Efecto protector del aceite esencial de Thymus Serrulatus sobre la nefrotoxicidad inducida por cadmio en ratas, a través de la supresión del estrés oxidativo y la regulación a la baja de la expresión de ARNm de NF-κB, INOS y Smad2
Mar 17, 2022
Contacto: ali.ma@wecistanche.com
Mohd Nazam Ansari1,*, Najeeb Ur Rehman1,*, Aman Karim2, Imán Faisal3 y Abubaker M. Hamad4,5
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Resumen:
El propósito de la investigación fue examinar el efecto protector del aceite esencial de thymus serru latus Hochst. ex Benth. (aceite TSA) contracadmio(Cd) inducidorenaltoxicidad. El protocolo experimental se diseñó utilizando 30 ratas albinas Wistar adultas sanas asignadas en grupos de archivo que contenían seis animales en cada grupo. El grupo 1 se trató como control normal y los grupos 2, 3, 4 y 5 se trataron concadmiocloruro (CdCl2, 3 mg/kg, IP) durante 7 días. El grupo 3 también recibió tratamiento con silimarina (100 mg/kg, PO) como grupo estándar, mientras que los grupos 4 y 5 recibieron aceite de TSA en dosis de 100 y 200 mg/kg PO, respectivamente. La nefrotoxicidad se midió con varios parámetros comoriñónmarcadores de función, marcadores de estrés oxidativo (glutatión (GSH) y malondialdehído (MDA)) y niveles de expresión de ácido ribonucleico mensajero (ARNm) de factores inflamatorios. Los estudios histológicos también fueron evaluados en el protocolo experimental. Los grupos tratados con theCdCl2-mostraron un aumento significativo en los niveles de sueroriñónmarcadores de función junto con los niveles de MDA en homogeneizado de riñón. Sin embargo,renalSe encontró que el nivel de GSH se redujo significativamente. Se encontró que CdCl2 regulaba significativamente los niveles de factor nuclear de kappaB (NF-κB p65), óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) y madres pequeñas contra decapentapléjico (Smad2) en comparación con el grupo de control normal. Por otro lado, el aceite de TSA mejoró significativamente los niveles elevados de marcadores de función renal sérica, antioxidantes no enzimáticos y peroxidación lipídica. Además, el aceite de TSA disminuyó significativamente el aumento de la expresión de NF-κBp65, iNOS y Smad2 en ratas intoxicadas con Cd. Además, los cambios histológicos en las muestras de tejido del riñón de los grupos tratados con Cd mejoraron significativamente en los grupos tratados con silimarina y aceite de TSA. El presente estudio revela que el aceite de TSA mejora la inducción de Cdrenallesión, y también se propone que el efecto nefroprotector observado podría deberse al potencial antioxidante del aceite de TSA y cicatrizante por su acción antiinflamatoria.
Palabras clave:cadmio; inflamación; NF-κB; lesión renal; Smad 2; Thymus serrulatus
1. Introducción
La exposición química ambiental sigue siendo un importante problema de salud pública a nivel mundial. La exposición al cadmio (Cd), uno de los metales tóxicos más reactivos, ha aumentado en la biosfera tanto de fuentes naturales como antropogénicas [1]. La exposición al Cd también se debe a la contaminación del suelo, el aire, el agua y los alimentos, así como al humo del cigarrillo [2]. Una absorción significativamente mayor junto con una disminución de la tasa de excreción conduce a una mayor carga de Cd en diferentes órganos. El Cd puede dañar múltiples órganos dependiendo de su dosis, vía y duración pero afecta principalmenteriñonesy causa insuficiencia renal [3].
losriñonesson órganos vitales en el cuerpo humano y son responsables de varias funciones esenciales, incluida la eliminación de metabolitos dañinos, desechos nitrogenados y algunas drogas con la orina [4]. Estudios anteriores informaron que la toxicidad de Cd da como resultado una disfunción irreversible derenaltúbulos [5] y provoca una disminución de la eliminación de los productos químicos tóxicos, fármacos o ambos que conducen a la agudariñónfalla. Es más,renalla lesión causada por la exposición crónica al Cd puede provocar insuficiencia renal crónica y, si no se trata, puede causar la muerte [6,7]. La acumulación de Cd en los túbulos contorneados proximales obstruye la reabsorción tubular y produce poliuria y proteinuria. Se han realizado estudios de los efectos anormales comunes del Cd en la función renal, pero todavía falta información detallada sobre los mecanismos moleculares y es necesario explorar esto más a fondo [8].
Los estudios de las últimas décadas revelaron que la probabilidad máxima derenalel daño se debe a la liberación de Cd en la célula que provoca estrés oxidativo [9,10]. Uno de los mecanismos sugeridos es la alteración en el sistema de defensa antioxidante natural, que además causa la sobreproducción de radicales libres de oxígeno (OFR) [11] y da como resultado niveles reducidos de glutatión (GSH) y, a su vez, apoptosis relacionada con el estrés oxidativo [ 12]. De varios mecanismos informados, la disminución del contenido de GSH y el daño celular inducido por OFR son los principales responsables de la peroxidación lipídica [13,14].
La literatura previa también encuentra que la correlación entre el estrés oxidativo y la inflamación mejora variosrenalenfermedades [15]. Por lo tanto, se puede sugerir que la toxicidad renal es causada por Cd a través de complejas vías de señalización intracelular que están dirigidas principalmente por el estrés oxidativo. El factor nuclear-κB (NF-κB) controla varios genes inflamatorios en todo tipo de células [16]. NF-κB es la causa principal de variosriñónenfermedades y puede activarse por exposición al Cd. La enfermedad renal crónica se ha encontrado en modelos humanos y animales mediante la regulación positiva de las proteínas Smad2 [9]. Estudios anteriores indicaron que la regulación a la baja de NF-κB y Smad2 podría ser un mecanismo beneficioso para los fármacos antiinflamatorios [17].
Entre las políticas de tratamiento, se plantea la hipótesis de que la atenuación del estrés oxidativo inducido por Cd utilizando antioxidantes de fuentes naturales o sintéticas se considera como el principal enfoque posible para el tratamiento de la nefrotoxicidad inducida por Cd. Por lo tanto, los investigadores han buscado recientemente mecanismos defensivos contra la toxicidad causada por productos químicos o fármacos y también han considerado compuestos biológicamente activos con impacto antioxidante e inflamatorio [18,19].
En diferentes partes del mundo, diferentes especies del género Thymus se han utilizado tradicionalmente para tratar diversos trastornos como bronquitis, asma, tos ferina, laringitis, amigdalitis y tos [20]. Thymus serrulatus Hochst. Ex Benth (familia Lamiaceae) crece en Etiopía y se ha utilizado tradicionalmente para tratar la gripe [21] y la tos [22]. T. serrulatus es un subarbusto perenne muy ramificado que crece en las zonas afromontana y afroalpina de Etiopía y Eritrea [23].
Se ha informado que T. serrulatus posee actividades antihelmínticas, antibacterianas, fungicidas [23], diuréticas [22], vasodilatadoras [24] y antihiperlipidémicas [25]. Además, se ha informado que el aceite esencial de T. serrulatus (aceite TSA) posee propiedades antisépticas, antifúngicas y vermífugas, entre otras [26]. El aceite esencial de la planta de diferentes localidades etíopes mostró una prometedora actividad hepatoprotectora en ratas [27]. Además, estudios previos han demostrado que las actividades farmacológicas del aceite esencial se correlacionan positivamente con la presencia de ingredientes activos como timol, carvacrol, p-cimeno, -terpineno y ácido rosmarínico [26,27]. Por otro lado, el timol y el carvacrol, que se han encontrado como componentes principales en el aceite esencial, son productos naturales importantes con actividades de eliminación de radicales libres y propiedades antioxidantes [28]. Un estudio anterior informó que una combinación de timol y carvacrol tenía un efecto nefroprotector sinérgico
efecto que podría atribuirse a actividades antioxidantes, antiinflamatorias y antiapoptóticas [29]. Además, el timol y el carvacrol, que se han encontrado como componentes principales en plantas que contienen aceites esenciales, también causaron una disminución en la inmunoglobulina E (IgE), la interleucina-4 (IL-4), la interleucina{ {6}} (IL-5) e interleucina-13 (IL-13), así como la cantidad de células inflamatorias que causan trastornos de las vías respiratorias [30].
Hasta donde sabemos, no se ha informado el efecto de T. serrulatus sobre la nefrotoxicidad. Por lo tanto, en este estudio, planteamos la hipótesis e intentamos investigar el efecto nefroprotector del aceite esencial extraído de T. serrulatus de origen etíope contra la nefrotoxicidad inducida por Cd utilizando ratas albinas Wistar evaluandoriñónmarcadores de función, marcadores inflamatorios, estado antioxidante y cambios histológicos.
2. Resultados
2.1. Rendimiento de aceite esencial (porcentaje)
La hidrodestilación de la parte aérea de T. serrulatus dio 0,09 por ciento (v/w) de aceite esencial de color amarillo pálido con un olor característico.
2.2. Efecto del aceite de TSA en biomarcadores de la función renal
Se encontró que los niveles de urea en sangre, ácido úrico, creatinina y nitrógeno ureico en sangre (BUN) estaban significativamente elevados (p < 0.01)="" en="" ratas="" que="" fueron="" tratadas="" con="" cd="" solo="" (3="" mg/kg,="" ip="" )="" durante="" 7="" días.="" sin="" embargo,="" la="" administración="" de="" aceite="" de="" tsa="" y="" silimarina="" en="" ratas="" intoxicadas="" con="" cd="" mejoró="" sustancialmente="" el="" efecto="" inducido="" por="">riñóndaño especificado por niveles suprimidos de urea en sangre, ácido úrico, creatinina y BUN (Figura 1A-D).
2.3. Efecto del aceite TSA sobre la peroxidación lipídica y el estrés oxidativo
losrenaltejido de ratas mostró niveles significativamente mayores de peroxidación lipídica en términos de MDA y reducción del contenido de GSH después de la administración de Cd. Además, el tratamiento con aceite de TSA en dosis de 100 y 200 mg/kg disminuye los niveles de MDA de forma dependiente de la dosis en ratas intoxicadas con Cd. Además, los niveles de GSH se elevaron significativamente en los grupos tratados con aceite de TSA y silimarina en comparación con el grupo de Cd (Figura 2A, B).
2.4. Efectos del aceite de TSA en la expresión de ARNm de p65, NF-κB, iNOS y Smad2
Los cambios en los eventos de señalización se evaluaron mediante transferencia de Western. El análisis de transferencia Western sugirió que la exposición a Cd significativamente (p < 0.001)="" regulaba="" al="" alza="" la="" expresión="" de="" arnm="" de="" nf-κb="" p65,="" inos="" y="" smad2="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" referencia.="" el="" tratamiento="" con="" aceite="" de="" tsa="" reguló="" significativamente="" a="" la="" baja="" la="" expresión="" del="" arnm="" de="" p65,="" nf-κb,="" inos="" y="" smad2="" de="" una="" manera="" dependiente="" de="" la="" dosis="" en="" relación="" con="" las="" ratas="" expuestas="" solo="" a="" cd="" (figura="">
2.5. Efecto del aceite TSA en la histopatología
El análisis histopatológico de las ratas del grupo de control mostró normalriñónarquitectura histológica con túbulos contorneados, glomérulo y cápsula de Bowman normales con espacio normal, así como el estado normal de las fibras de colágeno y materiales positivos para ácido peryódico de Schiff (PAS), como la membrana basal (Figura 4). Las fotomicrografías del grupo tóxico muestran glomérulos anormales (G), degeneración (D) y necrosis (N) de los túbulos contorneados, y espacio de Bowman degenerado y casi ausente. Los túbulos contorneados anormales indican alteración histológica (T), bloqueo por tejido dañado (B) y necrosis. La fotomicrografía del grupo tóxico teñido con tricoma de Masson (MT) muestra un aumento de materiales colagénicos (C). Además, la fotomicrografía del grupo tóxico teñido con PAS muestra un depósito anormal de materiales PAS positivos (P) que desplazaron el parénquima del riñón; también muestra debilidad o pérdida de la membrana basal intacta (L). El tratamiento con aceite de TSA a dosis bajas restableció los glomérulos normales y los túbulos contorneados normales, aunque todavía hubo un ligero sufrimiento de los efectos tóxicos en forma de bloqueo de los túbulos (B) y un pequeño aumento de material colágeno (C), así como una deposición anormal de Materiales PAS positivos (P). El tratamiento con aceite de TSA a una dosis alta dio imágenes histológicas de aspecto histológico casi normal muy cercano al del tratamiento estándar (aumento de 400x y barra de escala de 20 µm para todas las fotomicrografías).
3. Discusión
En el medio ambiente, los metales pesados suelen estar presentes y son propensos a la absorción, oxidación e interferencia con el destino de las células. En particular, el Cd es un compuesto industrial natural que causa numerosos impactos tóxicos y peligrosos, incluida la nefrotoxicidad, en la salud humana [31,32]. Su depósito en varios órganos provoca estrés oxidativo que debilita la función del sistema antioxidante nativo y, como resultado, conduce al desarrollo de diversas enfermedades patológicas graves.33]. La vía de toxicidad inducida por Cd incluye la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), que posteriormente causa lesión renal [34]. Por lo tanto, se puede suponer que los antioxidantes pueden ser un buen objetivo para el posible enfoque terapéutico hacia la toxicidad relacionada con Cd [35]. En este informe, estudiamos el prometedor efecto de mejora del aceite de TSA sobre el estrés oxidativo inducido por Cd y la lesión renal en ratas.
El daño renal grave inducido por Cd puede estar asociado con niveles séricos elevados de urea, ácido úrico y creatinina debido a la fuga al torrente sanguíneo [36,37]. En el presente estudio, también se informó un aumento significativo de los niveles de urea, ácido úrico y creatinina en suero después de la exposición a Cd durante 7 días, lo que confirmó la lesión renal grave (Figura 1). Los resultados observados corroboran estudios previos [19,38]. La administración de aceite de TSA en ambas dosis (100 y 200 mg/kg, PO) mejora significativamente la disfunción renal inducida por Cd que fue respaldada por la disminución de los niveles séricos de urea, ácido úrico y creatinina. En el presente estudio, se ha observado que la exposición al Cd da como resultadoriñóndaño al aumentar la peroxidación de lípidos y perturbar el sistema antioxidante natural, lo que indica un aumento del estrés oxidativo. Los hallazgos observados sugieren que el aceite de TSA podría prevenir los cambios inducidos por Cd en las variables relacionadas con los antioxidantes en ratas. Estos hallazgos están de acuerdo con los de Kawamoto et al. [39], quienes informaron un aumento de la peroxidación de lípidos después de la exposición al Cd. Estudios anteriores informaron que la exposición crónica al Cd resultó en una disminución de los antioxidantes no enzimáticos (GSH tisular) [40]. Los hallazgos del presente estudio corroboran los de Koyuturk et al. [41], quienes describieron un contenido reducido de GSH renal en ratas intoxicadas con Cd. La disminución del contenido de GSH podría deberse a su consumo en la prevención de la peroxidación lipídica causada por el estrés oxidativo [41] y la desintoxicación de metales pesados [42,43]. Sin embargo, nuestros hallazgos no concuerdan con los de Kamiyama et al. [44], quienes describieron un nivel elevado de GSH renal en ratas tratadas con Cd. La peroxidación de lípidos y el nivel de antioxidantes en ratas tratadas con Cd se modularon significativamente con la administración de aceite de TSA, lo que indica una disminución de ROS, un reequilibrio del sistema de defensa antioxidante, o ambos. Estos hallazgos corroboran los de un estudio anterior que describió el efecto de mejora de la timoquinona contra la lesión renal inducida por sustancias químicas [45].
La apoptosis ocurre en los tejidos y varía desde la necrosis bajo ciertos trastornos funcionales [46]. La apoptosis es una de las principales características de los procesos relacionados con Cd.riñónlesión. Anteriormente, se describió que la toxicidad por Cd causa apoptosis en los túbulos proximales a través de la estimulación de la vía NF-kB, lo que contribuye a la disfunción renal [47,48]. En este estudio también se observó un aumento de la expresión de la proteína NF-kBp65 en ratas tratadas con Cd. Sin embargo, la administración de aceite de TSA en ratas tratadas con Cd restauró sustancialmente la expresión de la proteína NF-kBp65. Los resultados observados están de acuerdo con los resultados anteriores [18, 19]. Por lo tanto, la inhibición de NF-kB en ratas intoxicadas con Cd ha demostrado la capacidad antiinflamatoria del aceite TSA.
La sintasa de óxido nítrico inducible (iNOS) se expresa en gran medida en afecciones inflamatorias e infecciones. Por lo tanto, es un componente vital de la respuesta adaptativa del huésped a los estímulos nocivos. Anteriormente se informó que la lesión renal inducida por Cd está mediada por la síntesis de óxido nítrico mediante la estimulación de iNOS [49]. En este estudio también, se encontró que la exposición a Cd aumentaba la expresión de iNOS (Figura 3B), mientras que el aceite de TSA en ambas dosis podía revertir significativamente la expresión de iNOS en ratas intoxicadas con Cd.
La literatura previa informó que el Cd es uno de los metales pesados más tóxicos y se absorbe principalmente en los túbulos proximales y se acumula principalmente en la corteza renal, lo que conduce a lesiones en los túbulos contorneados proximales [50]. Estos hallazgos corroboran los del presente estudio. Importanteriñónel daño se verificó por la presencia de daño significativo en los glomérulos en ratas tratadas con Cd. Estos hallazgos corroboran los de Damek Poprawa y Sawicka-Kapusta [51], quienes reportaron atrofia de los capilares glomerulares y necrosis de los túbulos proximales. Los hallazgos deriñónmarcadores de función y marcadores de estrés oxidativo, donde el aceite de TSA mejoró los cambios degenerativos inducidos por Cd y mejoróriñóndebido a sus posibles efectos antioxidantes y antiinflamatorios- han sido confirmados por observaciones histopatológicas.
4. Materiales y Métodos
4.1. Sustancias químicas y reactivos
El cloruro de cadmio (CaCl2) se obtuvo de Sigma Chemicals Co. (St. Louis, MO, EE. UU.).RiñónLos kits de diagnóstico de función se obtuvieron de Crescent Diagnostics (Jeddah, KSA). Los anticuerpos (primarios y secundarios) se obtuvieron de Santa Cruz (Dallas, TX, EE. UU.). Los productos químicos utilizados eran de grado analítico y de alta calidad que no requerían purificación adicional.
4.2. Material Vegetal y Extracción
Partes aéreas frescas de T. serrulatus Hochst. ex Benth se recolectó en el área montañosa de Amba Alaje, en el sur de Tigray, Etiopía. El material vegetal fue autenticado por un botánico, el Dr. Getinet Masresha, Departamento de Biología de la Universidad de Gondar, y el espécimen fue depositado en el herbario de la universidad (TH-001/2011).
Las partes aéreas frescas se cortaron en pequeños trozos y se sometieron a hidrodestilación durante 3 h utilizando un aparato Clevenger. Se realizó hidrodestilación 11 veces hasta que se recogió una cantidad suficiente. El aceite esencial obtenido se secó con sulfato de sodio anhidro y se almacenó en un recipiente herméticamente cerrado a 4 ◦C hasta su uso posterior [26]. El rendimiento de aceite esencial calculado se expresó en porcentaje (% v/w), basado en el peso del material vegetal fresco.
4.3. animales
Treinta ratas albinas macho que pesaban entre 180 y 220 g se obtuvieron de Animal House, Facultad de Farmacia, Universidad Prince Sattam Bin Abdulaziz (PSAU), KSA. Las ratas se aclimataron durante 1 semana y se mantuvieron en ciclos de luz/oscuridad de 12 h con instalaciones de laboratorio estándar. Durante el período experimental y de aclimatación, los animales fueron alimentados con una dieta de gránulos y libre acceso al agua. Se siguieron las instrucciones y pautas proporcionadas por la unidad de cuidado de animales, PSAU, KSA, al realizar todos los experimentos. El protocolo fue aprobado previamente por el Comité de Investigación Bioética (BERC), PSAU (BERC-004-12-19).
4.4. Diseño experimental
Para la evaluación del efecto nefroprotector del aceite TSA frente a la toxicidad inducida por Cd, las ratas se distribuyeron aleatoriamente en cinco grupos (n=6). El grupo 1 (control normal) recibió solución salina fisiológica (0,9 por ciento NaCl) diariamente durante 7 días. El grupo 2 (control tóxico) recibió cloruro de cadmio (3 mg/Kg, IP, 7 días). Al grupo 3 (control positivo) se le administró conjuntamente CdCl2 y silimarina (100 mg/kg, PO) durante 7 días consecutivos. A los grupos 4 y 5 se les coadministró CdCl2 y aceite TSA a dosis de 100 y 200 mg/Kg (PO, 7 días), respectivamente. La dosis de CdCl2 se seleccionó en base a la literatura publicada previamente [19,52].
Después de 24 h de tratamiento, todas las ratas macho fueron anestesiadas con una pequeña cantidad de éter dietílico para recolectar las muestras de sangre del plexo retroorbitario seguido de centrifugación, y se realizó la separación del suero y se almacenó a -20 ◦C hasta su uso posterior. para la determinacion deriñónmarcadores de función (como ácido úrico, creatinina y urea). Después de una recogida de suero satisfactoria, se aislaron ambos riñones de todas las ratas. La izquierdariñónse almacenó inmediatamente a -80 ◦C hasta el posterior análisis del marcador de estrés oxidativo (MDA y GSH) y análisis de Western blot. Mientras tanto, el riñón derecho fue almacenado para estudios histopatológicos.
4.5. Determinación del Biomarcador de Función Renal
sBiomarcadores deriñónfunción, es decir, ácido úrico, urea y creatinina, se evaluaron utilizando kits comerciales específicos según los métodos mencionados en los protocolos de los fabricantes.
4.6. Determinación de Marcadores de Estrés Oxidativo en Riñón
Los tejidos se homogeneizaron y trituraron (10 por ciento p/v) en tampón de fosfato 0,1 M enfriado con hielo a pH 7,4, y la solución se centrifugó durante 30 min a 12,000x g y 4 ◦ C. El homogeneizado obtenido se utilizó para la estimación de los niveles de GSH y MDA.
El marcador de peroxidación lipídica MDA se estimó utilizando un método descrito previamente [53]. Brevemente, se incubaron 00,25 ml de homogeneizado a una temperatura de 37 grados durante 1 hora en un agitador metabólico. Después de la incubación, se agregaron 0,5 mL de 0,67 por ciento de ácido tiobarbitúrico (TBA) y 0,5 mL de ácido tricloroacético (TCA) enfriado al 5 por ciento (p/v). , seguido de centrifugación (1000 × g, 15 min). Posteriormente, el sobrenadante se mantuvo en un baño de agua hirviendo durante 10 min. La absorbancia desarrollada se midió a 535 nm, es decir, se observó un color rosa.
Para GSH, Jollow et al. [54] se siguió el método. Brevemente, después de la precipitación de 1 mL de PMS con 1 mL de ácido sulfosalicílico (4 por ciento), las muestras de prueba se incubaron (4 ◦C, 1 h), seguido de centrifugación (1200× g , 15 min, 4 ◦C). La mezcla de ensayo contenía sobrenadante (00,1 ml), tampón de fosfato (00,1 M, pH 7,4) (1,7 ml) y ácido ditiol-bis-2-nitrobenzoico (DTNB) (0,4 por ciento en tampón de fosfato, 0,1 M, pH 7,4) (0,2 mL) en un volumen total de 2,0 mL. La absorbancia de las muestras se analizó a 412 nm dentro de los 5 minutos posteriores a la adición de DTNB a las mezclas de reacción.
4.7. Técnica de transferencia occidental
El análisis de transferencia Western y la extracción de proteínas se realizaron como se mencionó en el estudio anterior [55].Riñónlos tejidos se trituraron y el homogeneizado se preparó en una mezcla de inhibidores de proteasa y tampón de lisis de proteínas frío [55]. Para aislar las proteínas totales, los lisados tisulares se conservaron en hielo durante 60 min, con vortex alternativo (después de 10 min), continuando con la centrifugación a 12,000× g (4 ◦C, 10 min). El método de Lowry et al. [56] para determinar la proteína total. Para el análisis de transferencia Western, se aisló brevemente la proteína (25–50 µg) de cada grupo y se cambió a membranas de nitrocelulosa obtenidas de Bio-Rad USA. Inmediatamente se realizó el bloqueo de las transferencias de proteína a 4 ◦C (durante 24 h); después de eso, se realizó la incubación con anticuerpos primarios contra NF-κB p65, iNOS y Smad2 y anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa a temperatura ambiente. Las proteínas se analizaron con la ayuda de un kit de detección de quimioluminiscencia (GE Health Care, Mississauga, Canadá). La intensidad de la banda de proteína se normalizó a bandas de beta-actina utilizando ImageJ (NIH, Bethesda, EE. UU.). Las imágenes se capturaron con un escáner de transferencia Western quimioluminiscente aC-Digit obtenido de LI-COR, EE. UU.
4.8. Análisis Histopatológico
Derechariñónlos tejidos de muestra fijados en formalina neutra al 10 por ciento se manejaron en una máquina de procesamiento de tejidos (ASP300s, Leica Biosystems, IL, EE. UU.); cada muestra se incrustó en cera de parafina y se cortó en secciones de 4–5-µm de espesor. Se eligieron tres secciones de cada grupo y se tiñeron con tinción de hematoxilina y eosina (H&E), tinción de ácido peryódico de Schiff (PAS) y tinción de tricrómico de Masson (MT) [57]. Todas las secciones de tejido se analizaron utilizando un microscopio (Olympus BX 52) para la descripción histopatológica que fue registrada por un histopatólogo, ciego a los grupos experimentales. Para la toma de fotografías se utilizó una cámara Olympus DP21 fijada sobre el microscopio.
4.9. Análisis estadístico
Los valores se expresaron como media ± SEM. Se usó el análisis ANOVA de una vía utilizando la prueba de Tukey post hoc para medir la importancia de los datos bioquímicos de los diferentes grupos. Las diferencias se midieron significativamente en valores de p < 0.05="" en="" relación="" con="" el="" control="" normal="" o="" el="" grupo="" de="" control="" tóxico.="" la="" investigación="" estadística="" se="" logró="" utilizando="" graphpadprism="" v.="" 4.0="" (ee.="">
5. Conclusiones
Este estudio concluye que el aceite esencial de T. serrulatus mejoró la insuficiencia renal inducida por Cd, que posiblemente estuvo mediada por la mejora en los parámetros bioquímicos y de estrés oxidativo alterados, además de la mejora en las estructuras histológicas. Además, T. serrulatus podría ser un agente apropiado a desarrollar en el futuro para la protección renal yriñón-trastornos relacionados.
Fondos:Esta investigación no recibió financiación externa.
Declaración de disponibilidad de datos:El intercambio de datos no es aplicable.
Conflictos de interés:Los autores declaran no tener conflictos de intereses. Los financiadores no tuvieron ningún papel en el diseño del estudio; en la recopilación, análisis o interpretación de datos; en la redacción del manuscrito; o en la decisión de publicar los resultados.
Disponibilidad de muestras:Las muestras del aceite esencial TSA están disponibles a través de los autores.
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