Parte II.:Los glucósidos feniletanos de Cistanche Tubulosa inducen la apoptosis de las células del carcinoma hepatocelular por las vías dependientes de mitocondrias y MAPK y mejoran el efecto antitumoral a través de la combinación con cisplatino
Mar 05, 2022
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Además, evaluamos el efecto inmunoestimulador de la CTPG(Cistanche Tubulosa Feniletanoide Glucósidos) en ratones. Después de la inyección i.p., la inyección s.c. y la administración i.g. de CTPG (200 y 400 mg/kg), no hubo cambios significativos en el estado de los ratones en comparación con el grupo no tratado. El peso corporal de los ratones tampoco tuvo diferencias significativas entre los grupos tratados con CTPG y los grupos no tratados (Figura 7A). Los índices de corazón, hígado, bazo, pulmón, riñón y timo de los ratones fueron similares entre todos los grupos, excepto los índices de bazo de los ratones en el grupo de inyección de 400 mg / kg ctPG i.p. (Tabla 1). Los resultados sugirieron que las dosis seleccionadas de CTPG no tuvieron efectos secundarios en ratones. El bazo es un importante órgano de defensa inmune en los mamíferos, y su desarrollo afecta directamente la función inmune del individuo y la capacidad de resistir enfermedades. El índice de órganos inmunes refleja el desarrollo y la función inmune de los órganos inmunes. El bazo contiene una variedad de células inmunes, incluyendo células T, células B, células asesinas naturales (células NK), macrófagos, células dendríticas (DC) y otras, que desempeñan un papel importante en el sistema inmunológico.30 Se ha informado que los polisacáridos pueden aumentar el número de células inmunes para mejorar el cuerpo.Inmunidad.31 Como la inyección i.p. de CTPG aumentó significativamente el índice del bazo (aumentó 0,55 veces), analizamos más a fondo el número de varias células inmunes en el bazo. Los resultados mostraron que la inyección i.p. de CTPG aumentó significativamente el número de células T (células CD3 + CD19−) (aumentó 0,49 veces), células B (células CD3−CD19+) (aumentó 0,49 veces) y células NK (células CD3−CD19−CD49b+) (aumentó 1,63 veces) en comparación con el grupo no tratado. Las células T CD4+ y CD8+, como los principales subtipos de células T, desempeñan un papel importante en la respuesta inmune celular específica del antígeno.32 Por lo tanto, analizamos más a fondo el número y el estado de activación de las células T CD4+ y CD8+ en el bazo. Los resultados indicaron que la inyección i.p. de CTPG no solo aumentó significativamente el número de células T CD4 + y CD8 + (aumentó 0.55 y 0.34 veces, respectivamente) sino que también mejoró el estado de activación de las células T CD4 + (células CD4 + CD44 +) (aumentó 0.84 veces) (Figura 7B), estos resultados sugieren que CTPG tenía función de mejora inmune.
La combinación de CTPG(Cistanche Tubulosa Feniletanoide Glucósidos)y el cisplatino exhibió un potente efecto antitumoral en el modelo de ratón con tumor H22
En general, se acepta que la quimioterapia o la radioterapia pueden conducir a un mal pronóstico e inducir numerosos eventos adversos, que pueden deberse a la supresión del sistema inmunitario y al daño a los tejidos y órganos normales. Los polisacáridos de la MTC tienen efectos de mejora inmune y alivian el daño de los órganos inmunes y las células inmunes causado por la quimioterapia, por ejemplo, los polisacáridos chitosan33 y Lycium barbarum.34 El resultado anterior mostró que CTPG(Cistanche Tubulosa Feniletanoide Glucósidos)podría mejorar los efectos secundarios del cisplatino en el sistema inmunológico. Por lo tanto, el efecto antitumoral de CTPG combinado con cisplatino se evaluó en el modelo de ratón con tumor H22. Como se muestra en la Figura 8A, CTPG solo, cisplatino solo y la combinación de CTPG y cisplatino (CTPG + cisplatino) suprimieron significativamente el crecimiento del tumor H22 en comparación con el grupo de control. CTPG + cisplatino mostró un efecto inhibitorio más fuerte que el de CTPG y cisplatino solo. En el día 20, los volúmenes tumorales en los grupos de control, cisplatino solo, CTPG solo y CTPG + cisplatino fueron de aproximadamente 1707.8, 722.5, 1033.8 y 367.5 mm3, respectivamente. El mismo día, los tumores fueron recolectados para observación visual (Figura 8B) y comparación de peso (Figura 8C). CTPG + cisplatino mostró mejores efectos terapéuticos en el modelo de ratón tumoral H22 que CTPG o cisplatino solo. El peso tumoral en el grupo ctpg+cisplatino fue menor que en otros grupos. Estos resultados sugieren que la actividad antitumoral de CTPG y cisplatino resulta en efectos sinérgicos.
Los pesos corporales de los ratones se midieron para reflejar el estado de salud de los ratones. El peso corporal disminuyó notablemente después del tratamiento con cisplatino, lo que sugiere toxicidad sistémica severa inducida por cisplatino.35 En comparación, CTPG combinado con cisplatino mejoró significativamente la pérdida de peso corporal inducida por cisplatino, mientras que CTPG(Cistanche Tubulosa Feniletanoide Glucósidos)por sí solo no tuvo un efecto significativo sobre el peso corporal de los ratones (Figura 8D). Los órganos que incluyen el bazo, el corazón, el hígado, el pulmón, el riñón y el timo también se aislaron para calcular los índices de órganos. En comparación con el grupo no tratado, los índices de bazo disminuyeron significativamente y aumentaron con cisplatino y CTPG, respectivamente. CTPG + cisplatino recuperó los índices del bazo en comparación con el cisplatino solo. Otros índices de órganos no mostraron diferencias significativas entre todos los grupos (Tabla 2). CTPG(Cistanche Tubulosa Feniletanoide Glucósidos) Combinado con cisplatino mejoró elInmunidadde ratones tumorales.
Los resultados anteriores mostraron que CTPG(Cistanche Tubulosa Feniletanoide Glucósidos) mejoró la inmunidadde ratones e inhibió la apoptosis de esplenocitos inducida por cisplatino. Se investigó además si el efecto antitumoral de CTPG+cisplatino se correlacionó con una mayor inmunidad. En el proceso de aparición y desarrollo del tumor, el sistema inmunitario del cuerpo desempeña una importante función de vigilancia inmunitaria, y la inmunidad celular mediada por células T desempeña un papel clave. Las células T CD4 + tienen la función de ayudar a la inmunidad celular y la respuesta inmune humoral, y las células T CD8 + son las principales células efectoras de una respuesta inmune, que pueden matar específicamente las células diana y desempeñar un papel importante en la inmunidad tumoral y la inmunidad antiviral.32 Los bazos de los ratones portadores de tumores se recolectaron para detectar el número de células T y células B mediante citometría de flujo. Las frecuencias y el número de células T, incluidas las células T CD4+ y CD8+ en el grupo CTPG+cisplatino fueron significativamente más altas que las del grupo control (aumentaron 0,55 y 0,7 veces, respectivamente) y los grupos cisplatino (aumentaron 0,92 y 1,16 veces, respectivamente) (Figura 9A y B). En comparación con el grupo de control, CTPG solo también aumentó en parte el número de células T CD4 + y CD8 +, aunque no hubo diferencias significativas. Las frecuencias y el número de células B no tuvieron diferencias significativas entre todos los grupos.
Las células supresoras derivadas de mieloides (MDSC) y las células T reguladoras (Tregs) se expanden en los tumores e inhiben las respuestas inmunes antitumorales; suprimen la activación y expansión de las células T CD4+, la función de las células T efectoras, la activación y/o proliferación, y la formación de citoquinas de las células T CD4+ y CD8+, la proliferación de células B y la producción de inmunoglobulinas y el cambio de clase, las funciones citotóxicas de las células T NK y asesinas naturales (NKT), y la función y maduración de las DC36-38 Las frecuencias y el número de MDSC (CD11b+Gr-1+), se analizaron macrófagos (CD11b+Gr-1−) y Tregs (Tregs naturales: CD4+CD25+Foxp3+; Tregs inducidos: CD4+CD25−Foxp3+) en los bazos de ratones tumorales mediante citometría de flujo. En comparación con el grupo de control, las frecuencias y el número de MDSC disminuyeron significativamente después de la inyección con cisplatino solo (disminuyó 1,56 veces) o en combinación con CTPG(Cistanche Tubulosa Feniletanoide Glucósidos)(disminuyó 0,62 veces). El número de macrófagos CD11b+Gr-1− también disminuyó significativamente, aunque no hubo cambios significativos en sus frecuencias (Figura 9C). Además, CTPG(Cistanche Tubulosa Feniletanoide Glucósidos)solo y el tratamiento con CTPG+cisplatino disminuyeron significativamente las frecuencias de Tregs inducidos (disminuidas 0,33 y 0,37 veces, respectivamente) (Figura 9D). Estos resultados sugirieron que el efecto antitumoral de CTPG + cisplatino podría estar correlacionado con la inmunidad mejorada caracterizada por el aumento del número de células T y la disminución del número de MDSC y Tregs.
