Vacuna basada en ARNm para la COVID-19: ¡son nuevas pero no desconocidas!

Abstracto:

Las vacunas de ARNm aprovechan el mecanismo que utilizan nuestras células para producir proteínas. Nuestras células producen proteínas basándose en el conocimiento contenido en nuestro ADN; cada gen codifica una proteína única. La información genética es esencial, pero las células no pueden utilizarla hasta que las moléculas de ARNm la conviertan en instrucciones para producir proteínas específicas. Las vacunas de ARNm proporcionan instrucciones de ARNm listas para usar para construir una proteína específica. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) y mRNA-1273 (Moderna) son vacunas contra la COVID-19 basadas en mRNA recientemente aprobadas que han demostrado una excelente protección y eficacia. En total, hay cinco vacunas candidatas más basadas en ARNm para la COVID-19 en diferentes fases de desarrollo clínico. Esta revisión se centra específicamente en las vacunas basadas en ARNm para COVID-19 y cubre su desarrollo, mecanismo y aspectos clínicos.

Beneficios de cistanche para hombres: fortalece el sistema inmunológico.

Palabras clave:

vacuna contra la COVID-19; vacunas de ARNm; desarrollo de vacunas; vacunas basadas en vectores

1. Introducción

La pandemia de la enfermedad por coronavirus{{0}} (COVID-19) causada por el síndrome respiratorio agudo severo por coronavirus-2 (SARS-CoV-2) se ha extendido por todo el mundo. Hasta ahora, a nivel mundial, ha habido 662 millones de casos confirmados de COVID-19, incluidas 6,6 millones de muertes notificadas a la Organización Mundial de la Salud (OMS) [1]. El virus afecta a más de 200 países en todo el mundo, y la mayor parte de los casos se notifican en Brasil, Rusia y Estados Unidos [2]. El primer informe de un brote de COVID-19 se produjo en la ciudad de Wuhan, provincia china de Hubei, el 30 de diciembre de 2019. Se registraron grupos de casos de neumonía en Wuhan. Más tarde, el 7 de enero de 2020, se descubrió que el agente causal era un nuevo coronavirus (2019-nCoV). La OMS finalmente denominó a la enfermedad COVID-19 [3,4]. La tasa de letalidad estimada oscila entre el 0,5% y el 1,5%. SARS-CoV-2 pertenece a la familiaCoronaviridaey el ordenNidovirales. El SARS-CoV-2 pertenece al Betacoronavirus que tiene una estrecha relación genómica con dos virus, el SARS-CoV y el coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS CoV). En comparación con el SARS y el MERS, el SARS-CoV-2 es muy contagioso. COVID-19 es una enfermedad grave de importancia mundial. La enfermedad no se puede tratar con un medicamento antiviral específico, la clave para prevenir la propagación de la enfermedad es romper la cadena de transmisión [5]. Para disminuir las tasas de prevalencia y mortalidad, se utiliza la inmunización masiva contra la pandemia [6,7]. Desde que se publicó la secuencia del genoma del SARS-CoV-2 el 11 de enero de 2020, se han estudiado más de 150 proyectos de inmunización autorizados. El objetivo principal de la vacunación es inducir una respuesta inmune que proporcione protección a largo plazo contra la gravedad de la enfermedad [8]. Según lo evaluado por Paddy Ssentongo y sus colegas [9], la eficacia de la vacuna (VE) contra todas las infecciones por SARS-CoV-2 cayó del 83 % en el primer mes después de completar la primera serie de inmunización al 22 % después de 5 meses o más. . De manera similar, la EV contra la COVID sintomática-19 disminuyó del 94 % en el primer mes al 64 % durante el cuarto mes después de la inmunización. En general, la EV contra la COVID grave-19 fue fuerte en todas las edades, con un nivel del 90 % (IC del 95 %, 87–92 %) cinco meses o más después de estar completamente vacunado.

El coronavirus ha añadido proteína (S) a su superficie; esta proteína S interactuará con el dominio de unión al receptor del receptor de la enzima convertidora de angiotensina (ECA) [10,11]. La mayoría de las vacunas candidatas se dirigen a esta proteína S del virus [12]. La vacuna Pfizer BioNTech COVID-19-BNT162b2 es la primera inmunización aprobada por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA). Se basa en ARN mensajero (ARNm) elaborado por Pfizer, que recibió autorización de uso de emergencia para personas de 12 a 15 años o más para la prevención de la enfermedad COVID-19. La Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. (USFDA) aprobó la vacuna Pfizer el 23 de agosto de 2021 [13]. Diversos estudios han reportado que la inmunización está teniendo una eficacia del 89,1% en la prevención de la infección por SARS-CoV-2; Además, las vacunas también han reducido las hospitalizaciones, las muertes y la prevención de los ingresos a la UCI relacionados con la COVID-19-. La propagación controlable del SARS-CoV-2 se puede lograr antes cuando una gran proporción de la población está inmunizada (p. ej., entre el 70% y el 80%). La inmunización reduce significativamente la incidencia de COVID-19. La vacuna proporciona una respuesta inmunitaria sólida y eficaz para erradicar la infección por SARS-CoV-2 del cuerpo humano. Las personas infectadas tuvieron una potente respuesta de células T al virus, lo que puede ayudar en su capacidad de recuperarse de la infección [14,15]. La neutralización siguió estando fuertemente correlacionada con la protección contra la infección sintomática con variantes preocupantes del SARS-CoV-2 [16]. Así, la vacunación es la estrategia para controlar la pandemia.

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

Las vacunas contra la COVID-19 se están desarrollando en diversas plataformas. Un virus vivo atenuado, vacunas inactivadas, vectores virales no replicantes, ARN y ADN son ejemplos de ellos. En la Figura 1 se enumeran diferentes tipos de vacunas con ejemplos. Una estrategia para el desarrollo de vacunas es utilizar el virus SARS-CoV-2 muerto; no es capaz de replicarse pero puede permanecer intacto en el cuerpo. El sistema inmunológico desencadenará su respuesta contra el virus produciendo anticuerpos contra él. COVAXIN® (BBV152), fabricado por Bharat Biotech, Hyderabad, India, y CoronaVac, también conocida como sinovac®, desarrollada por Sinovac Biotech, Beijing, China, ha utilizado un enfoque de virus inactivado para desarrollar la vacuna [17]. El vector viral no replicante también es una técnica adoptada por las empresas para la producción de vacunas. El adenovirus (Ads) es un vector viral ampliamente utilizado que tiene un genoma bicatenario que actúa como agente causante del resfriado común. CanSino Biologics Tianjin, China, ha desarrollado Ad5-nCoV (Convidecia®) que codifica la longitud completa de la proteína S del virus SARS-CoV-2. El vector viral no posee propiedades de replicación y, por tanto, no causa una enfermedad real. Una vez que ingresa al cuerpo, el ADN viral se presenta en células presentadoras de antígenos y se genera una respuesta inmune contra él. Oxford/Astrazeneca ha utilizado adenovirus del chimpancé (ChAdOx1) que posee el potencial de minimizar la interacción con anticuerpos prevalentes contra el adenovirus. La vacuna se llama AZD122 (Vaxzevria™). El Instituto de Investigación Gamaleya de Moscú (Rusia) desarrolló la vacuna Sputnik V™, que también es un vector viral que tiene un serotipo Ad26 humano recombinante. La vacuna Janssen fue fabricada por Johnson and Johnson, Nueva Jersey, EE. UU., utilizando el mismo enfoque [18].

El ARNm también se considera un nuevo enfoque para formular una vacuna. Las vacunas de ARNm son nuevas para el público, pero los científicos llevan mucho tiempo investigándolas. Estas vacunas de ARNm se sintetizan a partir de la plantilla de ADN que codifica la proteína de pico y se empaquetan en el portador basado en lipoproteínas para acelerar la entrada del ARNm dentro del cuerpo y evitar la degradación [19]. Cuando la vacuna se administra por vía intramuscular, se inyecta en tejidos más profundos y las moléculas de ARNm ingresarán al interior de la célula, facilitando el proceso de traducción [20]. Al ingresar al cuerpo, el ARNm será reconocido como un antígeno y se activará una respuesta inmune humoral que estimulará a las células B para que se conviertan en células B de memoria. De este modo, tras la exposición secundaria al antígeno; Las células B de memoria neutralizarán y bloquearán los antígenos [21]. La FDA ha aprobado vacunas basadas en ARNm, una de las cuales es BNT162b2 (Comirnaty®) de Pfizer-BioNTech, Nueva York, NY, EE. UU. y otra es ARNm-1273 de Moderna™, Cambridge, MA, EE. UU., también conocida como Spikevax. La FDA aprobó el ARNm-1273 para autorización de uso de emergencia (EUA) para su uso en personas de 18 años o más. La revisión actual proporcionará información detallada sobre la vacunología y datos sobre la COVID-19, el desarrollo de vacunas basadas en ARNm, cómo funcionan las vacunas de ARNm, la formulación y los ingredientes utilizados, la seguridad y eficacia, y los desafíos regulatorios para las vacunas.

Figura 1. Diferentes tipos de vacuna para la infección por COVID-19. (Creado con BioRender.com, consultado el 31 de diciembre de 2022)

2. Vacunología y datos sobre la COVID-19

En diciembre de 2019, se informó en China de un grupo de personas que padecían trastornos pulmonares por un motivo no identificado. Luego, el Centro Chino para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) investigó la incertidumbre en los casos relacionados con la neumonía y su origen mediante la recolección de muestras del cuerpo del paciente que se detectaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real [22]. Posteriormente se conoció la causa del trastorno pulmonar y se descubrió que era causado por un coronavirus, al que posteriormente se le denominó SARS-CoV-2 (síndrome respiratorio agudo severo) o COVID-19. Desde entonces, se ha convertido en una pandemia global. Pertenece a un grupo de coronavirus. Estructuralmente es un virus envuelto, no segmentado, perteneciente al subgénero Sarbecovirus y a la subfamilia Orthocoronavirinae. El material genómico presente en su estructura es la secuencia de ARN monocatenario de sentido positivo [23]. Se encuentran principalmente en huéspedes aves y mamíferos. La estructura genómica del coronavirus se representa en la Figura 2, que representa que la estructura viral posee proteínas de pico, con subunidades S1 y S2, en la membrana externa. El genoma viral de ARN está encapsulado dentro de la membrana junto con la nucleocápside. Por lo tanto, podemos decir que hay cuatro proteínas estructurales, es decir, la proteína de pico (S), la proteína de la nucleocápside (N), la proteína de membrana (M) y la proteína de la envoltura (E) [24]. Además de esto, también están presentes proteínas no estructurales (Nsp), que son dieciséis en total. Las proteínas de pico son los sitios de unión a receptores prominentes, donde las proteínas pueden interactuar con los receptores presentes en el cuerpo [25]. La subunidad S1 incluye el dominio de unión al receptor (RBD), donde la enzima convertidora de angiotensina II se une a la proteína de pico. También consta del dominio N-terminal (NDT). La subunidad S2 posee las proteínas de fusión (FP) y las proteínas transmembrana (TM) [26]. Tras la entrada del virus a las células huésped, se produce la fusión y el descubrimiento de la membrana viral, seguido de la transcripción y traducción del ARNm, que es esencial para la formación del ensamblaje viral, que luego sale del huésped mediante exocitosis para infectar. otras células. La entrada de partículas virales en otras células del cuerpo conduce a la estimulación de la respuesta inmune y la generación de anticuerpos [27].

Figura 2. Estructura genómica del coronavirus. (Creado con BioRender.com, consultado el 31 de diciembre de 2022).

A nivel mundial, las inmunizaciones se han utilizado ampliamente y son eficaces para reducir las tasas de mortalidad. Sobre la base de conocimientos científicos sólidos, se puede mejorar la evaluación de la seguridad y eficacia de las vacunas y su aceptación [28]. Las vacunas han evolucionado desde vacunas tradicionales, como las vacunas vivas atenuadas o muertas, hasta vacunas de subunidades y, por último, estrategias de inmunización de refuerzo homólogas o heterólogas [29]. En la Figura 3 se muestran diferentes estrategias de vacunación. En la antigüedad, se ha demostrado que las vacunas vivas atenuadas son salvadoras contra varios virus patógenos y se consideran seguras contra millones de poblaciones, pero a menudo se descuidan. Muchas vacunas, incluidas las vacunas triple vírica (sarampión, paperas, rubéola) y varicela, son vacunas vivas atenuadas [25,30]. Las formas debilitadas del virus pueden lograrse mediante su exposición a condiciones adversas o mediante modificaciones genéticas. Este tipo de vacuna, específicamente la vacuna oral contra la polio (OPV), se puede administrar por vías no invasivas. Por el contrario, las vacunas muertas, que son las versiones inactivadas de los virus, tienen una aplicación limitada en términos de respuesta inmunológica, pero la vacuna india actualmente utilizada, COVAXIN®, fabricada por Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, India, utiliza la versión inactivada de el virus en su formulación de vacuna [31]. El virus inactivado es lo suficientemente capaz de conservar su conformidad epítome que ayuda a modular la respuesta inmune humoral [32].

Figura 3. Interacción de las vacunas con las células huésped y la partícula viral. (Creado con BioRender.com, consultado el 31 de diciembre de 2022)

Las tecnologías recientes, como las vacunas basadas en ARNm o las vacunas basadas en vectores, las aprovechan al máximo para garantizar la seguridad y eficacia de las vacunas contra la COVID-19 [33]. Las vacunas basadas en vectores también se conocen como vacunación heteróloga de refuerzo, que ayuda a inducir respuestas inmunes tanto celulares como humorales, mientras que las vacunas de subunidades vivas provocan solo una respuesta humoral [34–39]. Según un estudio, se observa un aumento de 5 a 10 veces en la respuesta inmune mediada por células T en el caso de una vacuna basada en vectores heterólogos en comparación con la misma formulación, preparada utilizando un enfoque homólogo [40]. Por lo tanto, las vacunas basadas en vectores, es decir, las basadas en ADN y ARN, son más preferidas que las basadas en subunidades, a menudo se consideran más robustas en comparación con las vacunas de ARN y efectivas ya que codifican la proteína de pico de la estructura del virus. En el caso del virus Chikungunya, la estrategia de coinmunización utilizando ADN y partículas similares a virus generó una mejor respuesta inmune en estudios con animales [41]. A veces, las vacunas de ADN requieren sistemas de administración especializados, como electroforesis, conjuntos de microagujas y sistemas basados ​​en portadores, como liposomas, para mejorar la permeabilidad. Se formularon microesferas a base de ácido poliláctico-co-glicólico para la administración de la vacuna de ADN contra el VIH-1 por vía intramuscular [42]. Sin embargo, las vacunas basadas en ADN generan una escasa respuesta inmune y a menudo requieren otra dosis. Esto puede superarse mediante el uso de vacunas basadas en ARNm [25,43].

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

3. Desarrollo de vacunas basadas en ARNm

Anteriormente, se utilizaban diferentes formas de ARN para la formulación de la vacuna, incluido el ARNm transcrito in vitro, siRNA (pequeño ARN de interferencia), aptámeros basados ​​en ARN, ribointerruptores, moléculas antisentido y, más tarde, ARNm. El conocimiento del ácido ribonucleico mensajero, es decir, el ARNm, se origina en su creación básica, además, económica, su movimiento transitorio y su lenta degradación en las células diana, y sus beneficios de seguridad en comparación con la terapia del ADN, ya que no coordina el genoma humano, inhibiendo la inserción. mutagénesis, y es rápidamente accesible para su interpretación en proteínas en el citoplasma celular [44]. A principios de la década de 1990, los investigadores trabajaron intensamente para tener éxito en el desarrollo de vacunas basadas en ARNm. Se realizaron varios experimentos in vitro y los resultados mostraron una producción posterior de las proteínas deseadas; por lo tanto, se concluyó que dado que el ARNm es lo suficientemente capaz de producir proteínas, entonces puede ser un probable régimen terapéutico para tratar la dolencia [45]. Según Martinon et al., la vacuna de ARNm basada en nucleoproteínas para el tratamiento de la gripe se sintetizó mediante transcripción in vitro y se incorporó a vesículas liposomales. Los resultados demostraron la inducción de células T citotóxicas y anticuerpos in vivo [46]. Desde entonces, ha habido un desarrollo progresivo en el uso del ARNm como herramienta terapéutica debido a su importante eficacia, fácil ampliación y rentabilidad, que es un requisito principal para el tratamiento de enfermedades altamente contagiosas y la terapia del cáncer. Estudios de investigación recientes revelaron que las terapias basadas en ARNm protegieron significativamente a los ratones de los síntomas del chikungunya y mantuvieron niveles deseables de anticuerpos después de dos dosis [47]. Las vacunas basadas en ARN se dirigen a las células inmunitarias del cuerpo alterando sus funciones, dirigiéndose a los ribosomas para su traducción, generando así una respuesta inmunitaria [19].

Las inmunizaciones basadas en ARNm comprenden ARNm monocatenario que codifica el antígeno deseado. Pueden transportarse como ARNm desnudo o encapsularse en sistemas portadores adecuados para facilitar la introducción en las células. Una vez que el ARNm ingresa a la célula, los mecanismos naturales de la célula lo traducen en estructuras basadas en proteínas. Además, se somete a modificaciones postraduccionales para obtener una proteína de interés y genera una respuesta inmune determinada por los péptidos señal [44,48]. Las vacunas basadas en ARNm enfrentan un mínimo de dos obstáculos: la degradación nuclear cuando se inyectan en animales y una inmunogenicidad innata similar a la del antígeno [49]. Para solucionar este problema, la pseudouridina (Ψ) es una modificación del ARN bien conocida. Ψ reemplaza la uridina con ARNm transcrito in vitro (IVT), que es un nucleótido altamente prevalente y de origen natural en todas las células con ARN. La vacuna contra la COVID-19, producida tanto por Moderna como por Pfizer-BioNTech, consiste en una nueva vacuna Ψ modificada que tiene una eficacia de hasta el 90 % contra los síntomas [50]. En donde, una vacuna desarrollada por CureVac NV carecía de ARNm modificado con Ψ y los ensayos clínicos confirmaron una eficacia de solo el 48% [51].

Durante el proceso de traducción, existen principalmente dos categorías diferentes de vacunas de ARNm: ARNm no amplificado (NMR) y ARNm autoamplificador (SMR). El mecanismo de funcionamiento del ARNm no amplificado y del ARNm autoamplificado se explica en la Figura 4. Estructuralmente, como se muestra en la Figura 5, ambas estructuras poseen un CAP, 50 y 30 regiones no traducidas (UTR), un marco de apertura (ORF), y una cola de caballo en común [52,53].

Figura 4. Categorías de ARNm. (Creado con BioRender.com, consultado el 31 de diciembre de 2022)

Además de esto, el SMR posee replicasa como segmento que ayuda en la amplificación del ARNm intracelular. Además, los ribosomas traducen los segmentos para producir proteínas de interés. Las proteínas secretadas conducen a la generación de una respuesta inmune [54]. Los SMR son comparativamente más grandes que los NMR y las moléculas aniónicas. Estudios recientes de ARN autorreplicante mostraron una mejor expresión subgenómica in vitro de proteínas no estructurales del replicón de la encefalitis equina venezolana (EEV) cuando se observaron diferentes mutaciones. Actualmente se está llevando a cabo un estudio de ensayo clínico similar para atacar la glicoproteína de la rabia utilizando ARN autoamplificador del virus VEE-Sindbis formulado en nanoemulsiones [55]. Los principales atributos críticos de calidad (CQA) que definen la eficacia de las terapias con ARNm se resumen en la Tabla 1 [54].

Figura 5. Optimización de la secuencia de ARNm. (Adaptado de [56] con derechos y permisos).

Tabla 1. CQA para vacunas de ARNm.

La fabricación de ARNm es un proceso de dos pasos, que incluye producción y purificación. No hay impurezas presentes en los sistemas de fabricación de ARNm, ya que no contiene materias primas de origen animal o celular, la producción es relativamente más segura [65]. La producción de una secuencia de ARNm puede ser un proceso enzimático de un solo paso o un proceso enzimático de dos pasos. Se utiliza un análogo de taponado en el caso de un proceso de producción de un solo paso, que generalmente se usa a escala de laboratorio. Luego, el proceso se logra mediante purificación, que implica la separación mediante técnicas cromatográficas como se muestra en la Figura 6. La reacción enzimática de dos pasos para la producción de ARNm abarca la transcripción in vitro de la plantilla de ADN para formar una secuencia de ARN polimerasa [66]. El molde de ARNm así formado se puede proteger usando la enzima bloqueadora vaccinia y un donante de metilo. La producción de ARNm es relativamente alta y, a escala industrial, es difícil lograr reproducibilidad [67].

Figura 6. El proceso de fabricación de la secuencia de ARNm. (Creado con BioRender.com, consultado el 1 de enero de 2023)

4. ¿Cómo funcionan las vacunas de ARNm?

El ARNm es una molécula inestable cargada negativamente que está encapsulada en nanopartículas lipídicas. Mediante endocitosis, estas nanopartículas lipídicas ingresan a las células. Una vez que ingresan al citoplasma, estos endosomas se dirigen inmediatamente a los lisosomas para su degradación. Los estudios revelan que los lípidos ionizables desempeñan un papel importante en el escape y la liberación de ARNm de los endosomas. El grupo principal de los lípidos se protona dentro del ambiente ácido de los endosomas y este estado catiónico se une posteriormente a la cabeza aniónica del fosfolípido en la membrana endosómica. La cola hidrófoba del lípido catiónico y del fosfolípido luego se extiende, alterando la estructura de la bicapa de fosfolípidos y permitiendo que el ARNm escape al compartimento citoplasmático. Los ribosomas transforman el ARNm en proteínas cuando se libera. Esta proteína puede activar una respuesta inmune de dos maneras: (1) El proteosoma degrada estas proteínas en péptidos, que luego se presentan como un antígeno en la superficie celular mediante moléculas de clase I del MHC (complejo mayor de histocompatibilidad), que se unen al TCR (T receptor celular) para activar las células T CD8+, que matan las células infectadas; la proteína misma puede activar una respuesta inmune de dos maneras. (2) Las proteínas secretadas extracelularmente son fagocitadas por las APC (células presentadoras de antígenos) y se degradan en péptidos que el MHC de clase II presenta en la superficie celular y son reconocidos por las células T CD4+, que secretan citocinas para producir una proteína celular. respuesta y coactivan las células B para producir una respuesta inmune humoral, como se muestra en la Figura 7. Además, las vacunas de ARNm administran ARN bicatenario y monocatenario que se une al TLR (receptor tipo Toll) en el endosoma, lo que resulta en la estimulación de numerosos genes estimulados por IFN-1 (interferón tipo I), activando así respuestas inmunes innatas antivirales.

Figura 7. El mecanismo a través del cual la vacuna de ARNm provoca inmunidad en el huésped. (Creado con BioRender.com, consultado el 1 de enero de 2023)

5. Aspectos de formulación de las vacunas basadas en ARNm

Una vez que se inyecta el ARNm transcrito, expresará proteínas dentro del cuerpo. Se observa una respuesta inmunológica debido a la proteína expresada en el ARNm. Este proceso es predominantemente la base del desarrollo de vacunas de ARNm [68].

5.1. Plantilla de ADN

La identificación del antígeno del patógeno objetivo es el paso más importante. El desarrollo de la inmunización con ARNm necesita la adición del antígeno codificado en una plantilla de ADN, lo que ayudará en la traducción del ARNm in vitro. El antígeno específico se producirá in vivo mediante la transcripción del ARNm transcrito, que sólo llegará al citoplasma; esto ayudará a provocar una respuesta inmune. El ADN plasmídico (pADN) contiene una secuencia promotora con fuerte afinidad por una ARN polimerasa dependiente de ADN, como T7, SP6 o T3, así como la secuencia apropiada para la construcción de ARNm. La enzima pasará a lo largo de la plantilla, extendiendo la transcripción de ARN hasta que llegue al final de la plantilla [69].

5.2. Enzima limitadora

Para una traducción eficaz del ARNm a partir de la plantilla de ADN, es muy importante tapar el extremo 50 del ARNm. Además, se requiere una protección de 50 en el ARNm maduro para protegerlo de la degradación, la expresión génica y el reclutamiento de ribosomas. Un puente 5 0 -50 -trifosfato conecta las 50 cápsulas del ARNm eucariota con la 7-metilguanosina (m7G) (m7GpppN). Una nueva técnica de cotranscripción que empleó un kit de tapa limpia para agregar con precisión una estructura natural de 50 cap1 al sitio de inicio durante las reacciones IVT ha hecho que la generación de 50 ARNm protegidos mediante la polimerasa T7 sea un método de protección comúnmente utilizado con buena traducción y mínima reactogenicidad. En las vacunas de ARNm COVID-19 BNT162b1, se agregaron 5 0 tapas utilizando el método de tapa limpia [70]. El ARNm transcrito con análogo de caperuza tiene una cola poli 1 y una cola 30 (poli-A) está presente en los extremos 30 del ARNm eucariota. Esta cola poli A realiza funciones de transporte, traducción y estabilidad del ARNm. La cola de 30 poli A y la tapa de 50 crearán una estructura de circuito cerrado estable con el complejo eIF4F para el inicio del proceso de traducción. Debido a sus 120 nucleótidos (nt) en la cola de 30 poli(A), la vacuna de ARNm de BioNTech tiene una estabilidad y eficiencia de traducción superiores [71].

5.3. Sustratos de nucleótidos trifosfato (NTP)

Cuando los plásmidos de ADN se integran con la polimerasa T7 y los trifosfatos de nucleótidos, el ARNm se traduce de manera más eficiente y se producen más rendimientos. Después de la administración de la vacuna, una preocupación que surge es la inmunogenicidad. Tras la activación de la señalización posterior, el cuerpo reconocerá y responderá a los ARN virales. Este reconocimiento del ARN monocatenario y bicatenario se realiza mediante receptores endosómicos como los receptores tipo Toll (TLR3), TLR7 y TLR8. El ARN bicatenario modificado con 50 -trifosfato es reconocido por el gen I inducible por ácido retinoico (RIG-1) del receptor citosólico y la proteína 5 asociada a la diferenciación del melanoma (MDA-5). Se informaron reacciones alérgicas y shock anafiláctico cuando el sistema inmunológico del cuerpo se activó de manera incontrolada. Esta sobreestimulación del sistema inmunológico a nivel molecular limitará la traducción de proteínas, la expresión de antígenos y la eficacia de las vacunas. Esta limitación puede superarse mediante modificaciones de nucleobases. La N1-metil pseudouridina, una nucleobase modificada, aumentará la producción de proteínas y disminuirá la activación de TLR3. Los nucleótidos modificados a través de RIG-1 no solo afectan la interacción proteína-ARN sino que también disminuyen la capacidad de los ARNm para difundir señales inmunológicas. La eficiencia de la traducción del ARNm en proteínas mejora gracias a la N1-metilpseudouridina. El inicio de la traducción que se produce rápidamente aumentará de manera coordinada la vida media del ARNm [50].

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

Haga clic aquí para ver los productos Cistanche Enhance Immunity

【Pregunte por más】 Correo electrónico:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5.4. Componentes de nanopartículas lipídicas para la entrega de ARNm

En comparación con todas las demás vacunas, las vacunas de ARNm se desarrollan relativamente rápido y son más eficaces. Sin embargo, el mayor desafío en la fabricación de vacunas de ARNm es su escasa estabilidad. La estabilidad y la capacidad de la vacuna para tratar la infección por COVID-19 se reducen porque las ribonucleasas la descomponen rápidamente después de su administración, lo que produce componentes descompuestos que se eliminan a través del riñón. Para abordar este desafío, el ARNm se puede formular con nanopartículas lipídicas (LNP). La vacuna mRNA-LNP protegerá el mRNA de la degradación prematura y facilitará la entrega citoplasmática a las células presentadoras de antígenos [72]. Los lípidos son agentes perfectos para administrar ARNm en el sitio citosólico, ya que su fusión es compatible con las membranas celulares lipídicas; lo que lleva a la liberación dirigida y eficaz del ARNm. Los LNP son partículas nanométricas con un diámetro inferior a una micra que contienen dos o más lípidos en proporciones variables. Los LNP se diferencian de los liposomas por la presencia de componentes lipídicos en el núcleo como una mezcla discontinua. Los LNP que se sometieron a formulación tienen una estructura vesicular multilamelar, una capa central homogénea y un núcleo nanoestructurado [73]. Existe la presencia de agua dentro del núcleo de las LNP, lo que expone el ARNm a la interacción con un medio acuoso. Como se muestra en la Figura 8, el ARNm se encuentra dentro de las LNP, lo que lo protege del entorno externo. La composición más común que constituye los sistemas LNP de ARNm es un lípido catiónico/ionizable, un fosfolípido ("lípido auxiliar"), colesterol y un polietilenglicol (PEG). Las características fisicoquímicas dentro del sistema de administración de LNP, como la efectividad de la encapsulación, la carga de la superficie exterior, el tamaño de las partículas y la forma, se pueden modificar fácilmente ajustando la composición de los lípidos. Las proporciones de los componentes se ajustan según el tejido objetivo deseado [74].

Figura 8. Estructura de las nanopartículas lipídicas utilizadas para la entrega eficiente de ARNm. (Creado con BioRender.com, consultado el 1 de enero de 2023)

5.4.1. Los lípidos catiónicos

Con un grupo amino que imparte una carga neta positiva, una cadena hidrofóbica y un grupo de enlace que permite la unión del resto hidrofílico a la cadena hidrofóbica, los lípidos catiónicos exhiben la propiedad anfifílica. Tienen una carga positiva permanente en su cabeza polar, lo que ayuda en la interacción con los ácidos nucleicos cargados negativamente, mejorando la eficiencia del atrapamiento. El escape endosomal del sistema LNP y la captación celular también aumentan debido a la carga neta positiva. Para la administración de ARNm, se han investigado lípidos catiónicos, lípidos ionizables y otros tipos de lípidos. En comparación con los lípidos catiónicos no ionizables, los lípidos ionizables, que están cargados positivamente a un pH bajo y a un pH fisiológico permanecen neutros, son comparativamente menos tóxicos debido a las variaciones de pH. Dentro de la membrana celular están cargados positivamente y en el torrente sanguíneo poseen propiedades no cargadas. La vacuna BNT162b2 comprende el lípido catiónico ALC-0315 mientras que el ARNm-1273 comprende SM-102; a pH bajo, ambos lípidos están protonados, lo que formará fácilmente un complejo con el ARNm. Se combina una corriente de ARNm en agua con una mezcla de lípidos en etanol mediante un dispositivo de microfluidos. Para atrapar el ARNm cargado negativamente, los componentes de estas dos corrientes se combinan rápidamente para generar nanopartículas [75]. Para la vacuna BNT162b2 la relación molar del lípido catiónico: PEG-lípido: colesterol: DSPC es (46,3:1,6:42,7:9,4) y para el ARNm-1273 es (50:1,5:38,5:10). Las nanopartículas tienen un diámetro de 80 a 100 nm y hay aproximadamente 100 moléculas de ARNm por nanopartícula lipídica [73].

5.4.2. Los lípidos de polietilenglicol (PEG)

Para la estabilidad de los coloides y la prevención de la unión de proteínas a las nanopartículas se utilizan lípidos de polietilenglicol. Imparten una circulación sistémica más prolongada al minimizar la eliminación de las nanopartículas. Los LNP pueden causar agregación física en la solución, lo que puede aumentar el tamaño de las partículas de los LNP, y los lípidos de PEG pueden superar posiblemente incluso un problema de liberación prematura del ARNm encapsulado. Además, también se mejorará la estabilidad de almacenamiento de los LNP [76].

5.4.3. Colesterol

Para la transfección de células y para estabilizar las LNP, el colesterol tiene un papel vital. Se logra una temperatura de transición más baja cuando aumenta el contenido de colesterol en las LNP, lo que ayudará a liberar el ARNm de las LNP y su translocación a través de la membrana endosómica [77]. En un estudio realizado por Zhang et al., se formularon liposomas modificados utilizando el péptido catiónico DP7 modificado con colesterol junto con dioleoil{3}}trimetilamonio propano (DOTAP) como portador para la administración de ARNm. Los liposomas se prepararon mediante la técnica de hidratación de película y luego se evaluó su eficacia de transfección. In vitro, los estudios de transfección revelaron un aumento en la eficiencia de la transfección con un aumento en la concentración del péptido DP7. Además de esto, los estudios antitumorales in vivo demostraron que el complejo tenía mejor eficacia contra el tumor [78].

5.4.4. Otros excipientes

Las vacunas de ARNm están compuestas de estabilizadores, por ejemplo. Trometamina, que amortigua para mantener un pH de 7 a 8, Sales: ayuda a equilibrar la acidez del cuerpo, Azúcar que ayuda a las moléculas a mantener su forma durante la congelación, actúa como crioprotector y mantiene la estabilidad a largo plazo de la formulación de nanopartículas lipídicas y ARNm. [73]. En las Tablas 2 y 3 se proporciona un resumen de los ingredientes clave utilizados en las vacunas basadas en ARNm.

Tabla 2. Ingredientes clave utilizados en las vacunas basadas en ARNm.

Tabla 3. Ingredientes de formulación de las vacunas de ARNm de Pfizer y Moderna.

5.5. Otro sistema de administración de ARNm

5.5.1. Nanopartículas poliméricas

Las nanopartículas poliméricas se pueden sintetizar a partir de polímeros sintéticos o naturales como PLGA [poli(ácido láctico-co-glicólico)], quitosano, PLA (ácido poliláctico), policaprolactona, gelatina y polialquilcianoacrilatos. Estas nanopartículas poliméricas pueden encapsular compuestos y proteínas hidrofóbicos e hidrofílicos, con una larga vida útil; y puede modificar la administración de compuestos terapéuticos. El ARN se puede encapsular en polímeros catiónicos autoensamblados con modificación hidrofóbica [80,81].

5.5.2. Nanoemulsiones catiónicas

Se ha demostrado que las nanoemulsiones catiónicas son un vehículo eficaz para la administración de ácidos nucleicos. Los lípidos catiónicos presentes en las nanoemulsiones son importantes para formar complejos con ácido nucleico a través de interacciones electrostáticas y mejoran la eficiencia de transfección del ácido nucleico y su estabilidad. Los estudios revelan que el sistema de administración de nanoemulsiones catiónicas de ARNm mejora la respuesta inmune al reclutar células inmunes y provocar respuestas celulares a anticuerpos y primates T en dosis comparativamente bajas [80,82].

5.5.3. Nanopartículas de sílice

Las nanopartículas de sílice mesoporosas consisten en una matriz de sílice amorfa con porosidad bien dispuesta en el rango mesoporoso. Estas nanopartículas tienen grandes áreas de superficie con grandes volúmenes de poros y su superficie puede modificarse fácilmente mediante ciertos restos cargados positivamente para transportar eficazmente ARN cargado negativamente. Además, la administración dirigida de ARN puede ser posible uniendo ligandos específicos en la superficie [81]. Según un estudio realizado por Adam et al., se formuló para COVID-19 una vacuna nasal basada en micropartículas de silicio porosas modificadas (mPSM). La formulación provocó un aumento de las células T colaboradoras (Th1) y de las respuestas inmunitarias, y mPSM provocó la absorción de antígenos por la vía nasal. Se encontró que la carga viral se redujo significativamente [83].

5.5.4. Nanomateriales de carbono y oro

Los nanotubos de carbono, las nanopartículas de oro, el óxido de nanografeno y los puntos cuánticos son nanoestructuras sintetizadas que también tienen el potencial de entregar ARN al sitio objetivo y también protegerlo de la degradación [81].

6. Desafíos para el almacenamiento de vacunas

La estabilidad y los requisitos de almacenamiento son la principal preocupación de las vacunas de ARNm. La estabilidad depende de factores como los excipientes, el pH y la temperatura. La vacuna COVID-19 de BioNTech/Pfizer debe almacenarse a -80 ◦C y tiene una vida útil de hasta 6 meses, mientras que la vacuna COVID-19 de Moderna debe almacenarse a -20 ◦C. ◦C y tiene la misma vida útil. La vacuna BioNTech/Pfizer requiere embalaje con hielo seco durante el transporte. La distribución de ambas vacunas en los países pobres del mundo es un desafío, ya que las vacunas de ARNm deben almacenarse a temperaturas ultrafrías. Estos requisitos son costosos y en regiones del mundo con recursos limitados, los arreglos son difíciles. Uno de los problemas es el desarrollo de una vacuna de ARNm termoestable que sea clínicamente eficaz y pueda conservarse durante más tiempo sin incurrir en grandes costes de almacenamiento. Según las recomendaciones de almacenamiento de la EMA, las vacunas de ARNm fabricadas por Moderna y BioNTech son estables cuando se congelan hasta 6 meses a -25 ◦C, hasta 30 días a temperatura de refrigerador (4 ◦C) y hasta 6 h a temperatura ambiente. 84].

7. Seguridad y eficacia de las vacunas de ARNm

7.1. Seguridad de las vacunas basadas en ARNm

Se llevó a cabo una evaluación de los resultados relacionados con la seguridad de las vacunas de ARNm. Se llevó a cabo un ensayo abierto de fase 1 de aumento de dosis de ARNm-1273 en participantes de edades comprendidas entre 18 y 70 años o más [85]. El estudio se llevó a cabo en dos grupos en los que los participantes de 18 a 55 años recibieron la dosis de vacuna de 250 µg y los sujetos mayores recibieron 25 µg o 100 µg de la dosis. Después de la vacunación se observaron eventos adversos locales y sistémicos solicitados, eventos adversos no solicitados, eventos adversos graves y el desarrollo de nuevas afecciones médicas crónicas. Los resultados no mostraron ningún desarrollo de eventos adversos graves. Las reacciones adversas más típicas notificadas fueron dolores de cabeza, cansancio, mialgia, escalofríos y dolor en el lugar de la inyección. Se ha demostrado que los niveles de anticuerpos neutralizantes se correlacionan con la defensa contra una variedad de virus en humanos y con la defensa contra el SARS-CoV-2 en animales. La vacuna de ARNm-1273 en adultos mayores produjo altos niveles de anticuerpos vinculantes y neutralizantes, y las tendencias dependientes del tiempo y la dosis fueron similares a las respuestas en adultos más jóvenes. Las respuestas después de la segunda vacunación fueron comparables a las observadas en pacientes que se habían recuperado de COVID-19 y habían donado suero de convalecencia, incluidos algunos que estaban gravemente enfermos. Los pacientes de mayor edad que recibieron una dosis de 100 µg mostraron respuestas más altas de anticuerpos y células T en comparación con aquellos que recibieron 25 µg y la respuesta fue idéntica a la reacción en los participantes de 18 a 55 años que recibieron la dosis de 100 µg. Los pacientes mayores de 56 años deben recibir una segunda dosis de la vacuna para obtener anticuerpos neutralizantes. Al recibir una dosis de refuerzo, los títulos de anticuerpos aumentan rápidamente. Los resultados clave de seguridad de las vacunas Moderna y Pfizer observados durante varios ensayos clínicos se enumeran en la Tabla 4.

Tabla 4. Estudios de seguridad y eficacia de vacunas de ARNm en ensayos clínicos

Tabla 4. Cont.

Después de la segunda dosis de la vacuna, los eventos de reactogenicidad local y sistémica aumentaron en frecuencia y fueron principalmente de gravedad moderada. La incidencia de eritema se encontró en tres participantes y duró de 5 a 7 días. Los eventos adversos sistémicos solicitados, como fiebre y fatiga, se produjeron de manera destacada en el subgrupo de mayor edad. Todos estos hallazgos sugieren que los eventos adversos solicitados o no solicitados fueron de leves a moderadamente graves. Por lo tanto, el ARNm-1273 se probó más en ensayos de fase 2/3 para evaluar la seguridad y eficacia en poblaciones más grandes [95]. El ensayo clínico de fase 3 fue un estudio aleatorizado, estratificado, ciego para el observador y controlado con placebo, en el que participaron 30,420 voluntarios de 18 años o más, asignados aleatoriamente para recibir una vacuna (0,5 ml con 100 µg de dosis) o placebo. Se realizó un seguimiento de las reacciones locales durante los 7 días posteriores a la inmunización, los eventos adversos sistémicos, las reacciones adversas imprevistas después de 28 días de administración de la dosis y cualquier evento adverso significativo para la evaluación de la seguridad. Los efectos adversos solicitados fueron predominantes en el grupo de ARNm- 1273 en comparación con el grupo de placebo (84,2% frente a 19,8%). Algunos de los eventos más observados fueron dolor en el lugar de la inyección después de la vacunación, eritema, sensibilidad e induración. Estos eventos desaparecieron entre 4 y 5 días después de la vacunación. Después de la segunda dosis, el grupo de ARNm-1273 solicitó eventos sistémicos que se volvieron más graves. La presencia de reacciones de hipersensibilidad se produjo en el 1,5% y el 1,1% de los participantes en los grupos de vacuna y placebo, respectivamente. Aparte de estas quejas, no se plantearon problemas de seguridad después de la administración de la vacuna [106].

Se requirió una tercera dosis de vacuna debido a la disminución de la protección luego de dos inyecciones de ARNm de SARS CoV-2 y la introducción de variaciones. Después de administrar una tercera dosis de la vacuna de ARNm a personas que habían recibido previamente la serie primaria de ARNm-1273 en el estudio de Fase 1, se evaluaron su seguridad e inmunogenicidad tempranas. Un estudio transversal realizado en Nápoles (Italia) evaluó la preparación para recibir el refuerzo de la vacuna COVID-19. En este grupo, la aceptación de la dosis de refuerzo fue de casi el 86%. Además, las personas mayores con mejor salud después de la serie principal de vacunas, las que vivían con amigos o familiares que dieron positivo en la prueba de COVID-19 y las que habían recibido información relacionada con la enfermedad de instituciones públicas oficiales estaban dispuestas a recibir la vacuna de refuerzo. dosis [107].

La vacunación bivalente contenía 25 mcg de cada ARNm-1273 y ARNm-1273.351, mientras que las formulaciones de la vacuna de refuerzo contenían 100 mcg de ARNm-1273 y 50 mcg de ARNm-1273 .351, que codifica la proteína de pico variante Beta. Una tercera dosis de la vacuna de ARNm mostró una reactogenicidad y seguridad adecuadas. En comparación con las respuestas máximas después de la segunda dosis, los aumentos inducidos por la vacunación en los títulos de anticuerpos neutralizantes y de unión a las variantes D614G, Beta y Delta fueron similares o mayores. Se observó que los anticuerpos neutralizantes y de unión se redujeron constantemente. Sin embargo, la detección de anticuerpos se produjo entre 10 y 11 meses (antes de la tercera dosis) en los participantes, independientemente de la edad y de la dosis inicial de la serie primaria (p. ej., 25, 50, 100 y 250 µg). Dolor en el lugar de la inyección, cansancio, mialgia y escalofríos fueron los efectos adversos notificados con mayor frecuencia después de la tercera dosis de la vacuna de ARNm, y la frecuencia de estos eventos fue comparable entre los tres regímenes de vacuna de refuerzo (prototipo monovalente, variante monovalente y grupos bivalentes). ). Con el uso de vacunas de variante Beta monovalentes o bivalentes, no se observó ninguna ventaja o desventaja específica en las respuestas celulares a los epítopos dentro de los péptidos mutados Beta. Todos estos hallazgos respaldan la sugerencia actual de que se utilice un refuerzo de ARNm prototipo monovalente-1273 para proporcionar una protección cruzada inmunológica extensa entre variantes [95]. Según una encuesta, la administración heteróloga de BNT162b2 (BNT) en participantes preparados con ChAdOx1 (ChAd) (ChAd/BNT) demostró una inmunogenicidad no inferior a la administración de BNT homóloga (tanto la vacuna primaria como la de refuerzo eran vacunas BNT, BNT/BNT), con una reactogenicidad tolerable. y mayores respuestas de células T. En comparación con la vacunación homóloga con ChA dOX1 (ChAd/ChAd), la vacunación heteróloga con ChAd/BNT provocó una inmunogenicidad más fuerte (ChAd/BNT frente a ChAd/ChAd, relación de títulos de anticuerpos: 9,2) [108].

Se realizó un ensayo de fase 1 para BNT162b2 en 76 participantes; fueron asignados al azar para recibir dosis de vacuna de 10 µg, 30 µg y 100 µg, y el otro grupo recibió el placebo. El 58,3% de los sujetos que recibieron 10 µg y el 100% de 30 µg y 100 µg experimentaron dolor de reacción local solicitado en el lugar de la inyección después de la primera dosis. La gravedad de todas las reacciones locales fue de leve a moderada. La fatiga y el dolor de cabeza en BNT162b2 fueron eventos sistémicos comunes. Además, también se observaron escalofríos, dolores musculares y articulares. Con dosis crecientes, se informaron más eventos sistémicos después de administrar la segunda dosis. Un total del 50,0 por ciento de los participantes que recibieron 10 o 30 g de BNT162b1, el 58,3 por ciento de las personas que recibieron 100 g de BNT162b1 y el 11,1 por ciento de los que recibieron placebo informaron haber experimentado eventos adversos. No se informaron eventos adversos graves [109].

En un ensayo clínico de la vacuna Pfizer/BioNTech (BNT162b2), que fue un ensayo multinacional, controlado con placebo, ciego al observador, aleatorizado y fundamental sobre eficacia, se asignaron al azar 43.548 participantes de 16 años o más. Un total de 21.720 voluntarios recibieron 30 µg por dosis de BNT162b2 y 21.728 placebo. Para determinar el perfil de seguridad de BNT162b2 se evaluaron características como dolor en el lugar de la inyección, que es de corta duración, leve a moderado en caso de gravedad, fatiga y dolor de cabeza. Se administraron dos inyecciones de BNT162b2 o un placebo a todos los participantes, según la aleatorización con 21 días de diferencia, en el músculo deltoides [98]. Se informaron más reacciones locales en quienes recibieron la vacuna BNT162b2 en comparación con el grupo de placebo. El dolor leve a moderado en el lugar de la inyección fue la queja más común registrada entre los receptores de BNT162b2 en una semana. Se informó dolor intenso en menos del 1% de la población. El dolor se observó menos en los participantes de mayor edad en comparación con los más jóvenes. Se observó menos enrojecimiento o hinchazón. Después de la administración de la segunda dosis, se informaron menos reacciones locales [110].

Los participantes más jóvenes que recibieron la vacuna experimentaron más eventos sistémicos que los receptores de mayor edad. La fatiga y el dolor de cabeza (59% y 52%) fueron los eventos notificados con mayor frecuencia, y los sujetos vacunados fueron muy menos (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. Eficacia de las vacunas de ARNm

Para la evaluación de la eficacia del ARNm-1273, los criterios de valoración principales de la vacuna fueron la eficacia para prevenir la infección sintomática por COVID-19 después de 14 días de la segunda dosis de la vacuna. Como criterio de valoración secundario, se utilizó la prevención de la infección grave por COVID-19 con síntomas persistentes. Los resultados después de la vacunación muestran que hubo 11 casos de COVID-19 en el grupo vacunado y 185 casos en el grupo de placebo, lo que indica una eficacia del 94,1 % de la vacuna de ARNm-1273 para tratar el COVID sintomático-19 . Para los criterios de valoración secundarios de eficacia, se realizó una evaluación de la prevención de COVID grave-19. Los resultados indicaron una eficacia del 100% de la vacuna, ya que 30 participantes con infección viral estaban en el grupo de placebo. Un estudio realizado en Qatar demostró una eficacia de la vacuna (VE) de ARNm-1273 95.7% contra la infección por COVID-19 grave, crítica o mortal. Después de 14 días o más de la primera dosis, la efectividad fue del 88,1% contra la variante B.1.1.7 (alfa) y del 100% después de la segunda dosis. El 61,3% y el 96,4% de EV se notificaron después de la primera y segunda dosis de inmunización contra la cepa B.1.351 (beta). Por lo tanto, la vacuna tiene bastante éxito tanto contra la cepa, ya sea sintomática o asintomática, como contra cualquier hospitalización y muerte por COVID-19, incluso después de una sola dosis [112].

La eficacia (VE) de la vacuna BNT162b2 contra la COVID-19 confirmada que tuvo un inicio de al menos 7 días después de la segunda dosis en personas que no presentaban evidencia virológica o serológica de infección por SARS-CoV-2 fue la primera prueba primaria. punto final. El segundo criterio de valoración principal midió la eficacia en participantes con y sin evidencia de infección previa y la prevención de una infección grave por COVID-19. En una investigación con un total de 36,523 personas, se produjeron 8 casos de COVID-19 que comenzaron 7 días después de la segunda dosis en el grupo de vacunación, en comparación con 162 casos en el grupo de placebo. Esto muestra el 95% de la eficacia de la vacuna. Sin embargo, la EV observada contra la enfermedad viral fue del 52% entre la primera y la segunda dosis, y del 91% en los primeros 7 días posteriores a la dosis 2, alcanzando una eficacia completa contra la enfermedad con un inicio al menos 7 días después de la dosis 2. Solo 1 de los 10 casos graves de COVID-19 que se observaron después de la primera dosis ocurrió en el grupo que recibió la vacuna. Esta observación está en línea con la excelente eficacia general contra todos los pacientes con COVID-19. Se produjeron dos casos de infección en los pacientes hipertensos que recibieron la vacuna y 44 casos en el grupo de placebo. Este caso reporta un 94,6% de eficacia vacunal en pacientes hipertensos. Por tanto, la vacuna BNT162b2 cumple los criterios de valoración de eficacia tanto primarios como secundarios en los participantes vacunados [113]. Aparte de la infección por SARS-CoV-2, con una dosis única de la vacuna BNT162b2, la eficacia de la vacunación prevista contra la enfermedad sintomática con la variante delta (B.1.617.2) fue de aproximadamente el 36 %. Después de dos dosis, la EV fue de alrededor del 88 por ciento [114].

planta cistanche que aumenta el sistema inmunológico

8. Desafíos regulatorios

La ciencia regulatoria es la base sobre la cual se toman las decisiones regulatorias. Su objetivo principal es desarrollar nuevos métodos, herramientas y estándares para evaluar la seguridad, eficacia, calidad y desempeño de productos regulados en todas las etapas de su ciclo de vida [115]. Las vacunas de ARNm enfrentan el mismo tipo de obstáculos regulatorios que cualquier otro tipo de vacuna, incluida la necesidad de demostrar pruebas de seguridad y eficacia en estudios preclínicos, ensayos clínicos y vigilancia poscomercialización, así como mantener un alto estándar para la Materias primas utilizadas en la producción y consistencia de la fabricación. Las pruebas de vacunas dependen en gran medida de la confiabilidad y reproducibilidad de las enzimas, los nucleótidos y las plantillas de ADN lineal [116]. Los componentes brutos, como los lípidos, deben regularse estrictamente y demostrarse su pureza. Se deben seguir las buenas prácticas de fabricación (cGMP) actuales al crear la plantilla de ADN lineal. Para garantizar que el fármaco sea de la más alta calidad, es esencial vigilar el porcentaje de ARNm protegido y poliadenilado, el número de transcripciones cortas y la presencia de ARN bicatenario. La poliadenilación y la protección del extremo 50 del ARNm garantizan la estabilidad y la traducción efectiva [21]. La eficiencia de la traducción está estrechamente relacionada con la cola poli (A) [114]. Cuantificar la cantidad de ARNm encapsulado en la partícula y determinar la distribución de tamaño de las partículas es fundamental para el producto farmacéutico porque permite al fabricante garantizar la uniformidad de fabricación. Por lo general, el seguimiento se realiza en función de una serie de características, incluidas las relacionadas con la estabilidad, la identidad y la esterilidad. Uno de los problemas para los desarrolladores, reguladores y usuarios de vacunas es la estabilidad térmica de las vacunas de ARNm [115]. Las vacunas convencionales se someten a pruebas de estrés, incluida una exposición prolongada a temperaturas elevadas, para determinar su estabilidad en diversas circunstancias de almacenamiento. Esto también debe realizarse con las vacunas de ARNm, donde es necesario evaluar no sólo la estabilidad de la molécula de ARNm sino también la preservación de la estructura de la propia partícula de la vacuna. Aún es necesario desarrollar protocolos de prueba de integridad para componentes individuales de ARNm en vacunas de ARNm de múltiples componentes. La identificación de una vacuna de ácido nucleico está determinada por su secuencia. En general, para las vacunaciones con ARNm es suficiente la secuencia del primer plásmido de ADN utilizado como molde. Esto se debe a que el ADN se traduce instantáneamente en ARN. No se sabe si la secuenciación del ARNm, ya sea directamente o convirtiéndolo en ADNc y luego secuenciando ese ADN, proporcione información adicional. Aunque las tasas de error de las ARN polimerasas son sustancialmente mayores que las de las ADN polimerasas, las tasas de error indicadas de 1 error cada 104 a 105 nucleótidos serían difíciles de detectar en el ARN debido a la naturaleza aleatoria de los errores. Según las investigaciones actuales que sugieren que las vacunas de ARNm proporcionan inmunidad protectora en modelos animales, esta tasa de error no parece alterar la formación de un antígeno inmunogénico. La cuantificación de lípidos se puede realizar mediante LC-MS/MS [116]. Si la proteína se traduce demasiado rápido, es posible que no se pliegue adecuadamente en un antígeno funcional, lo que puede tener la consecuencia no deseada de reducir la eficacia de la vacuna.

9. Discusión

En 2021, las vacunas de ARNm atrajeron la atención por su posición crítica en la reacción de la industria farmacéutica al COVID-19. A diferencia de las vacunas virales tradicionales, que utilizan copias de virus debilitadas y no replicantes para mostrar antígenos y provocar una respuesta inmune, la estrategia de ARNm utiliza moléculas de ARNm monocatenarias optimizadas que pueden proporcionar inducción biológica. Una vez que tenga la vacuna, las células la absorberán, 'leerán' la secuencia de ARNm y producirán la proteína de pico. Como tu cuerpo carece de proteínas que se parezcan a ese pico, tu sistema inmunológico lo interpreta como dañino y lanza un ataque contra él. Además, si luego te infectas con el coronavirus, el sistema inmunológico recuerda la proteína de pico e incluso la reconoce. El notable ritmo al que se desarrollaron y pusieron a disposición del público en Estados Unidos las dos primeras vacunas contra la COVID-19 respalda la idea de que las vacunas de ARNm de Pfizer y Moderna recibieron permiso de uso de emergencia de la FDA en diciembre 2020-menos de un año después de que los científicos chinos anunciaran la composición genética del coronavirus. El principal beneficio de las tecnologías de vacunas basadas en ARNm es su potencial de modificarse rápidamente para diversas enfermedades, ya que el procesamiento del antígeno objetivo se "subcontrata" a las células huésped, lo que significa que sólo se utiliza el código genético del antígeno para diseñar una vacuna. candidato. El tiempo transcurrido entre que el gobierno chino intercambió su estructura genética del SARS-CoV-2 y Moderna transportó su vacuna candidata a los Institutos Nacionales de Salud (NIH) de Estados Unidos para los estudios de fase uno fue de solo 44 días. Históricamente, las vacunas de ARNm no han obtenido la autorización regulatoria para su uso en la humanidad debido a la percepción de una falta de ensayos clínicos para este método, así como a desafíos técnicos relacionados con la estabilidad y distribución del producto. Con tal aumento de vacunas de ARNm en el mercado, es posible obtener asesoramiento más preciso para ayudar en el desarrollo y evaluación de nuevas vacunas de ARNm. El control es otro campo en el que la ciencia de las vacunas de ARNm está en su infancia. Actualmente no existen directrices oficiales de la Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. ni de la Agencia Europea de Medicamentos para las vacunas de ARNm, a pesar de que los medicamentos son lo suficientemente seguros para ensayos clínicos importantes.

10. Observaciones finales y perspectivas futuras

Antes de 2020, el ARNm no era un término científico muy conocido en el mundo de las vacunas. Más de un año desde que comenzó la catastrófica pandemia global de COVID-19, los programas clínicos basados ​​en ARNm han experimentado un aumento sustancial en el apoyo, tanto del público en general como de las grandes farmacéuticas. Más de 80 millones de estadounidenses han sido vacunados contra el SARS CoV-2-el virus que causa el COVID-19, utilizando las posibilidades revolucionarias de la tecnología de ARNm. "El campo de las vacunas se ha transformado y avanzado para siempre gracias a la COVID-19", afirma Dan Barouch, MD, Ph.D., director del Centro de Virología e Investigación de Vacunas de la Facultad de Medicina de Harvard. Principalmente en el caso de la vacuna COVID-19, la cadena de ARNm está diseñada para producir la "proteína de pico" única del coronavirus, que produce una respuesta inmune que podría proteger contra la infección con el virus real. Las vacunas desarrolladas por Moderna y Pfizer/BioNTech han sido las únicas vacunas basadas en ARNm que obtuvieron la aprobación de emergencia de los reguladores clave, y la evidencia del mundo real del lanzamiento global de COVID-19 sería fundamental para reivindicar su eficacia a largo plazo. y elementos de seguridad contra el coronavirus y algunos otros agentes virales. La administración de ARNm basada en exosomas también será el futuro de las terapias basadas en ARNm [117,118]. Principalmente debido a las implicaciones de la tecnología basada en ARNm que se hacen evidentes a medida que estas vacunas de primera generación comienzan a implementarse a nivel mundial, actualmente hay un auge en la investigación clínica de ARNm para enfermedades infecciosas, y los investigadores de la industria anticipan un aumento en el interés en las plataformas de ARNm para otros campos terapéuticos. , especialmente oncología, pero incluso enfermedades autoinmunes poco comunes y genes neurológicos.

Referencias

1. QUIÉN. Panel de control del coronavirus (COVID-19) de la OMS 2023. Disponible en línea: https://covid19.who.int/ (consultado el 17 de enero de 2023).

2. Pal, R.; Yadav, U. Pandemia de COVID-19 en la India: escenario actual y un fuerte ascenso por delante. J. Prim. Care Community Health 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. Keni, R.; Alejandro, A.; Nayak, PG; Mudgal, J.; Nandakumar, K. COVID-19: aparición, propagación, posibles tratamientos y carga global. Frente. Salud Pública 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. Chavda, vicepresidente; Ping, FF-F.; Chen, Z.-S. Un impacto de COVID-19 en la atención del cáncer: una actualización. Vacunas 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. Harapan, H.; Itoh, N.; Yufika, A.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; Megawati, D.; Hayati, Z.; Wagner, AL; Mudatsir, M. Enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19): una revisión de la literatura. J. Infectar. Salud pública 2020, 13, 667–673. [Referencia cruzada] [PubMed]

6. Chavda, vicepresidente; Chhabria, MT; Apostolopoulos, V. Población de edad avanzada y pacientes inmunodeprimidos: impacto en las variantes del SARS-CoV-2 y los resultados del tratamiento. Biológicos 2022, 2, 165–170. [Referencia cruzada]

7. Chavda, vicepresidente; Redwan, EM SARS-CoV-2: inmunopeptidómica y otros estudios inmunológicos. Vacunas 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. Kyriakidis, Carolina del Norte; López-Cortés, A.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO Estrategias de vacunas contra el SARS-CoV-2: una revisión exhaustiva de las vacunas candidatas de la fase 3. Vacunas Npj 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; Voleti, N.; Groff, D.; Sol, A.; Ba, DM; Núñez, J.; Padre, LJ; Chinchili, VM; Paules, CI SARS CoV-2 Eficacia de la vacuna contra la infección por COVID sintomática y grave-19: una revisión sistemática y un metanálisis. Infección BMC. Dis. 2022, 22, 439. [Referencia cruzada]

10. Chavda, vicepresidente; Vora, LK; Vihol, DR Vacuna COVAX-19®: bloquea completamente la transmisión del virus a personas no inmunes. Clínico. Complemento Med. Farmacéutico. 2021, 1, 100004. [Referencia cruzada]

11. Chavda, vicepresidente; Vora, LK; Pandya, Alaska; Patravale, VB Vacunas intranasales para el SARS-CoV-2: de los desafíos al potencial en el manejo de la COVID-19. Descubrimiento de drogas. Hoy 2021, 26, 2619–2636. [Referencia cruzada]

12. Kaur, SP; Gupta, V. Vacuna COVID-19: un informe de estado completo. Resolución de virus. 2020, 288, 198114. [Referencia cruzada]

13. Vasireddy, D.; Atluri, P.; Malayala, SV; Vanapartid, R.; Mohan, G. Revisión de las vacunas contra la COVID-19 aprobadas en los Estados Unidos de América para uso de emergencia. J.Clin. Medicina. Res. 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; Shao, W.; Chen, X.; Zhang, B.; Wang, G.; Zhang, W. Efectividad de las vacunas COVID-19 en el mundo real: revisión de la literatura y metanálisis. En t. J. Infectar. Dis. 2022, 114, 252–260. [Referencia cruzada]

15. Alagoz, O.; Sethi, Alaska; Patterson, BW; Churpek, M.; Alhanae, G.; Scaria, E.; Safdar, N. El impacto de la vacunación para controlar la carga de COVID-19 en los Estados Unidos: un enfoque de modelado de simulación. MÁS UNO 2021, 16, e0254456. [Referencia cruzada]

16. Cromer, D.; Stein, M.; Reynaldi, A.; Schlub, TE; Wheatley, Alaska; Juno, JA; Kent, SJ; Triccas, JA; Khoury, DS; Davenport, MP Títulos de anticuerpos neutralizantes como predictores de protección contra las variantes del SARS-CoV-2 y el impacto del refuerzo: un metanálisis. Lancet Microbe 2022, 3, e52 – e61. [Referencia cruzada]

17. Zhao, J.; Zhao, S.; Ou, J.; Zhang, J.; Lan, W.; Guan, W.; Wu, X.; Yan, Y.; Zhao, W.; Wu, J.; et al. COVID-19: Actualizaciones sobre el desarrollo de la vacuna contra el coronavirus. Frente. Inmunol. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; Beiss, V.; Fiering, SN; Steinmetz, NF COVID-19 Vacunas pioneras y su diseño nanotecnológico. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [Referencia cruzada] [PubMed]

19. Jainista, S.; Venkataraman, A.; Wechsler, ME; Peppas, NA Vacunas basadas en ARN mensajero: direcciones pasadas, presentes y futuras en el contexto de la pandemia de COVID-19. Adv. Entrega de drogas. Rev.2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. Arashkia, A.; Jalilvand, S.; Mohajel, N.; Afchangi, A.; Azadmanesh, K.; Salehi-Vaziri, M.; Fazlalipour, M.; Pouriayevali, MH; Jalali, T.; Mousavi Nasab, SD; et al. Candidatas a vacunas basadas en proteína Spike (S) para el síndrome respiratorio agudo severo-Coronavirus-2: estado del arte y perspectivas futuras. Rev. Med. Virol. 2021, 31, e2183. [Referencia cruzada]

21. Park, JW; Lagniton, PNP; Liu, Y.; Xu, vacunas RH MRNA para COVID-19: qué, por qué y cómo. En t. J. Biol. Ciencia. 2021, 17, 1446. [Referencia cruzada]

22. Zhu, N.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, X.; Yang, B.; Canción, J.; Zhao, X.; Huang, B.; Shi, W.; Lu, R.; et al. Un nuevo coronavirus procedente de pacientes con neumonía en China, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [Referencia cruzada] [PubMed]

23. Wang, MI; Zhao, R.; Gao, LJ; Gao, XF; Wang, director de fotografía; Cao, JM SARS-CoV-2: estructura, biología y desarrollo terapéutico basado en estructuras. Frente. Celúla. Infectar. Microbiol. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. Chavda, vicepresidente; Hossain, MK; Beladiya, J.; Apostolopoulos, V. Vacunas de ácido nucleico para COVID-19: un cambio de paradigma en el ámbito del desarrollo de vacunas. Biológicos 2021, 1, 337–356. [Referencia cruzada]

25. Chavda, vicepresidente; Pandya, R.; Apostolopoulos, V. Vacunas de ADN para el SARS-CoV-2: hacia la era de la vacunación de tercera generación. Experto Rev. Vacunas 2021, 20, 1549–1560. [Referencia cruzada] [PubMed]

26. Yang, H.; Rao, Z. Biología estructural del SARS-CoV-2 e implicaciones para el desarrollo terapéutico. Nat. Rev. Microbiol. 2021, 19, 685–700. [Referencia cruzada]

27. Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK; Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK Respuesta inmune del huésped e inmunobiología de la infección humana por SARS-CoV-2. Enfermedad por coronavirus. 2019 (COVID-19) 2020, 43–53. [Referencia cruzada]

28. Asturias, EJ; Duclos, P.; MacDonald, NE; Nohynek, H.; Lambert, PH Educación avanzada en vacunología: análisis de su crecimiento y huella global. Vacuna 2020, 38, 4664–4670. [Referencia cruzada]

29. Kardani, K.; Bolhassani, A.; Shahbazi, S. Estrategia de vacuna Prime-Boost contra infecciones virales: mecanismos y beneficios. Vacuna 2016, 34, 413–423. [Referencia cruzada]

30. Chen, JM ¿Debería el mundo colaborar de forma inminente para desarrollar vacunas vivas atenuadas desatendidas contra la COVID-19? J. Med. Virol. 2022, 94, 82–87. [Referencia cruzada]

31. Chavda, vicepresidente; Vihol, DR; Solanki, HK; Apostolopoulos, V. El mundo de las vacunas COVID-19: la contribución de la India. Vacunas 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. Ashraf, MU; Kim, Y.; Kumar, S.; Seo, D.; Ashraf, M.; Bae, YS Vacunas COVID-19 (revisadas) y sistema vectorial oral-mucoso como posible plataforma de vacunación. Vacunas 2021, 9, 171. [CrossRef]

33. Menor, K.; Whittaker, GR Vacunación contra la COVID-19: puntos de referencia en salud pública y transmisión de virus. Salud Pública 2021, 197, e23. [Referencia cruzada] [PubMed]

34. Chavda, vicepresidente; Apostolopoulos, V. ¿Es la estrategia de dosis de refuerzo suficiente para la variante Omicron del SARS-CoV-2? Vacunas 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. Chavda, vicepresidente; Bezbaruah, R.; Athalye, M.; Parikh, PK; Chhipa, AS; Patel, S.; Apostolopoulos, V. Replicación de vacunas basadas en vectores virales para COVID-19: vía potencial en el ámbito de la vacunación. Virus 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. Chavda, vicepresidente; Apostolopoulos, V. COVID-19 Diseño de vacunas y estrategia de vacunación para variantes emergentes. Experto Rev. Vacunas 2022, 21, 1359–1361. [Referencia cruzada] [PubMed]

37. Chavda, vicepresidente; Vuppu, S.; Mishra, T.; Kamaraj, S.; Patel, AB; Sharma, N.; Chen, Z.-S. Revisión reciente del manejo de COVID-19: diagnóstico, tratamiento y vacunación. Farmacéutico. Representante 2022, 74, 1120–1148. [Referencia cruzada]

38. Chavda, vicepresidente; Chen, Y.; Dave, J.; Chen, Z.-S.; Chauhan, Carolina del Sur; Yallapu, MM; Uversky, VN; Bezbaruah, R.; Patel, S.; Apostolopoulos, V. COVID-19 y la vacunación: mitos versus ciencia. Experto Rev. Vacunas 2022, 21, 1603–1620. [Referencia cruzada]

39. Chavda, vicepresidente; Bezbaruah, R.; Deka, K.; Nongrang, L.; Kalita, T. Las variantes Delta y Omicron del SARS-CoV-2: lo que sabemos hasta ahora. Vacunas 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. Fioretti, D.; Iurescia, S.; Fazio, VM; Rinaldi, M. Vacunas de ADN: desarrollo de nuevas estrategias contra el cáncer. J. Biomed. Biotecnología. 2010, 2010, 174378. [Referencia cruzada]

41. Zhao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Canción, J.; Wang, W.; Du, Y.; Huang, B.; Wang, W.; Zhang, L.; Zhao, P.; et al. La co-inmunización con vacunas CHIKV VLP y ADN induce una respuesta humoral prometedora en ratones. Frente. Inmunol. 2021, 12, 925. [Referencia cruzada]

42. Kalams, SA; Parker, SD; Elizaga, M.; Metch, B.; Edupuganti, S.; Hural, J.; De Rosa, S.; Carter, DK; Rybczyk, K.; Frank, I. Seguridad e inmunogenicidad comparativa de una vacuna de ADN contra el VIH-1 en combinación con el plásmido interleucina 12 e impacto de la electroporación intramuscular para su administración. J. Infectar. Dis. 2013, 208, 818–829. [Referencia cruzada]

43. Bezbaruah, R.; Chavda, vicepresidente; Nongrang, L.; Alom, S.; Deka, K.; Kalita, T.; Ali, F.; Bhattacharjee, B.; Vora, L. Sistemas de administración de vacunas basados ​​en nanopartículas. Vacunas 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. Karam, M.; Daoud, G. Vacunas de ARNm: pasado, presente, futuro. Asiático J. Pharm. Ciencia. 2022, 17, 491–522. [Referencia cruzada] [PubMed]

45. Dolgin, E. La enredada historia de las vacunas de ARNm. Naturaleza 2021, 597, 318–324. [Referencia cruzada] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; Obst, R.; Rammensee, HG; Jung, G. indefinido La aplicación in vivo de ARN conduce a la inducción de anticuerpos y linfocitos T citotóxicos específicos. EUR. J. Inmunol. 2000, 30, 1–7. [Referencia cruzada]

47. Kose, N.; zorro, JM; Sapparapu, G.; Lombardi, R.; Tennekoon, enfermera registrada; Dharshan De Silva, A.; Elbashir, SM; Theisen, MA; Humphris-Narayanan, E.; Ciaramella, G.; et al. Un ARNm encapsulado en lípidos que codifica un anticuerpo monoclonal humano potentemente neutralizante protege contra la infección por chikungunya. Ciencia. Inmunol. 2019, 4, eaaw6647. [Referencia cruzada]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Türeci, Ö. Terapéutica basada en ARNm: desarrollo de una nueva clase de fármacos. Nat. Rev. Descubrimiento de Drogas. 2014, 13, 759–780. [Referencia cruzada]

49. Moss, P. La respuesta inmune de las células T contra el SARS-CoV-2. Nat. Inmunol. 2022, 23, 186–193. [Referencia cruzada] [PubMed]

50. Nance, KD; Meier, JL Modificaciones en caso de emergencia: el papel de la N1-metilpseudouridina en las vacunas COVID-19. Céntimo ACS. Ciencia. 2021, 7, 748–756. [Referencia cruzada]

51. Kremsner, PG; Ahuad Guerrero, RA; Arana-Arri, E.; Aroca Martínez, GJ; Bonten, M.; Chandler, R.; Corral, G.; De Block, EJL; Ecker, L.; Gabor, JJ; et al. Eficacia y seguridad de la vacuna candidata de ARNm CVnCoV SARS-CoV-2 en diez países de Europa y América Latina (HERALD): un ensayo de fase 2b/3, aleatorizado, cegado por el observador y controlado con placebo. Infección por lanceta. Dis. 2022, 22, 329–340. [Referencia cruzada]

52. Blakney, Alaska; IP, S.; Geall, AJ Actualización sobre el desarrollo de vacunas de ARNm autoamplificadas. Vacunas 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. Nuevas esperanzas en la tecnología de vacunas: vacunas de ARNm. Microbiol. Bulto. 2021, 55, 265–284. [Referencia cruzada]

54. Jackson, NAC; Kester, KE; Casimiro, D.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. La promesa de las vacunas de ARNm: una perspectiva industrial y biotecnológica. Vacunas Npj 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. Bloom, K.; van den Berg, F.; Arbuthnot, P. Vacunas de ARN autoamplificadoras para enfermedades infecciosas. Gene. El r. 2021, 28, 117-129. [Referencia cruzada]

56. Kon, E.; Elía, U.; Peer, D. Principios para el diseño de una vacuna óptima de nanopartículas lipídicas de ARNm. actual. Opinión. Biotecnología. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. Li, Y.; Teague, B.; Zhang, Y.; Su, Z.; Portero, E.; Dobosh, B.; Wagner, T.; Irvine, DJ; Weiss, R. Evolución in vitro de replicones de ARN mejorados para inmunoterapia. Ciencia. Rep. 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; Lacroix, C.; Expósito, JY; Verrier, B. Adaptación de la vacuna de ARNm para equilibrar la respuesta inmune innata/adaptativa. Tendencias Mol. Medicina. 2020, 26, 311–323. [Referencia cruzada]

59. Muestra, PJ; Wang, B.; Reid, DW; Presnyak, V.; McFadyen, IJ; Morris, DR; Seelig, G. Diseño de UTR humana 50 y predicción de efectos variantes a partir de un ensayo de traducción masiva en paralelo. Nat. Biotecnología. 2019, 37, 803–809. [Referencia cruzada]

60. Kumar, P.; Sweeney, TR; Skabkin, MA; Skábkina, OV; Hellen, CU; Pestova, La inhibición televisiva de la traducción por parte de los miembros de la familia IFIT está determinada por su capacidad para interactuar selectivamente con las 50 -regiones terminales de Cap0-, Cap1-y 50 Ppp-MRNA. Ácidos nucleicos res. 2014, 42, 3228–3245. [Referencia cruzada]

61. Strenkowska, M.; Grzela, R.; Majewski, M.; Wnek, K.; Kowalska, J.; Lukaszewicz, M.; Zuberek, J.; Darzynkiewicz, E.; Kuhn, AN; Sahin, U.; et al. Los análogos de tapa modificados con un resto de 1,2-ditiodifosfato protegen el ARNm de la descapsulación y mejoran su potencial de traducción. Ácidos nucleicos res. 2016, 44, 9578–9590. [Referencia cruzada]

62. Rydzik, AM; Warminski, M.; Sikorski, PJ; Baranowski, señor; Walczak, S.; Kowalska, J.; Zuberek, J.; Lukaszewicz, M.; Nowak, E.; Claridge, TDW; et al. Análogos de la tapa de ARNm sustituidos en la cadena de tetrafosfato con CX2: identificación de O-a-CCl2 como la primera modificación puente que confiere resistencia a la descapsulación sin afectar la traducción. Ácidos nucleicos res. 2017, 45, 8661–8675. [Referencia cruzada] [PubMed]

63. Nicholson, AL; Pasquinelli, AE Tales of Detail Poly (A) Tails. Tendencias Cell Biol. 2019, 29, 191–200. [Referencia cruzada] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. Los principios organizativos del reclutamiento de ribosomas eucarióticos. Año. Rev. Química. 2019, 88, 307–335. [Referencia cruzada]

65. Pascolo, S. El gran mensaje del mensajero para la vacunación. Expert Rev. Vacunas 2014, 14, 153–156. [Referencia cruzada]

66. Rosa, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, MPC Fabricación de vacunas de ARNm: desafíos y obstáculos. Vacuna 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. ARN mensajero: el biofarmacéutico económico. J. Multidisciplinar. Ing. Ciencia. Tecnología. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; Andreadakis, Z.; Kumar, A.; Gómez Román, R.; Tollefsen, S.; Saville, M.; Mayhew, S. El panorama del desarrollo de la vacuna COVID-19. Nat. Rev. Descubrimiento de Drogas. 2020, 19, 305–306. [Referencia cruzada]

69. Maruggi, G.; Zhang, C.; Li, J.; Ulmer, JB; Yu, D. ARNm como tecnología transformadora para el desarrollo de vacunas para controlar enfermedades infecciosas. Mol. El r. 2019, 27, 757–772. [Referencia cruzada]