Plataformas de vacunas basadas en ácidos nucleicos contra la enfermedad del coronavirus 19 (COVID-19)

Abstracto

La pandemia de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) ha infectado a 673.010.496 pacientes y ha provocado la muerte de 6.854.959 casos en todo el mundo hasta hoy. Se han realizado enormes esfuerzos para desarrollar plataformas de vacunas contra la COVID-19 fundamentalmente diferentes. Las vacunas a base de ácido nucleico que consisten en vacunas de ARNm y ADN (vacunas de tercera generación) han resultado prometedoras en términos de producción rápida y conveniente y provocación eficiente de respuestas inmunes contra COVID-19. Varios basados ​​en ADN (ZyCoV-D, INO-4800, AG0302-COVID19 y GX-19N) y en ARNm (BNT162b2, ARNm-1273 y ARCoV) Se han utilizado plataformas de vacunas aprobadas para la prevención de COVID-19. Las vacunas de ARNm están a la vanguardia de todas las plataformas para la prevención de la COVID-19. Sin embargo, estas vacunas tienen menor estabilidad, mientras que las vacunas de ADN necesitan dosis más altas para estimular las respuestas inmunes. Es necesario seguir investigando la administración intracelular de vacunas basadas en ácidos nucleicos y sus efectos adversos. Teniendo en cuenta el resurgimiento de las variantes preocupantes de la COVID-19, la reevaluación de las vacunas y el desarrollo de vacunas polivalentes, o estrategias pan-coronavirus, son esenciales para una prevención eficaz de las infecciones.

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Palabras clave

Enfermedad por coronavirus 19 · Vacunas a base de ácido nucleico · Inmunidad · Protección

Fondo

A finales de 2019, surgió un nuevo coronavirus beta en Wuhan, China, y se extendió rápidamente por todo el mundo. La enfermedad del coronavirus 2019 (COVID-19) tiene un alto potencial de pandemia debido a su alta tasa de contagio con alta mortalidad a nivel mundial (Sharma et al. 2020; Su et al. 2020; Wibawa 2021). Por lo tanto, se necesitan esfuerzos sustanciales para desarrollar vacunas o terapias eficaces contra la enfermedad (Su et al. 2020). Los síntomas de la enfermedad COVID-19 varían, incluidos síntomas leves parecidos a los de la gripe, neumonía, síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA) y desenlace fatal. Los pacientes con cáncer, diabetes, enfermedades cardiovasculares, adultos mayores e incluso personas genéticamente predispuestas tienen el mayor riesgo de sufrir gravedad de COVID-19 (Sharma et al. 2020; Su et al. 2020; Wibawa 2021; Vakil et al. 2022). Según las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud (OMS), el uso de mascarillas, el uso de medicamentos antivirales, el distanciamiento social y el cumplimiento de los procedimientos de vacunación son comportamientos cruciales para controlar la pandemia de COVID-19 en todo el mundo (Sharma et al. 2020). El esfuerzo científico hacia el desarrollo de vacunas eficientes contra patógenos invasivos se remonta a muchos años atrás (Deb et al. 2020; Zhang et al. 2020; Wibawa 2021). Estas plataformas de vacunas también se han diseñado contra bacterias patógenas (Farhani et al. 2019; Jafari y Mahmoodi 2021). En este sentido, el desarrollo de una vacuna eficaz, protectora y segura se considera un enfoque preventivo fundamental para impedir la propagación del coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo grave (SARS-CoV-2) (Moore y Klasse 2020). Por ello, diferentes empresas farmacéuticas y equipos de investigación a nivel mundial compitieron para presentar una vacuna segura y eficiente contra el COVID-19 para uso de la comunidad internacional. Estos esfuerzos han desarrollado otras plataformas de vacunas para ingresar a ensayos clínicos y preclínicos y algunas de ellas han sido aprobadas (Chen et al. 2021), incluidas vacunas tradicionales como vacunas vivas o inactivadas, de subunidades y basadas en ácidos nucleicos como vacunas de próxima generación. (Moore y Klasse 2020). Según la evidencia científica, las vacunas vivas atenuadas estimulan las respuestas inmunitarias innatas, celulares y humorales al inducir receptores tipo Toll (TLR) con inmunidad a largo plazo y pueden desarrollar hipersensibilidad. El principal inconveniente de estas vacunas son sus costosas evaluaciones de seguridad y eficacia. Las vacunas virales inactivadas provocan escasamente respuestas inmunitarias celulares, lo que mitiga su eficacia. En abril de 2020, Sinovac y el Instituto de Productos Biológicos de Wuhan (Sinopharm) fabricaron una vacuna inactivada contra la COVID-19 (Moore y Klasse 2020; Su et al. 2020). Las vacunas subunitarias son seguras, con algunos defectos que incluyen baja inmunogenicidad, necesidad de refuerzo o adyuvante y alto costo (Koirala et al. 2020; Su et al. 2020). Las vacunas basadas en ácidos nucleicos se han desarrollado basándose en información de secuencia. Incluyen secuencias de ADN o ARNm de antígenos que estimulan fuertemente las respuestas inmunes celulares y humorales en varias dosis. Debido a sus ventajas, como la rápida producción y las primeras vacunas contra la COVID-19 en ensayos clínicos, una ventaja notable de las vacunas basadas en ADN es su estabilidad en diversas condiciones de almacenamiento (Silveira et al. 2020; van Riel y de Ingenio 2020). Las vacunas basadas en ARN recibieron más atención por parte de compañías farmacéuticas como Pfizer/Biotech y Moderna. A diferencia de las vacunas de ADN, estimulan una respuesta inmunitaria humoral eficaz como ligandos TLR sin adyuvante y su secuencia se modifica para impedir la degradación del ARNm (Moore y Klasse 2020; van Riel y de Wit 2020; Soiza et al. 2021). Esta revisión tuvo como objetivo evaluar los avances recientes en vacunas basadas en ácidos nucleicos, incluidas las vacunas de ARNm y ADN contra la COVID-19.

Texto principal

Mecanismo molecular de infección y respuesta inmune del coronavirus.

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El genoma de COVID-19 es un ARN monocatenario positivo que codifica cuatro proteínas estructurales principales que consisten en la envoltura (E), la espiga (S), la membrana (M) y la nucleocápside (N) (Stadler y Rappuoli 2005). como se representa en la Fig. 1a. El SARS-CoV humano contiene glicoproteína de pico (S) como parte de la envoltura. La incorporación del virus a las células huésped se realiza mediante la proteína de pico que consta de subunidades S1 y S2. Desempeñan un papel esencial en la unión a los receptores de la célula huésped conocidos como enzima convertidora de angiotensina II (ACE2) para el inicio de la infección (Fig. 1b). La región central del dominio S1 que se une a ACE2 con alta afinidad es un dominio de unión al receptor (RBD). En este sentido, la interacción entre RBD y ACE2 es necesaria para el inicio de la infección de células humanas (He et al. 2020). Además, el truncamiento de la proteína S es esencial para la entrada viral a las células huésped; Después de la unión de la región RBD a ACE2, una proteasa del huésped conocida como TM proteasa serina 2 (TMPRSS2) escinde la proteína S en los dominios S1 y S2, lo que conduce a la fusión del dominio S2 con la célula huésped (Huang et al. 2020). Aunque las fuertes respuestas inmunes son efectivas contra el COVID-19, la hipersensibilidad y la tormenta de citocinas (principalmente interleucina-6-, IL-1b, GM-CSF-, interferón-/IFN-, factor de necrosis/ TNF -, IL-10-, IL-2- y IL- 7-respuestas impulsadas) deben prohibirse (Chowdhury et al. 2020). Después de la unión viral (interacción pico-ACE2) y la entrada a las células respiratorias, los macrófagos alveolares fagocíticos y las células dendríticas (DC) presentan antígenos virales a las células T y activan las T CD4+(células T auxiliares) y T CD{{37 }}(célula T citotóxica). Posteriormente, se liberan citocinas proinflamatorias como IL6, IL12, TNF e IFN, etc. para enfrentarse al virus. Sin embargo, los altos niveles de producción de citoquinas que conducen a la tormenta de citoquinas causan daño pulmonar (Hosseini et al. 2020). Según la evidencia científica, las células T auxiliares son necesarias para la eliminación de infecciones virales, la inducción de células B para producir anticuerpos y la estimulación de células T citotóxicas (Sharma et al. 2020). Dianas antigénicas de la COVID-19 Para desarrollar una vacuna segura y protectora contra un organismo patógeno, es esencial identificar las mejores dianas inmunogénicas (Lu et al. 2020b). La adopción de objetivos antigénicos potenciales es fundamental para provocar que los epítopos de células T y B induzcan adecuadamente la inmunidad celular y humoral (Rueckert y Guzmán 2012). La proteína S viral interactúa con las células huésped a través del dominio RBD como ligando esencial. El dominio RBD puede inducir la producción de anticuerpos neutralizantes y una respuesta inmune de células T contra COVID-19. Además, se confirma la inmunogenicidad de la proteína S (Pushparajah et al. 2021). La proteína N tiene una secuencia pequeña y muy conservada en comparación con otras proteínas virales. La proteína N se expresa altamente durante la infección viral, con una importante respuesta inmune humoral asociada contra COVID-19 entre los pacientes. Además, con respuestas celulares contra la proteína N, puede considerarse un antígeno candidato adecuado en el diseño de vacunas (Dutta et al. 2020). Además, la proteína M y la proteína E estimulan los epítopos T CD4+ (Wang et al. 2005; Abdelmageed et al. 2020; Dong et al. 2020). Provocar fuertes respuestas inmunes contra la proteína S es determinante y necesario (Buchholz et al. 2004). La proteína S incluye los epítopos de células T y B más inmunogénicos conocidos como objetivos preferidos en el desarrollo de vacunas contra la COVID-19. Se ha aplicado en todas las vacunas de plataforma de ARNm desarrolladas, como las vacunas de Pfizer/BioNtech y Moderna.

Fig. 1 a Estructura del virión SARS-CoV-2; Las principales proteínas de superficie del virus COVID-19 incluyen la glicoproteína Spike (S), las proteínas de membrana (M) y de envoltura (E). La proteína S es la principal vacuna y diana terapéutica que interactúa con el receptor de la enzima convertidora de angiotensina II (ACE2) para el inicio de la infección. b Dominios de proteína de pico; la proteína S incluye subunidades S1 (NTD o dominio no traducido y RBD o dominio de unión al receptor) y S2

Historia de los fármacos a base de ácidos nucleicos.

Los oligonucleótidos se iniciaron en ensayos clínicos hace más de 30 años. La historia del uso de enfoques terapéuticos basados ​​en ácidos nucleicos se remonta a 1977, cuando Paterson et al. utilizaron ácidos nucleicos para sintonizar la expresión genética (Paterson et al. 1977). Actualmente, han recibido más consideración. Los medicamentos a base de ácido nucleico se dividen en diferentes categorías, incluidas formas antisentido, ribozimas, ARNm y vacunas basadas en ADN (Sharma et al. 2014). Un oligodesoxinucleótido sintético inhibió la replicación del virus del sarcoma de Rous (RSV), que era complementario al ARNm del RSV y se conocía como antisentido (Zamecnik y Stephenson 1978). El primer antisentido se introdujo en la clínica contra el citomegalovirus (CMV) (Mulamba et al. 1998). Los pequeños ARN de interferencia (ARNip) poseen el potencial de inhibir la expresión génica y, por primera vez, se informó de ello en 1998. Otro grupo de ARN pequeños no codificantes incluye los microARN (miARN) que poseen un papel indispensable en la regulación de la expresión génica, con funciones similares a las del ARNip y potencial terapéutico (Usman y Blatt 2000; Sharma et al. 2014). Como se mencionó, la clase de ribozimas de moléculas de ARN actúa como enzimas que se dirigen a la transcripción. Las ribozimas entraron en ensayos clínicos contra el cáncer y algunas infecciones virales como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) (Usman y Blatt 2000; Abera et al. 2012). Además de las vacunas basadas en ARNm y ADN, se clasifican en medicamentos basados ​​en ácidos nucleicos introducidos en 1990 y recibieron más atención en el desarrollo de vacunas para combatir la COVID-19 (Le et al. 2020; Zhang et al. .2020). Las principales ventajas de estos grupos de vacunas incluyen su rápida producción y alta especificidad contra los antígenos diana correspondientes (Le et al. 2020).

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Vacunas basadas en ARNm

La entrega inicial de moléculas de ARNm a las células huésped incluyó la transfección de ARNm a células de fibroblastos utilizando un lípido catiónico (Park et al. 2021). Las vacunas de ARNm incluyen ARNm de antígenos patógenos que producen proteínas antigénicas por parte de las células humanas. Varias ventajas de las vacunas de ARNm incluyen un proceso de producción simple, inmunidad eficiente y protectora, manipulación e industrialización convenientes y flexibilidad para responder a las variantes de COVID-19 (Kaufman et al. 2016; Fang et al. 2022). Algunos enfoques, como la adición de secuencias 5'-cap y Kozak, se aplican utilizando secuencias 3'-poli-A y modificación de nucleósidos de ARNm (Borah et al. 2021). Las vacunas de ARNm se traducen al citosol del huésped. Por lo tanto, no existe ningún riesgo en la inserción de genomas del huésped, lo que se conoce como su principal ventaja. En este sentido, las vacunas basadas en ARNm recibieron recientemente más atención como enfoque preventivo seguro contra el cáncer y las enfermedades infecciosas (Kaur y Gupta 2020). El principal mecanismo de acción de las vacunas de ARNm se muestra en la Fig. 2.

Vacunas basadas en ADN

Las vacunas de ADN comprenden varios genes que codifican péptidos antigénicos virales expresados ​​por vectores plasmídicos y transmitidos a las células mediante electroporación (EP). En comparación con otras plataformas de vacunas, las vacunas de ADN proponen una plataforma flexible y rápida para desarrollar vacunas, lo que las convierte en una tecnología fascinante para luchar contra epidemias en desarrollo como la COVID-19. Además, la producción de antígeno de la vacuna de ADN se produce en las células diana, lo que ayuda a recapitular la conformación natural del antígeno viral y la modificación postraduccional. La principal desventaja de las vacunas de ADN es su inmunogenicidad restringida. Por lo tanto, es importante considerar estrategias como el adyuvante o el uso de un régimen de refuerzo que podría aumentar el potencial de la vacuna de ADN. Además, la integración del ácido nucleico en el ADN del huésped es otra preocupación de bioseguridad que resulta en oncogénesis y mutagénesis (Rauch et al. 2018). Aunque según estudios previos, el riesgo de la inserción de una vacuna de ADN es insignificante, la OMS y la FDA recomiendan la implementación de la seguridad de la vacuna de ADN para su integración (Wang et al. 2004; Schalk et al. 2006). Las vacunas de ADN transfieren los genes del coronavirus a las células humanas. El principio de la vacunación depende de la introducción del ADN en el núcleo celular, de modo que se inicie la transcripción del antígeno y siga una traducción. Las vacunas de ADN suelen utilizar plásmidos como vectores. Según la vía de administración de la vacuna, se abordan tanto los miocitos como los queratinocitos. Sin embargo, las células presentadoras de antígenos cercanas al lugar de la inyección también pueden transfectarse directamente utilizando vacunas de ADN. En tales casos, el proceso de cebado cruzado representa antígenos que utilizan ambas moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC-I/II) (Hobernik y Bros 2018). Los antígenos generados se liberan mediante cuerpos apoptóticos o exosomas que dan como resultado su reconocimiento por parte de las células presentadoras de antígenos, que a su vez provocan respuestas inmunes celulares y humorales. Se utilizan diversas estrategias de administración para producir una fuerte respuesta inmune (Donnelly et al. 2005; Li y Petrovsky 2016; Strizova et al. 2021). En cuanto a la regulación inmune durante la infección por COVID-19, se ha revelado que los pacientes con riesgo de derrame pericárdico con un pronóstico erróneo indican células T CD3+CD8+ elevadas más CD{{ disminuidas. 18}}células HLA-DR y T reguladoras (Treg) (Duerr et al. 2020). Estos resultados demuestran que se produce una infección grave debido a una respuesta inmunitaria desequilibrada que exacerba las condiciones de la enfermedad (Tay et al. 2020). El progreso de la vacuna contra la COVID-19 tuvo como objetivo desarrollar una respuesta inmunitaria eficaz y adecuada (incluidos ambos brazos) sin avanzar hacia dicho desequilibrio (Hobernik y Bros 2018). Si bien los ensayos clínicos en humanos con vacunas de ADN desencadenaron respuestas totales, estas respuestas suelen ser inadecuadas para generar ventajas clínicas aceptables. Además, los componentes básicos del ADN plasmídico, por ejemplo, las secuencias CpG no metiladas, pueden provocar la activación de respuestas inmunes innatas, aumentando las respuestas inmunes adaptativas contra los antígenos expresados. Por tanto, las vacunas de ADN son más aplicables en medicina veterinaria (Coban et al. 2013; Silveira et al. 2017; Hobernik y Bros 2018). Debido a este inconveniente, algunas líneas de investigación se concentran en la optimización y administración de vacunas de ADN, incluida la optimización de codones, el diseño de promotores, los adyuvantes moleculares, la aplicación de EP, la vacunación de refuerzo o los métodos "ómicos" para el diseño avanzado de vacunas (Li et al. 2012; Silveira et al.2020). La Figura 3 ilustra las principales etapas de los mecanismos de las vacunas de ADN en respuestas inmunes efectivas.

Fig. 2 Formulación, administración y mecanismos de provocación inmune de la vacuna de ARNm: una formulación de ARNm con una nanopartícula lipídica (LNP) mantiene y mejora la estabilidad de la secuencia. b Se administra una solución salina de la vacuna mRNA-LNP por vía intramuscular. c El ARNm que contiene LNP se transfecta en las células presentadoras de antígenos (APC) mediante endocitosis. El ARNm se libera en el citoplasma y se traduce en proteínas virales, luego el proteasoma los lisa y se une al complejo mayor de histocompatibilidad I (MHC-I) en la superficie del retículo endoplásmico y se presenta a las células T citotóxicas (Tc).

El potencial de las vacunas basadas en ARNm y ADN

Una estructura de vacuna a nivel de ARNm contiene elementos para remediar la estabilidad y la expresión de proteínas, incluida la UTR 3', la secuencia codificante, la UTR 5', la tapa 5' y la cola poli (A) (Liu 2019). Los elementos UTR 5' y 3' que flanquean la secuencia codificante derivada de genes virales o eucarióticos mejoran la estabilidad estructural y la traducción del ARNm, que son factores esenciales para las vacunas (Ross y Sullivan 1985; Holtkamp et al. 2006). Para una traducción eficiente de proteínas a partir de ARNm, se necesita una estructura de tapa 5' (Martin et al. 1975; Ross y Sullivan 1985). La cola poli (A) del ARNm también tiene un papel regulador en la estabilidad y traducción del ARNm (Holtkamp et al. 2006). Además, el uso de codones tiene un papel vital en la traducción de proteínas. En este sentido, para aumentar la traducción de proteínas a partir de ARNm, los codones raros se reemplazan con codones sinónimos usados ​​que tienen abundante ARNt afín en el citosol (Stepinski et al. 2001). Otro enfoque para la optimización de secuencias es el enriquecimiento del contenido G:C. Varios métodos han desarrollado vacunas de ADN candidatas eficientes y seguras en los últimos años. En una plataforma de vacunas basada en ADN, se aplican vectores plásmidos derivados de bacterias para expresar los antígenos deseados dentro de las células huésped. Los plásmidos bacterianos deben introducirse en las células eucariotas y translocarse al núcleo. Luego, el ADN se transcribe y traduce a partir de genes extraños en el núcleo y el citoplasma de la célula huésped, respectivamente. Por lo tanto, diseñar un plásmido adecuado con alta eficiencia de transfección y expresión de proteínas es esencial para lograr una vacuna de ADN potente (Malone et al. 1989). La secuencia de la región eucariota (en los plásmidos de vacunas de ADN), aguas arriba del gen insertado, está compuesta por un promotor y una señal poli A (poliA) (AAU AAA) ubicada en los extremos 3' de la secuencia antigénica (Shan et al. . 2011). Los promotores son elementos críticos necesarios en los plásmidos de vacunas de ADN para provocar altos niveles de expresión de los antígenos deseados en las células huésped (Becker et al. 2008) y dar como resultado la transcripción del ARNm del gen insertado. El promotor más utilizado en las vacunas de ADN incluye el promotor del citomegalovirus humano (CMV). La señal de la secuencia poliA provoca la estabilidad y transferencia del ARNm y la expresión de genes eucariotas de manera eficiente. Otro elemento crítico es una secuencia Kozak (ACCATGG) que tiene un papel vital en la traducción por parte del ribosoma eucariota. Además, es necesario agregar una o dos secuencias de codones de parada para evitar la traducción incorrecta del gen insertado en la célula huésped (Becker et al. 2008; Williams 2013). Comparación de plataformas de vacunas de ADN y ARNm Aunque las vacunas de ADN y ARNm han estado en desarrollo desde la década de 1990 y recientemente se han desarrollado y autorizado varias vacunas veterinarias de ADN, se ha generado un entusiasmo considerable hacia el ARNm. Ambos necesitan esfuerzos para mejorar su antigenicidad, estabilidad y eficacia manipulando el ADN plasmídico y el ARNm directamente o agregando inmunomoduladores o adyuvantes y formulaciones y sistemas de administración (Liu 2019). La duración de la estabilidad del ARNm es menor que la del ADN plásmido. Se ha descubierto que las vacunas de ADN generan la proteína codificada rápidamente, siendo en cantidades mayores que las vacunas de ARNm debido a la mayor estabilidad intrínseca del ADN plasmídico. Se ha descubierto que el ADN plasmídico persiste en el músculo hasta por 6 meses en un modo no integrado (Ledwith et al. 2000). Aunque se supone que las vacunas de ADN y ARNm son un sistema de expresión de la proteína favorita, ninguna es inmunológicamente inerte. Además, los plásmidos de ADN y el ARNm estimulan la inmunidad innata (Campbell 2017). Es posible que la tecnología de vacunas basadas en ADN y ARNm no sea del todo general. El ARNm es más complicado que el ADN plasmídico debido a los nucleósidos modificados y las formulaciones necesarias para la administración, la estabilidad y la necesidad de controlar la actividad inmunoestimuladora intrínseca del ARNm. Sin embargo, beneficia a la producción que evade la demanda de cada producto celular o animal. La promesa es que los logros clínicos serán factibles una vez que los desafíos de las vacunas de ADN plasmídico y ARNm se resuelvan, particularmente mediante la aplicación de tecnologías avanzadas para prevenir y tratar enfermedades (Liu 2019).

Fig. 3 El proceso de expresión del ADN de la vacuna COVID-19 en las células presentadoras de antígenos (células dendríticas o CD). El ADN plásmido ingresa al núcleo de DC y expresa antígenos in vivo (1). Luego, los antígenos se presentan a las células T (receptores de células T o TCR) a través de moléculas MHC-I y MHC-II. La presentación del antígeno se produce a través de las moléculas DC CD80/86 y las moléculas CD28 de las células CD8+T junto con el MHC-I-TCR y también a través de las DC CD40 y CD4+CD40L de las células T junto con el Interacciones MHC-II-TCR (2a, 3 y 4) La activación y proliferación de las células CD8+T y la liberación de citocinas conduce a respuestas inmunes efectivas como la activación de los macrófagos (2b) Además, la activación de las células T CD8+T (2a, 3 y 4) 4+Las células T después de la unión y los efectos de las citoquinas de las CD se asocian con la activación, proliferación y secreción de anticuerpos de las células B (5)

Progresos en la administración de vacunas de ADN y ARNm

La captación de ADN y ARN extraños por parte de las células eucariotas no es eficiente en comparación con los vectores virales. Se han establecido muchos enfoques de entrega física para aumentar la capacidad de absorción celular (Mellott et al. 2013). Los métodos físicos de transfección de genes incluyen sistemas de entrega que transfieren material genético mediante procedimientos mecánicos, incluidos dispositivos EP y proyectores (Gulce-Iz y Saglam-Metiner 2019). Los dispositivos Biojector utilizan la presión de CO2 para transportar productos terapéuticos a través de la administración IM (intramuscular), ID (intradérmica) y también SC (subcutánea) sin necesidad de aguja (Jorritsma et al. 2016), lo que brinda ventajas considerables sobre la inyección con aguja convencional, incluida la mitigación de efectos adversos, contaminación cruzada de agujas y daños por pinchazos (Zhang et al. 2015). Es relevante que se hayan evaluado dos vacunas de ADN contra el virus del Zika en el ensayo de fase I, lo que demuestra un aumento de las respuestas celulares después de la administración sin aguja en comparación con el uso de agujas (Gaudinski et al. 2018). Además, una plataforma de administración de vacunas de ARNm contra la rabia que utilizaba un proyector reveló respuestas de anticuerpos mejoradas (Alberer et al. 2017). La mayor eficacia de la vacuna mediante la inyección a chorro se puede atribuir a una distribución más amplia de las vacunas, lo que da como resultado una mayor aceptación del uso de APC (Williams et al. 2000; Alberer et al. 2017). Actualmente, las inyecciones ID o IM seguidas de EP suelen utilizarse para la administración de vacunas de ADN en estudios clínicos (Sardesai y Weiner 2011). La EP incluye la formación de poros dentro de las células de la piel para aumentar la absorción celular del material genético mediante pulsos eléctricos (Pushparajah et al. 2021). El método IM EP se aplicó principalmente en 1998 (Aihara 1998) mejorando la penetrabilidad de las células musculares para la administración de vacunas de ADN (Rizzuto et al. 1999; Dupuis et al. 2000; Sokołowska y Błachnio-Zabielska 2019). Numerosos informes han revelado una mejor expresión de antígenos y un aumento de las respuestas inmunes específicas de antígenos in vivo usando EP (Yan et al. 2008; Yan et al. 2009). Se ha informado que una vacuna de ADN contra el VIH, ADVAX, aumentó la inmunogenicidad después de la transferencia a través del EP (Vasan et al. 2011), en comparación con la administración IM (Vasan et al. 2010). Sin embargo, el enfoque EP presenta un riesgo de muerte celular debido a la utilización de altos voltajes (Gulce-Iz y Saglam-Metiner 2019). Aún se están investigando nuevos enfoques de administración, como la EP, para la administración de vacunas de ARN.

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La eficacia de la EP para la administración de vacunas autoamplificadas ha sido similar a la de las vacunas de ADN plasmídico en términos de expresión genética y respuestas inmunes en ratones (Cu et al. 2013). Sin embargo, el PE no ha mejorado la eficacia de administración de las vacunas tradicionales de ARN no replicantes (Johansson et al. 2012), lo que posiblemente reduzca su eficacia en la duplicación de vectores de ARN. En consecuencia, el EP y los bioinyectores son ventajosos para la inyección parenteral de vacunas COVID-19 de ADN/ARN. Estos enfoques contribuyen a una mayor producción y distribución de candidatas a vacunas de ADN y mejoran notablemente los resultados (Pushparajah et al. 2021).

Beneficios y limitaciones de las vacunas basadas en ácidos nucleicos

Como métodos de inmunización novedosos y prometedores, las vacunas basadas en ácidos nucleicos brindan información para desarrollar una vacunación segura y protectora (Choi y Chang 2013), como lo demostraron millones de personas durante la pandemia de COVID-19. Las vacunas a base de ácidos nucleicos tienen ciclos de desarrollo cortos, lo que facilita una distribución rápida durante una pandemia. La utilización de vacunas de ADN recombinante necesita una transferencia eficiente del vector de ADN al núcleo, la transcripción y luego la traducción al antígeno deseado (Leitner et al. 1999). Debido a su cómoda manipulación y producción de bajo costo, el ADN plasmídico desnudo es un vector fascinante para presentar antígenos (Williams 2013). Por lo general, un ADN plasmídico comprende elementos genéticos básicos, incluido el gen que codifica el antígeno, un promotor, potenciadores y secuencias de poliadenilación/terminación de la transcripción (Vogel y Sarver 1995). La plataforma de ADN plasmídico es una construcción biofarmacéutica prometedora que se replica en altos niveles dentro de células procariotas económicas, aunque requiere purificación (Prazeres et al. 1999; Ferreira et al. 2000; Suschak et al. 2017). Las vacunas de ARN están compuestas de moléculas de ARNm que contienen un ARN de antígeno rodeado por extremos 3', cola poli-A y 5' y carecen del requisito de transcripción. (Zhang et al.2019). Varias vacunas de ARN se someten a una autoamplificación, lo que se conoce como nueva tecnología en desarrollo. En consecuencia, la molécula de ARN puede replicarse y traducirse en el huésped después del parto, a pesar de la posibilidad de inestabilidad del ARN desnudo, aumentando así la expresión de péptidos inmunogénicos (Pardi et al. 2018; Zhang et al. 2019; Wadhwa et al. 2020). . El ARNm es degradado por enzimas ribonucleasas ubicuas (Wadhwa et al. 2020; Xu et al. 2020). La adición de una cola poli-A 3' y una tapa 5'-7-metilguanosina es fundamental para aumentar la estabilidad y la traducción del ARNm en el citosol (Gallie 1991; Schlake et al. 2012). Las estrategias para aumentar la absorción y expresión de la vacuna se han evaluado principalmente para las vacunas de ADN más que para las de ARN, ya que el ADN requiere cruzar dos membranas celulares para llegar al núcleo. En cambio, el ARN penetra en el citoplasma a través de una única membrana (Rauch et al. 2018). La estructura del ADN tiene una estabilidad comparativamente mayor. Durante 7 años, se descubrió que el ADN plasmídico permaneció intacto sin diferencias con el ADN recién proporcionado mantenido a -20 grados (Walther et al. 2013; Pushparajah et al. 2021). El pH y la temperatura bajos son fundamentales para mantener la integridad del ADN durante mucho tiempo. Por el contrario, el ARN es extremadamente sensible a la temperatura y debe mantenerse a -70 grados en el medio libre de enzimas para mejorar su vida media (Jones et al. 2007).

Desafíos en el desarrollo de vacunas basadas en ácidos nucleicos

Es bien sabido que las vacunas contra la COVID-19 deben ser lo suficientemente eficaces y protectoras (Graham 2020) y provocar una inmunidad duradera. Sin embargo, la vacunación anual puede ser posible según las experiencias con la vacuna anual contra la gripe (Randolph y Barreiro 2020; van Riel y de Wit 2020). El desarrollo de la vacuna contra la COVID-19 plantea desafíos incluso con nuevas plataformas. A pesar de la alta inmunogenicidad y protección de la vacuna de proteína de pico contra el coronavirus, la aparición de mutaciones genera preocupación y el resurgimiento del virus. Por lo tanto, el pronóstico del momento y el lugar de aparición de la enfermedad junto con la adopción precisa de la secuencia de la proteína objetivo es la etapa de vanguardia del proceso de desarrollo que necesita una implementación adecuada de ensayos clínicos (Lurie et al. 2020). El principal desafío de las vacunas de ADN es provocar respuestas inmunes relativamente más bajas en humanos y animales grandes que en sistemas de animales pequeños (Grunwald y Ulbert 2015; Suschak et al. 2017). Cabe destacar que aún quedan desafíos por abordar en relación con las vacunas contra la COVID-19, como la durabilidad de la protección, la eficacia en subgrupos específicos, la prevención de la transmisión viral y la aceptación pública (Pushparajah et al. 2021). El retraso en la expresión de antígenos en las vacunas de ARNm autoamplificador podría limitar la eficacia de estas vacunas. Sin embargo, esta plataforma ofrece mayores rendimientos y, por tanto, proporciona una protección equivalente en dosis significativamente más bajas (Vogel et al. 2018; Strizova et al. 2021).

Avances recientes en las vacunas de ADN y ARNm contra la COVID-19

En el desarrollo de vacunas contra la COVID{{0}}, numerosos estudios se han centrado en plataformas de vacunas de ARNm (Verbeke et al. 2021) que llevaron a la aprobación de varias vacunas (Vitiello y Ferrara 2{{ 94}}21) como los de las empresas Moderna y Pfizer/BioNtech. La vacuna Moderna incluye la codificación completa del ARNm de la glicoproteína de pico de COVID-19, mientras que Pfizer/BioNtech contiene la secuencia de ARNm de RBD (Brüssow 2020). Los niveles de eficacia de las vacunas Pfizer/BioNTech y Moderna incluyen el 95% y el 94,5%, respectivamente (Rauch et al. 2021; Widge et al. 2021). La temperatura de almacenamiento de la vacuna Moderna está entre -25 grados y -15 grados, mientras que la de la vacuna Pfizer está entre -80 grados y -60 grados (Meo et al. 2021; Rauch et al. 2021). En comparación con la vacuna Moderna, la vacuna Pfizer/BioNTech tiene menores costos y efectos secundarios (Rauch et al. 2021). Investigadores chinos desarrollaron otra vacuna de ARNm contra la COVID-19 y utilizaron ARNm termoestable (al menos una semana a 25 grados) que codifica RBD (Brüssow 2020). En otra encuesta, CureVac se utilizó como plataforma de ARNm de proteína S de longitud completa diseñada para el desarrollo de una vacuna contra la COVID-19 con sustitutos en dos residuos de prolina para mejorar la estabilidad de las proteínas (Rauch et al. 2021). Ruklanthi de Alwis et al. (2021) desarrollaron una vacuna de ARNm autotranscrita y replicante para COVID-19 utilizando proteína S de longitud completa y un replicón (de Alwis et al. 2021) con potencial de aplicación como vacuna de dosis única eficaz y segura. para combatir el COVID- 19 (de Alwis et al. 2021). De manera similar, se empleó un ARN autoamplificador que codifica la proteína S de la COVID-19 encapsulada dentro de una nanopartícula lipídica (LNP) y describió títulos elevados de anticuerpos y respuestas inmunitarias celulares (McKay et al. 2020). Se han desarrollado algunas vacunas candidatas de ADN, como las vacunas basadas en proteínas S, N y M, para el SARS-CoV. Entre ellas, la vacuna de ADN basada en la proteína S ha inducido eficazmente un efecto protector contra la infección por COVID-19, posiblemente debido al papel vital de la proteína S en la unión al receptor (Zhao et al. 2020). INO-4800 es una candidata a vacuna de ADN contra la COVID-19 que codifica la proteína S de la COVID-19 (Sarwar et al. 2020; Smith et al. 2020). Los resultados preclínicos en ratones y cobayas demostraron respuestas inmunitarias humorales y celulares. En los estudios clínicos de fase I, se inyectaron dos dosis de INO-4800 por vía ID, complementadas con EP a través de CELLECTRA®2000 Inovio Pharmaceutical (Diehl et al. 2013; Amante et al. 2015). Se explicó una respuesta inmune completa basada en respuestas celulares y de anticuerpos en 34 de los 36 participantes en su ensayo clínico de fase I. Se observaron diez efectos adversos (EA) informados sin ningún evento adverso grave (AAG) (fase). Se lanzó un ensayo clínico de fase I/II para evaluar la inmunogenicidad, seguridad y tolerabilidad de INO- 4800 (Tebas et al. 2019). El INO-4800 tiene condiciones de almacenamiento similares (Smith et al. 2020), con la esperanza de simplificar la distribución de la vacuna. Además, algunos otros grupos de vacunas de ADN contra la COVID-19 han iniciado ensayos. En junio de 2020, se inició el reclutamiento de un ensayo clínico de fase I y IIa para GX-19. Una vacuna de ADN, AG0301-COVID-19, producida gracias a la colaboración de la Universidad de Osaka (Japón), Takaro Bio y AnGes, inició el reclutamiento para los ensayos clínicos de fase I y II en julio de 2020 para evaluar su inmunogenicidad y seguridad (Speiser y Bachmann 2020). Se realizaron ensayos clínicos de fase I y II para evaluar la inmunogenicidad y seguridad de tres dosis de ZyCoV-D (Kumar et al. 2021). Esta vacuna oral codificó la proteína de pico en el ADN plasmídico, amplificada dinámicamente en la Bifidobacterium longum viva, una bacteria probiótica intestinal bien reconocida. Se lanzó otro ensayo clínico de fase I para evaluar CORVax12, una vacuna de ADN que codifica la proteína Spike. Se investigó la eficacia de CORVax12 electroporado solo o en combinación con otro plásmido que codifica la interleucina 12 (IL-12). Se están desarrollando diversas vacunas de ARNm contra la COVID-19 que han revelado resultados prometedores (Leitner et al. 1999; Croyle et al. 2001). Un enfoque diverso para desarrollar RQ3013-VLP (que codifica proteínas S, E y M) fue eficaz in vivo utilizando un cóctel de ARNm. Esta vacuna de ARNm se integró con nucleósidos modificados y luego se empaquetó en LNP y desveló la capacidad de provocar fuertes respuestas inmunes celulares y humorales en ratones (Le et al. 2020; Lu et al. 2020a). Una vacuna de ADN con dominio de ácido arginil-glicil-aspártico (RGD) diseñada en dos dosis de 60 µg mediante electroporación mejoró los efectos en ratones BALB/cJ (Guo et al. 2021). La inyección IM +jet de una vacuna de ADN en dosis única (0,2 mg) podría inmunizar a los hámsteres sirios (Brocato et al. 2021). Otra vacuna de ADN que utilizó la proteína S sometida en tres dosis protegió a los macacos Rhesus (Yadav et al. 2021). La fusión de RBD con el aminoterminal preS1 del virus de la hepatitis B y la inyección IM durante tres dosis (semanas 0, 2 y 4) en ratones C57BL/6 provocaron respuestas inmunitarias humorales y celulares (Jeong et al. 2021). Además, la inyección IM de ADN plasmídico de proteína S y subunidad S1 (proteína recombinante) en tres dosis en las semanas 0, 2 y 8 en macacos Rhesus estimuló los anticuerpos neutralizantes (Prompetchara et al. 2021). La inyección IM+EP de proteína S en tres dosis (semanas 0, 2 y 4) en ratones ICR estimuló respuestas humorales y celulares (Li et al. 2021). Otras vacunas de ADN en ensayos clínicos han incluido proteína S en fases I/II en junio de 2022 (NCT04445389, vía IM en adultos de 18 a 50 años), julio de 2021 (NCT04463472, vía IM en adultos de 20 a 60 años), Septiembre de 2021 (NCT04527081, vía IM en adultos de 20 a 65 años) y fase I (NCT04336410, vía ID en 18 años y mayores), febrero de 2022 (NCT04334980, oral en adultos de 18 años y mayores) y junio de 2021 ( NCT04591184, vía IM en adultos de 18 a 84 años). Además, las vacunas de ARNm en ensayos clínicos incluyeron aquellas en fase II en noviembre de 2021 (NCT04515147, IM, 18 a 60 años), fase II-III en diciembre de 2022 (NCT04368728, IM en adultos de 18 a 85 años) y fase I. en junio de 2021 (NCT04566276, IM en adultos de 18 a 75 años). COVID-eVax fue una vacuna basada en RBD que provocó suficientes respuestas inmunitarias en ratones, hurones y ratas después de 38 días (Conforti et al. 2022). Se evaluaron dos vacunas de ADN (X-19 y GX-19N) que codifican proteínas de pico y nucleocápside en ensayos de fase I entre adultos de 19 a 49 años y los anticuerpos de unión fueron detectables en la segunda dosis de vacunación. Se confirmó la seguridad y tolerabilidad de estas vacunas, donde la GX-19N indujo niveles más altos de células T y respuestas de anticuerpos (Ahn et al. 2022). Una vacuna de ADN de fusión de picos Xcl1-SARS-CoV-2 provocó una mayor tasa de respuestas mediadas por anticuerpos y células T en comparación con un gen de pico que contenía plásmido individualmente in vitro e in vivo (Qi et al. 2022). Una vacuna baculoviral reciente de ADN delta contra la COVID-19 podría proteger al 100% de los ratones contra la COVID-19 (Jang et al. 2023). Un ADN lineal (linDNA) que codifica el RBD del SARS-CoV-2 (Lin-COVIDeVax) pudo provocar respuestas de anticuerpos y células T y proporcionar seguridad y careció de efectos adversos (Conforti et al. 2023). La Tabla 1 representa los ensayos clínicos y las vacunas basadas en ácidos nucleicos aprobadas contra la COVID-19. Según datos actualizados, 229, 820, 324 personas han recibido vacunas COVID-19 en todo el mundo, entre las cuales, las de países africanos han tenido tasas de vacunación más bajas (https://www.usnews.com/news/coronavirus-and -vaccine-news, https://www.bloomberg.com/graph ics/covid-vaccine-tracker-global-distribution/). En consecuencia, la tasa de vacunación está asociada a las condiciones económicas de diversas regiones/áreas.

Posibles preocupaciones de seguridad para las vacunas COVID-19

Monitorear la seguridad de cada vacuna preventiva o profiláctica desarrollada es uno de los aspectos esenciales. No se requiere el uso de productos químicos tóxicos ni cultivos celulares en los procesos de producción de vacunas de ARNm, por lo que se conoce como plataforma segura. El corto tiempo de fabricación también reduce el riesgo de contaminación por microorganismos (Wang et al. 2020). Los efectos notificados con más frecuencia incluyen dolor de cabeza, fatiga y otros eventos sistémicos graves, como fiebre, escalofríos, mialgia, vómitos, dolor abdominal y, en raras ocasiones, informes de diarrea. Sin embargo, no se ha observado ninguna muerte en los receptores de la vacuna de ARNm (Chapin-Bardales et al. 2021; Skowronski y De Serres 2021). Algunos efectos secundarios sistémicos, como la anafilaxia, suelen notificarse en personas con antecedentes de alergia y se estiman entre 2,5 y 11,1 casos por millón de dosis (Shimabukuro et al. 2021). Una respuesta inmunitaria fuerte en personas más jóvenes que otras puede provocar eventos sistémicos elevados y se informan más efectos secundarios después de la inyección de una segunda dosis de vacuna en comparación con la primera dosis (Male 2021; Skowronski y De Serres 2021). Además, el dolor en el lugar de la inyección, el enrojecimiento y la hinchazón se informan como los efectos secundarios más locales (Anand y Stahel 2021). Según evidencia suficiente de vacunas de ARNm aprobadas, incluidas Pfizer/BioNTech y Moderna, no se ha demostrado ningún riesgo de abortos espontáneos durante el embarazo (tasa=0%) (Hombre 2021). Cabe destacar que las vacunas de ADN son bastante seguras, pero no siempre inmunogénicas; por lo tanto, una respuesta inmune suficiente necesita dosis adicionales. La respuesta inmune humoral no ha sido consistente en ensayos en humanos, mientras que la inmunidad celular parece más común. En consecuencia, la seguridad de las vacunas de ADN entre las poblaciones más jóvenes y mayores es más auspiciosa (Ledgerwood et al. 2011; Houser et al. 2018; Carter et al. 2019). Los problemas de seguridad apuntan a la posible integración del ADN transfectado en la línea germinal y en las células somáticas del huésped. En estos casos, la desregulación de la expresión genética posiblemente se produzca junto con múltiples mutaciones considerables. Sin embargo, en el desarrollo de vacunas de ADN normalmente sólo se utilizan plásmidos extracromosómicos y de integración cromosómica deficiente. Además, la mayoría de los plásmidos permanecen en el sitio de administración (Schalk et al. 2006). Una revisión sistemática y un metanálisis recientes demostraron que las vacunas de ARNm se asocian con mayores eventos adversos en comparación con otras plataformas (Kouhpayeh y Ansari 2022). Recientemente, se observó un caso raro de miositis asociada a la vacuna de ARNm de BNT162b2 en una mujer de 34- años (Magen et al. 2022). La metilación del ADN y las correspondientes alteraciones epigenéticas también alteran la eficacia de las vacunas de ADN y ARNm (Pang et al. 2022). Cabe destacar que varias vacunas de ácido nucleico aprobadas (ZyCoV-D, vacuna con plásmido de ADN utilizada por vía intradérmica, India), BNT162b2 (ARNm, 2 dosis, Alemania), ARNm- 1273 (Moderna, EE. UU., 2 dosis), ARCoV (WALVAX, China) y ensayos clínicos que incluyen 302-COVID19 (vacuna de ADN plasmídico, fase II/III intramuscular, Japón), INO-4800 (ADN plásmido, fase II/III, intradérmico, China), GX{{36 }}N (vacuna de ADN, Genexine, fase II/III), Covigenix VAX-001 (vacuna de ADN, Entos Pharmaceuticals, fase I/II, intramuscular), COVID-eVax (vacuna de ADN, fase I/II, intramuscular , Roma) y bacTRL-Spike (vacuna de ADN, fase I, oral, Symvivo) (Sheridan 2021; Liu y Ye 2022a). Estas vacunas han estimulado la inmunidad tanto humoral como celular, excepto GX-19N y AG0302- COVID-19. Algunos efectos adversos de las vacunas COVID-19 a base de ácido nucleico incluyen dolor, linfadenopatía, eritema, enrojecimiento, hinchazón, náuseas, fatiga, artralgia, mialgia, fiebre, paro cardiorrespiratorio, accidente cerebrovascular, reacción de hipersensibilidad, enfermedad hepática alcohólica, parálisis de Bell. , arritmia ventricular paroxística y muerte (Norquist et al. 2012; McNeil y DeStefano 2018; Baden et al. 2021; Momin et al. 2021; Liu y Ye 2022b, 2022a).

El glucósido de feniletanol es el principal componente activo de Cistanche deserticola

Conclusión

La rápida pandemia de COVID-19 ha creado una necesidad insatisfecha de desarrollar vacunas eficaces para prevenir la enfermedad. Aunque la inmunogenicidad de las vacunas de ADN en animales es aceptable, la validación clínica está garantizada en humanos. Las vacunas de ARN podrían ofrecer características inmunológicas apropiadas y ventajas considerables sobre las vacunas de ADN. Los problemas relacionados con la naturaleza inestable del ARN se han abordado utilizando enfoques y formulaciones de almacenamiento adecuados para detener su degradación. La seguridad de las vacunas también es importante y no puede verse comprometida en aras de una mayor eficiencia. Existen vacunas aprobadas a base de ácido nucleico para controlar la propagación del COVID-19. Se debe continuar el seguimiento de los participantes. Es necesario aprender sobre los efectos secundarios de la vacuna COVID-19 basada en ácido nucleico. Además, la reevaluación de vacunas y el desarrollo de vacunas polivalentes, o estrategias pan-coronavirus, son prometedores teniendo en cuenta el resurgimiento de nuevas variantes preocupantes.

Tabla 1 Ensayos clínicos y vacunas COVID-19 aprobadas y sus características

Referencias

Abdelmageed MI et al (2020) Diseño de una vacuna peptídica basada en multiepítopos contra la proteína E del COVID humano-19: un enfoque inmunoinformático. Int J Biomed Clin Anal. https://doi.org/10.1155/2020/2683286

Abera G, Berhanu G, Tekewe A (2012) Ribozimas: enzimas de ácidos nucleicos con posibles aplicaciones farmacéuticas: una revisión. Farmacóforo 3:164–178

Ahn JY et al (2022) Seguridad e inmunogenicidad de dos vacunas COVID-19 de ADN recombinante que contienen las regiones codificantes de la espiga o espiga y las proteínas de la nucleocápside: un análisis provisional de dos ensayos de fase 1, abiertos y no aleatorizados en adultos sanos. Lancet Microbe 3: e173 – e183. https://doi.org/10.1016/ S2666-5247(21)00358-X

Aihara H (1998) Miyazaki J. transferencia de genes al músculo mediante electroporación in vivo. Nat Biotechnol 16:867–870. https://doi.org/10. 1038/nbt0998-867

Alberer M et al (2017) Seguridad e inmunogenicidad de una vacuna de ARNm contra la rabia en adultos sanos: un ensayo clínico de fase 1 abierto, no aleatorizado, prospectivo y por primera vez en humanos. The Lancet 390:1511-1520.https://doi.org/10.1016/s0140-6736(17)31665-3

Amante DH et al (2015) Patrones de transfección de la piel y cinética de expresión de la administración de plásmidos mejorada por electroporación utilizando CELLECTRA-3P, un dispositivo portátil de electroporación dérmica de próxima generación. Métodos de terapia génica humana 26:134–146. https://doi.org/10.1089/hgtb.2015.020

Anand P, Stahel VP (2021) Revisión de la seguridad de las vacunas de ARNm de Covid-19: una revisión. Paciente Saf Surg 15:20. https://doi.org/10.1186/s13037-021-00291-9

Baden LR et al (2021) Eficacia y seguridad de la vacuna de ARNm-1273 SARS CoV-2. N Engl J Med 384:403–416. https://doi.org/10. 1056/NEJMoa2035389

Becker PD, Noerder M, Guzmán CA (2008) Inmunización genética: bacterias como vehículos de administración de vacunas de ADN. Vacuna Hum 4:189–202.https://doi.org/10.4161/hv.4.3.6314

Borah P et al (2021) Perspectivas sobre las candidatas a vacunas de ARN para COVID-19. Frente Mol Biosci. https://doi.org/10.3389/fmolb. 2021.635245

Brocato RL et al (2021) Eficacia protectora de una vacuna de ADN contra el SARS-CoV-2 en hámsteres sirios de tipo salvaje e inmunodeprimidos. Vacunas NPJ 6:1–7.https://doi.org/10.1038/s41541-020-00279-z

Brüssow H (2020) Esfuerzos hacia una vacuna COVID-19. Environ Microbiol 22:4071–4084. https://doi.org/10.1111/1462-2920. 15225

Buchholz UJ et al (2004) Contribuciones de las proteínas estructurales del coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo a la inmunidad protectora. Proc Natl Acad Sci 101:9804–9809. https://doi.org/10.1073/pnas.0403492101

Campbell JD (2017) Desarrollo del adyuvante CpG 1018: un estudio de caso. Adyuvante de vacuna. https://doi.org/10.1007/ 978-1-4939-6445-1-2

Carter C et al (2019) Seguridad e inmunogenicidad de la vacuna de ADN con hemaglutinina contra la influenza estacional en investigación seguida de una vacuna trivalente inactivada administrada por vía intradérmica o intramuscular en adultos sanos: un ensayo clínico de fase 1, aleatorizado, abierto. Más uno 14:e0222178. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0222178

Chapin-Bardales J, Gee J, Myers T (2021) Reactogenicidad tras la recepción de vacunas COVID-19 basadas en ARNm. JAMA. https://doi. org/10.1001/jama.2021.5374

Chen Y, Cheng L, Lian R, Song Z, Tian J (2021) La investigación sobre la vacuna COVID-19 se centra en la seguridad, la eficacia, la inmunoinformática y la producción y administración de vacunas: un análisis bibliométrico basado en VOSviewer. Tendencias Biosci. https://doi.org/10.5582/bst.2021. 01061

Choi Y, Chang J (2013) Vectores virales para aplicaciones de vacunas. Vacuna Clin Exp Res 2:97.https://doi.org/10.7774/cevr.2013.2.2.97

Chowdhury MA, Hossain N, Kashem MA, Shahid MA, Alam A (2020) Respuesta inmune en COVID-19: una revisión. J Infectar la Salud Pública. https://doi.org/10.1016/j.jiph.2020.07.001

Coban C, Kobiyama K, Jounai N, Tozuka M, Ishii KJ (2013) Vacunas de ADN: ¿una simple cuestión de detección de ADN? Hum Vaccin Immunother 9:2216–2221.https://doi.org/10.4161/hv.25893

Conforti A et al (2022) COVID-eVax, una candidata a vacuna de ADN electroporado que codifica el RBD del SARS-CoV-2, provoca respuestas protectoras en modelos animales. Mol Ther 30:311–326. https://doi. org/10.1016/j.ymthe.2021.09.011

Conforti A, Sanchez E, Salvatori E, Lione L, Compagnone M, Pinto E et al (2023) Una candidata a vacuna de ADN lineal que codifica el dominio de unión al receptor SARS CoV-2 provoca una potente respuesta inmunitaria y anticuerpos neutralizantes en gatos domésticos. Desarrollo de la clínica Mol Ther-Metho 28:238–248. https://doi.org/10.1016/j.omtm.2022. 12.015

Croyle M, Cheng X, Wilson J (2001) Desarrollo de formulaciones que mejoran la estabilidad física de vectores virales para terapia génica. Gene Ther 8:1281–1290.https://doi.org/10.1038/sj.gt.3301527

Cu Y et al (2013) Administración y potencia mejoradas de vacunas de ARNm autoamplificadas mediante electroporación in situ. Vacunas 1:367–383. https://doi.org/10.3390/vaccines1030367