones de ratón. También mostramos que RIG-I es responsable de la regulación positiva inducida por hipoxia de IFN-c/B. En humanos realesriñónmuestras de pacientes diagnosticados con nefropatía por IgA, se encontró que la expresión de RIG-I se correlacionó positivamente con IFN-/. Por último, la regulación positiva inducida por hipoxia de RIG-I e IFN-/ se intensificó en ratones KI-/-. Estos hallazgos sugieren que la deficiencia de klotho intensifica la expresión de IFN- / inducida por hipoxia a través de la regulación positiva de RIG-I enriñones
LA CITANCHE MEJORARÁ LA INSUFICIENCIA RENAL/RENAL
Materiales y métodos AnimalesSe obtuvieron ratones macho C57BL/6J de tipo salvaje (WT) (de 8 semanas de edad y con un peso de 20-25 g) de Charles River Laboratories Japan (Yokohama, Japón). Se compraron ratones macho (de 6 semanas de edad y con un peso aproximado de 15 g) de CLEA Japan, Inc. Los ratones se alojaron en el Instituto de Ciencia Animal de Laboratorio de la Universidad de Hiroshima (Hiroshima, Japón), como se describió anteriormente [27]. Todos los experimentos fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Hiroshima (números de permiso: A19-158 y 2019-156) y se realizaron de acuerdo con las Directrices sobre el Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud (NIH). Los ratones WT y KI-' se dividieron en un grupo de control o un grupo de hipoxia (n=5en cada grupo). Se indujeron condiciones hipóxicas pinzando la arteria renal izquierda durante 10 min bajo anestesia general (0,3 mg/kg de medetomidina, 4 mg/kg de midazolam y 5 mg/kg de butorfanol)[28]. Los ratones del grupo de control se sometieron a una operación simulada que fue el mismo procedimiento que el de los ratones del grupo de hipoxia, excepto por la falta de ligadura de la arteria. Después de 10 min de hipoxia, los ratones fueron sacrificados por punción cardíaca y susriñonesfueron cosechados. Hipoxia de lariñónse confirmó mediante transferencia Western para la expresión de eritropoyetina (Fig. S1).
Cultivo de célulasla rata normalriñón(NRK)-52Las células E se adquirieron de la American Type Culture Col. (Manassas, VA, EE. UU.). Las células NRK-52E se cultivaron en medio RPMI-1640que contenía un 10 % de suero bovino (FBS) (Nichirei Bioscience, Tokio, Japón) y penicilina/estreptomicina-cina (Nacalai Tesque, Kioto, Japón). Estos cllls se sembraron en placas de cultivo de 10 cm. Después de crecer hasta la subconfluencia, las células se incubaron en una cámara de incubación modular de O2 al 1 por ciento (MIC 101; Billups-Rothenberg, San Diego, CA, EE. UU.) durante 30, 60, 90 y 120 minutos. al análisis de transferencia Western. La hipoxia de las células NRK-52E se confirmó mediante transferencia Western para la expresión de HIF-1 (Fig. S2).
Transfección de siRNA RIG-ILas células NRK52E se transfectaron con ARNip 20 nM dirigido a RIG-I (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EE. UU.) o ARNip de control negativo (4390843; Applied Biosystems, Waltham, MA, EE. UU.) utilizando el reactivo de transfección Lipofectamine 2000 (Thermo Fisher Scientific) , de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Después de 43-45 h, algunas de estas células se incubaron en condiciones hipóxicas (1 por ciento de O2) durante 30 min para evaluar RIG-I. Las otras células se cambiaron a un medio nuevo. Después de 24 h, estas células se incubaron en condiciones hipóxicas (1 por ciento de O2) durante 60 y 120 min para confirmar la supresión de IFN-a/. Se prepararon lisados de células completas y se sometieron a análisis de transferencia Western.
Análisis de Western BlotLa recolección de muestras y el Western Blot se realizaron de acuerdo con los métodos descritos anteriormente [29]. Anticuerpo monoclonal de conejo anti-RIG-I (#3743S; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, EE. UU.), anticuerpo policlonal de conejo anti-IFN- 11 (bs-7023R; Bioss Anti-bodies, Woburn, MA, EE. UU.), anticuerpo anti-IFN policlonal de conejo (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, EE. UU.), anticuerpo anti-RIG-I monoclonal de conejo (=700366; Invitrogen, Carlsbad, CA, EE. UU.), anticuerpo policlonal de conejo anticuerpo anti-IFN- 2 (ab193055; Abcam, Cambridge, Reino Unido), anticuerpo policlonal anti-IFN de conejo (PA5-20390; Invitrogen), anticuerpo monoclonal anti-klotho humano de rata (KO603; TransGenic, Fukuoka , Japón), anticuerpo monoclonal de ratón anti- -actina (A5316; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.) y anticuerpo monoclonal de ratón anti- -tubulina (T9026; Sigma-Aldrich) como anticuerpos primarios. Como anticuerpos secundarios se usaron inmunoglobulina G anti-conejo de cabra conjugada con peroxidasa de rábano picante (Dako, Glostrup, Dinamarca) e inmunoglobulina G anti-ratón de cabra (Dako). Se utilizaron SuperSignal West Dura y el sistema Pico (Thermo Fisher Scientific) para detectar señales. La intensidad de cada banda se midió con el software ImageJ (versión 1.47y; Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MD, EE. UU.) y se normalizó al nivel de -actina o -tubulina.
LA CITANCHE MEJORARÁ LA ENFERMEDAD RENAL/RENAL
Análisis inmunohistoquímico de tejido renal de ratón.La tinción inmunohistoquímica se realizó de acuerdo con los métodos descritos anteriormente [27]. Como anticuerpos primarios, se aplicaron los siguientes productos: anticuerpo monoclonal de conejo anti-RIG-I (#700366; Invitrogen), anticuerpo policlonal de conejo anti-IFN- 2 (ab193055; Abcam), anticuerpo policlonal de conejo anti-IFN- ( PA5-20390; Invitrogen) y anticuerpo klotho monoclonal antihumano de rata (KO603; TransGenic).RIG-I-, IFN-a/ -, y klotho-positivo se cuantificaron como el promedio de 20 campos seleccionados al azar con Software ImageJ.
Recolección de muestras clínicas y declaración de éticaSe obtuvieron muestras de riñón mediante biopsia renal en el Hospital Universitario de Hiroshima entre agosto de 2014 y noviembre de 2016 de 33 pacientes a los que se les diagnosticó nefropatía por IgA. Este estudio se adhirió a los principios consagrados en la Declaración de Helsinki y fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad de Hiroshima (E-1718), Se obtuvo el consentimiento informado en forma de exclusión voluntaria en un sitio web (httns:/inzounaika Hiroshima-uaciplresearchl opt out.html).
Análisis inmunohistoquímico de tejido renal humanoLa inmunotinción se llevó a cabo de acuerdo con los métodos descritos anteriormente [27]. Se utilizaron los siguientes anticuerpos primarios: anticuerpo monodonal anti-RIG-I de conejo (n.º 700366; Invitrogen), anticuerpo monoclonal anti-IFN de ratón (sc-373757; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, EE. UU.) y anticuerpo Anticuerpo anti-IFN policlonal (PA5-20390; Invitrogen), RIG-I- e IFN-a/-las áreas positivas se cuantificaron como el promedio de cinco campos seleccionados al azar con el software Image].
análisis estadísticoLos resultados se presentan como media ± desviación estándar (DE). Las correlaciones se calcularon mediante un análisis de regresión univariado. Para las comparaciones múltiples, utilizamos un análisis de varianza (ANOVA) de una vía seguido de la prueba t de Student con corrección de Bonferroni. Las diferencias entre los dos grupos se analizaron mediante la prueba t de Student.P<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">
Resultados:La hipoxia regula al alza RIG-I e IFN-a/ en una línea celular de rata de células epiteliales renalesPara identificar el efecto de la hipoxia en la expresión de RIG-I e IFN-a/ in vitro, realizamos un análisis de transferencia Western para estas proteínas en células NRK-52E cultivadas en condiciones hipóxicas. El nivel de proteína de RIG-I alcanzó su punto máximo a los 30 min y luego disminuyó gradualmente en las células NRK-52E bajo estimulación hipóxica (Fig. 1A). Los niveles de IFN-/ß aumentaron y alcanzaron su punto máximo a los 120 y 60 min, respectivamente, en NRK -52Células E con estimulación hipóxica (Eig 1Band1C). La eliminación de RIG-I reduce la expresión de IFN-a/ en células NRK52E con hipoxia Para evaluar si RIG-I participa en la expresión de IFN-/ en condiciones hipóxicas, investigamos su expresión en células NRK-52E transfectadas con RIG-I siRNA o negativo
controlar el ARNsi. Primero, confirmamos el efecto de eliminación de RIG-siRNA en células NRK-52E. La transferencia Western para RIG-I reveló que el siRNA de RIG-I regulaba negativamente la expresión de RIG-I en células NRK-52E con o sin estimulación hipóxica (Eig 2A). A continuación, investigamos el papel de la regulación positiva inducida por hipoxia de RIG -I en la expresión de IFN-/B en células NRK-52E utilizando siRNA RIG-I o control negativo. RIG-siRNA suprimió la expresión de IFN- / en NRK-52Ecells (Eig2Band2C).
RIG-I se correlaciona con los niveles de expresión de IFN-/ en muestras de riñón humano de nefropatía por IgAExaminamos si el nivel de expresión de RIG-I está asociado con IFN-a/ en muestras de biopsia renal obtenidas de pacientes con nefropatía por IgA (n=33). Las características clínicas detalladas de estos pacientes se muestran en la Tabla S1. La tinción inmunohistoquímica para RIG-I e IFN-/ reveló su expresión en glomérulos y túbulos renales (Fig. 3A), y mostró que RIG-I se correlaciona positivamente con IFN-o/ (r=0.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">
La hipoxia no cambia el nivel de expresión de klotho en ratones WT y K1-/Para determinar el efecto de la estimulación hipóxica en la expresión de klotho in vivo, investigamos su expresión en ratones WT y K-/con o sin 10 minutos de estimulación hipóxica. La transferencia de Western y la tinción inmunohistoquímica revelaron que la expresión de klotho no difería entre ratones WT con y sin hipoxia y que la expresión de klotho no se observó en ratones KIT independientemente de la presencia o ausencia de estimulación hipóxica (Eig 4A y 4B). En los ratones WT, klotho la proteína se tiñó en el citoplasma de las células tubulares (Fig. 4B).La expresión de RIG-I se intensifica en condiciones hipóxicas en ratones K~.Según los informes, el klotho intracelular confiere la capacidad de suprimir la inflamación mediada por RIG-I, por lo que examinamos el nivel de expresión y la localización de RIG-I en pacientes hipóxicos.riñonesde ratones WT y Kl-/-. La transferencia Western reveló que la expresión de RIG-I aumentó en ratones WT con estimulación hipóxica y que se intensificó en ratones Kl-/- (Fig. 5A). La inmunohistoquímica mostró que el área positiva para RIG-I aumentó en los ratones Kl-/-, lo que fue similar a los resultados obtenidos de la transferencia Western (Fig. 5B).
IFN- se regula positivamente en condiciones hipóxicas en ratones KI--Para identificar los efectos de la hipoxia en la expresión de -a en wvo, examinamos su nivel de expresión y localización en ratones hipóxicos WT y KI. La transferencia de Western reveló que la expresión de IFN-aumentó en ratones WT con estimulación hipóxica y que se reguló aún más en ratones (Fig. 6A). La tinción inmunohistoquímica también reveló que el área positiva de IFN- -se observó principalmente en células tubulares, y que el nivel de expresión de IFN- mostró la misma tendencia que en la transferencia Western (Fig. 6B).
IFN- aumenta en condiciones hipóxicas en K1T-/ratonesAdemás de IFN-c, examinamos el nivel de expresión y la localización de WT y ratones hipóxicos de IFN-Bin. A partir de los resultados de la transferencia de Western, la expresión de IFN-aumentó en ratones WT con estimulación hipóxica, mientras que se observó un aumento adicional en ratones KIT (Fig. 7A). Al cuantificar el área positiva de IFN- -, el nivel de expresión de IFN-aumentó en los ratones KI-/- en comparación con los ratones WT' (Fig. 7B).
observado en ratones Kl-/- independientemente de la presencia de estimulación hipóxica. Mostramos que la hipoxia renal aumentó la expresión de RIG-I e IFN-/ y que su expresión se intensificó aún más en ratones Kl-/-. Estos hallazgos sugirieron que la deficiencia de klotho intensificó la expresión de RIG-I inducida por hipoxia, lo que resultó en la regulación positiva de IFN-/. Identificamos que la hipoxia inducía la expresión de RIG-I e IFN-/ tanto en estudios in vitro como in vivo. Para adaptarse a las condiciones hipóxicas, el HIF se estabiliza y funciona como un factor de transcripción [30]. En un estudio anterior, se informó que RIG-I está involucrado en moléculas inducibles por HIF. Sin embargo, no pudimos identificar que RIG-I es un efector aguas abajo de HIF. Además de la infección por el virus, la expresión de RIG-I aumenta en condiciones de hipoxia [31]. Aunque estudios previos informaron que la hipoxia afecta las células epiteliales tubulares, las células endoteliales, los pericitos, los fibroblastos, las células inflamatorias y las células progenitoras en los riñones [32,33], mostramos que la regulación positiva de RIG-I se observó principalmente en células epiteliales tubulares en ratones con estimulación hipóxica, así como en pacientes con nefropatía IgA. Debido a que los túbulos renales se consideran un sitio de entrada de patógenos transuretrales [34], RIG-I puede desempeñar un papel fundamental en la respuesta inmune de las células epiteliales tubulares en condiciones hipóxicas. La respuesta inmune innata es activada no solo por microorganismos sino también por señales de alarma de células dañadas, lesionadas o estresadas [35]. En este estudio, mostramos que la expresión de RIG-I inducida por hipoxia participó en la producción de IFN-/ en una línea celular de túbulos renales de rata. Los datos presentados sugieren que la expresión de RIG-I funciona como el sistema inmunitario innato del citosol en respuesta al estrés hipóxico así como a la infección por virus. Estudios previos describieron que la hipoxia aumenta durante el desarrollo de la ERC independientemente de la enfermedad primaria y que la hipoxia contribuye a la progresión del daño renal [17]. En un estudio clínico que utilizó imágenes de resonancia magnética dependientes del nivel de oxigenación de la sangre, la hipoxia renal no solo se intensificó durante la progresión de la ERC, sino que también predijo dicha progresión [36]. Por lo tanto, la hipoxia se considera actualmente como la vía común para la progresión de la etapa finalenfermedad del riñon, por lo que la inflamación inducida por hipoxia debería ser una diana terapéutica para suprimir la progresión de la ERC.
Mostramos que la hipoxia induce la producción de IFN-/, que se clasifican como interferones tipo 1. Los interferones tipo 1 funcionan básicamente para inhibir la replicación viral [37] y para resistir la inmunosupresión inducida por hipoxia [21,22]. Sin embargo, los estudios realizados hasta la fecha han informado que los interferones tipo 1 conducen a la activación de las células asesinas naturales, lo que desempeña un papel importante no solo en la eliminación de las células infectadas por el virus, sino también en el daño tisular [38]. De hecho, estudios previos informaron que RIG-I contribuye a la inflamación en varios órganos, como el pulmón [39],riñón[40], y el sistema nervioso [21]. En este estudio, también demostramos que la regulación positiva de RIG-I inducida por hipoxia es responsable de la producción de IFN-/. Por lo tanto, los interferones de tipo 1 pueden funcionar para proteger contra la infección en un estado de hipoxia, pero serían dañinos en condiciones no infectadas. Además, un estudio anterior informó que, además de los interferones tipo 1, RIG-I participa en la producción de varias citocinas, como IL-1, IL- 6 y TNF- [41]. Debido a que estas citoquinas causan daño tisular, la regulación positiva de RIG-I inducida por hipoxia puede participar en la progresión de la ERC. Mostramos que la deficiencia de klotho mejora la expresión de RIG-I inducida por hipoxia, que se acompaña de la regulación positiva de IFN- / . Según se informa, la expresión de Klotho disminuye con el envejecimiento y la progresión de la ERC [42,43]. Por lo tanto, la expresión de RIG-I puede aumentar más en los ancianos y en los pacientes con ERC en condiciones de hipoxia, lo que conduce a la producción de IFN-/. Como se mencionó anteriormente, el klotho existe en tres formas: klotho de membrana, secretado e intracelular, siendo este último responsable de suprimir la producción de citoquinas inflamatorias mediada por RIG-I [26]. En términos de localización, mostramos que la expresión de klotho ocurre principalmente en las células tubulares renales, con evidencia de que la expresión de RIG-I se intensifica principalmente en las células tubulares renales en condiciones hipóxicas. Estos hallazgos sugieren que un nivel reducido de expresión de klotho contribuye a una mayor producción mediada por RIG-I de interferones de tipo 1 en condiciones hipóxicas.
LA CITANCHE MEJORARÁ EL DOLOR DE RIÑÓN/RENAL
En resumen, mostramos que RIG-I e IFN-/ inducidos por estimulación hipóxica en riñones de ratón y una línea celular de células tubulares renales de rata, y que RIG-I estuvo involucrado en la regulación positiva inducida por hipoxia de IFN-/ en experimentos in vitro. En muestras de biopsia renal de pacientes con nefropatía por IgA, la expresión de RIG-I se correlacionó con la regulación positiva de IFN-/. Por último, la expresión de RIG-I inducida por hipoxia se intensificó en ratones klotho-knockout, junto con la regulación positiva de IFN-/. La expresión de interferón tipo 1 mediada por RIG-I aumentó en condiciones hipóxicas, y se observó una mayor regulación positiva en un estado de regulación negativa de klotho. Según los estudios clínicos, la hipoxia se exacerba con la etapa avanzada de la ERC [36] y es predictiva de la progresión a largo plazo de la ERC [36]. Además, la expresión de klotho disminuye con la disminución de la función renal, y la reducción de la expresión de klotho se asocia con daño renal [44]. En este estudio, mostramos que la deficiencia de klotho intensifica la expresión de IFN-/ inducida por hipoxia a través de la regulación positiva de RIG-I en los riñones y que la expresión de RIG-I está asociada con la de IFN-/ en pacientes reales con nefropatía por IgA. Tomando estos hallazgos en conjunto, tanto la hipoxia como la reducción de klotho se promueven durante la progresión de la ERC y, por lo tanto, la activación de la inmunidad innata aumenta en los pacientes con ERC.