Método para identificar los ingredientes activos químicos de Cistanche

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Identificación de componentes químicos de Cistanche deserticola utilizando el sistema X500R QTOF

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Asia Pacific Application Support Center (Shanghai), China

Introducción

Cistanche deserticolafue registrado por primera vez en el "Shen Nong Materia Medica"; también se conoce como "Dayun", "Rousong Rong" y "Zong rong". Como medicina herbal tradicional, tiene las propiedades de nutrir el yang renal, mejorar el flujo sanguíneo, actuar como laxante, estimulación inmune y otros efectos[1]. En 1983, el erudito japonés H. Kobayashi y otros comenzaron a estudiar la composición química deCistanche Deserticola[2], y desde entonces se ha convertido en un tema popular en la investigación de la medicina china que ha generado un gran interés tanto a nivel nacional como en el extranjero en los últimos 30 años.Cistanche Deserticolapertenece a la clase de plantas que contienen fenólicosGlucósidos, iridoides, y suGlucósidos, y lignanos y susGlucósidos.

La espectrometría de masas de tiempo de vuelo cuadrupolo (QTOF) es una herramienta sensible y específica para la identificación de componentes de la medicina china que gradualmente se han vuelto indispensables para la investigación. Esta tecnología ha superado los desafíos técnicos tradicionales con análisis retrospectivos de inyecciones individuales que permiten la extracción de datos importantes y la adquisición más completa de información de muestra. El uso de datos tof-MS y TOF-MS/MS de alta resolución de masa exacta y alta resolución permite un análisis cualitativo simultáneo, altamente específico dirigido y no dirigido. Sin embargo, la complejidad de la operación del instrumento y el uso de software ha limitado enormemente la difusión y el desarrollo de esta tecnología. Aquí presentamos un nuevo sistema QTOF que utiliza una nueva y revolucionaria ruta TOF basada en geometría de tipo N, software intuitivo y técnicas precisas de peso molecular que son más fáciles de usar en la identificación de componentes de la medicina china.

Los beneficios de este método son los siguientes:

1. El X500R utiliza la fuente de iones Turbo VTM duradera y aprobada por la industria y el diseño de interfaz de gas de cortina de aire, que tiene una fuerte característica anticontaminación;

2. SCIEX OS Software ha integrado funciones de adquisición, procesamiento e informes en una sola plataforma; la interfaz es intuitiva, fácil de dominar y tiene una corrección de ajuste automático de un solo toque para garantizar que los analistas con cualquier grado de experiencia puedan obtener datos confiables y de alta calidad;

3. El uso del software SCIEX OS para procesar datos para identificar los componentes de la medicina china es simple y permite la extracción rápida de información útil, por lo tanto;

4. Obtiene resultados de identificación más precisos y confiables de las bibliotecas de medicina china que contienen espectros MS / MS;

5. Las bases de datos de medicina china de alta resolución de MS / MS se basan en los ingredientes activos de la MTC de la Parte 1 de la "farmacopea china"; incluyendo referencias de componentes en la farmacopea e ingredientes activos en las hierbas, hay casi 900 compuestos

cistanche deserticola mejora la eficacia

Proceso experimental

1. Utilizando el modo TOF-MS-IDA MS/MS, inyectar una muestra y obtener simultáneamente iones precursores primarios y espectros secundarios correspondientes;

2. El uso de la detección dirigida al software SCIEX OS, la confirmación de los compuestos objetivo y los espectros secundarios, junto con una detección de los estándares de la medicina china y los métodos de coincidencia, puede aumentar la precisión y la productividad laboral.

3. El flujo de trabajo de identificación no dirigida de SCIEX OS Software utiliza búsquedas en bibliotecas y búsquedas desconocidas completas en ChemSpider para verificar los resultados, lo que garantiza que se identifiquen más componentes con un flujo de trabajo más simple.

Muestras y método de preprocesamiento

Fuente de la muestra:

Comprado en farmacias de Shanghai en forma de rodajas

Método de preprocesamiento:

1. Las rodajas se trituraron para formar polvo;

2. 0,9 mg se pesaron y se sumergieron en metanol de 3 ml durante 40 minutos;

3. La muestra del paso 2) fue ultrasónica 1 h;

4. Se realizó centrifugación y extracción del sobrenadante para utilizarlo como muestra.

Condiciones de cromatografía líquida (LC)

Columna cromatográfica: XSelect HSS T3, 2.1 * 150 mm, 3.5 μm;

Fase móvil: se utilizó la elución por gradiente

Fase móvil: A es 0.1% de ácido fórmico agua-2mM NH4FA

B es 95% acetonitrilo-5% agua-2mM NH4FA

Caudal: 0.5mL/min

Temperatura de la columna: 40ºC

Cantidad insertada: 5μL

Método de espectrometría de masas:

Método de escaneo: TOF MS-IDA-15 MS/MS cribado cualitativo

Parámetros de la fuente de iones ESI:

Cortina de aire de gas CUR: 35psi; Voltaje IS: 5500V /-4500V

Temperatura de la fuente: 600ºC

Gas atomizante GAS1: 55psi; Gas auxiliar GAS2: 60psi

Búsqueda en modo de instrumentación:

Con un solo toque (seleccione MS Check en la parte inferior derecha), el modo de corrección TOF-MS y TOF-MS/MS totalmente automatizado garantizan que los analistas de cualquier nivel de experiencia puedan obtener datos precisos, confiables y reproducibles.

BPC en modo de iones positivos y negativos:

Procedimiento de identificación de compuestos

1. Flujo de trabajo de identificación de componentes específico

1.1: Búsqueda de fórmulas moleculares

Solo se requiere el nombre del compuesto químico y la fórmula molecular; Estos se pueden introducir directamente o importar mediante la función copiar y pegar de Excel para crear un método de procesamiento

Una vez que se crea una tabla de resultados, los resultados cuantitativos y cualitativos se pueden ver en la misma ventana. Se utiliza un sistema de indicadores rojo/verde para indicar la precisión de la masa, el tiempo de retención, el tipo de isótopo y la confianza en la identificación mediante la coincidencia de la base de datos.

El software SCIEX OS permite a los usuarios filtrar los resultados y mostrar solo aquellos compuestos que cumplen con los criterios de aceptación y que caen dentro de los intervalos de confianza definidos por el usuario. Puede encontrar rápidamente resultados específicos en grandes bases de datos.

La base de datos TCM de espectros MS/MS permite la coincidencia secundaria y produce resultados más confiables (el color gris en la base de datos indica datos MS/MS)

La literatura contiene nombres y fórmulas moleculares de fenólicosglucósidoingredientes activos. Utilizando el proceso anterior para la identificación de los componentes objetivo, se determinó que la muestra contiene 39 tipos de glucósidos fenólicos:

Además del fenólicoglucósidoComponentes activos, Cistanche también contiene una gran cantidad de compuestos como iridoides, glucósidos y lignanos. Los resultados de la identificación son los siguientes:

La lista de identificación de iridoides, glucósidos y lignanos:

1.2: Búsqueda en la base de datos:

Se obtuvieron 53 compuestos a partir de la identificación coincidente en la base de datos de MTC: 43 iones positivos, 22 iones negativos y 12 repeticiones, que se enumeran a continuación. Además fenólico activoGlucósidos, iridoides, glucósidos y lignanos, Cistanche también contiene

2. Análisis de componentes no específicos

La identificación de componentes no dirigidos se puede realizar con la función de búsqueda ChemSpider incorporada para determinar la clasificación y el tipo de incógnitas. Para la identificación de componentes no dirigidos, simplemente elija el modo "no dirigido" y la búsqueda de fórmulas moleculares desarrollará un método de procesamiento. El flujo de trabajo es el siguiente:

Para las incógnitas completas, los resultados de la búsqueda de fórmulas moleculares se muestran en una ventana del navegador pico en la parte inferior del espectro de masas TOFMS; con la búsqueda en la base de datos de ChemSpider, los resultados se enumeran por prioridad, y la información estructural obtenida en ChemSpider se compara automáticamente con el espectro MS/MS obtenido, proporcionando retroalimentación secundaria para una rápida identificación.

Resumen

1. Adquisición rápida de datos de alta resolución; una sola inyección produjo datos de alta resolución de TOF MS y MS/MS, con 39 componentes activos de glucósidos fenólicos identificables y 16 iridoides, lignanos y glucósidos;

2. Una base de datos TCM de espectros secundarios proporciona información de coincidencia adicional, y el software proporciona automáticamente una puntuación de coincidencia de base de datos. Usando la puntuación, uno puede identificar fácil, rápida y precisamente los componentes de la medicina china;

3. El dispositivo es simple y tiene una corrección de ajuste automático de un solo toque para garantizar que los analistas con cualquier grado de experiencia puedan obtener datos confiables y de alta calidad;

4. La nueva versión del software SCIEX OS integra la adquisición de datos, el procesamiento (cuantitativo y cualitativo), la visualización, la generación de informes y la gestión de bases de datos. Resuelve las dificultades a las que se enfrentan muchos usuarios con una interfaz intuitiva y fácil de usar;

5. Tanto los flujos de trabajo de detección dirigidos como los no dirigidos son simples, y la guía de métodos incorporada ayuda a los usuarios a crear métodos de manera precisa y rápida.

Referencias

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, Farmacopea de la República Popular China [S]. Beijing: Comisión Nacional de Farmacopea, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei; Avances en la investigación en la composición química de plantas del género Cistanche, "Chinese Herbal Medicine", Volumen 34, No. 5, mayo de 2003, 473-476.