Propiedades relacionadas con la piel y componentes del extracto de partes aéreas de Persicaria Senticosa

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Yun-Hyeok Choi, 1 Jae Yeon Lee, 2 Ji Eun Lee, 1 Yeon Woo Jung, 1 Wonsik Jeong, 1 Seong Su Hong, 1 Young-Rak Cho, 2 y Chun Whan Choi 1

1. Introducción

Persicaria senticosaes una planta anual de la familia Polygonaceae, que se distribuye por toda Corea. Desde tempranas A veces, esta planta se ha utilizado como medicina popular con efectos beneficiosos para el tratamiento de diversas enfermedades como eliminar las partes hinchadas de la herida o los carbúnculos y celulitis y sangre circulante, y eliminación del estancamiento sanguíneo. Estudios recientes han demostrado quePersicaria senticosatuvieron efectos antiinflamatorios [1]; sin embargo, esta planta tiene no se ha informado como ingrediente cosmético bioactivo. Y estudios fitoquímicos previos sobre las flores, el tallo y las raíces del género Polygonum han revelado diversos flavonoides y compuestos fenólicos como el ácido hidroxibenzoico, rutina, quercetina-3-O-glucurónido, quercetina-3-O-glucósido, y luteolin-7-O-rutinoside fueron considerados los principales componentes activos [2, 3]. Estos compuestos activos exhiben diversos efectos farmacológicos, como antiinflamatorios, efectos antiulcerosos, antihipertensivos y anticancerígenos [4]. Durante la detección de ingredientes cosméticos mediante la medición del efecto de eliminación de radicales sobre el 1,1-difenil-2-picrilhidracilo (DPPH), eliminación de radicales ABTS, inhibición de la elastasa,tirosinasainhibición, y ensayo de óxido nítrico, varios Polygonum se encontró que los extractos muestran una actividad potente.

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2. Materiales y métodos

2.1. Materiales vegetales y procedimientos generales de la naturaleza Productos.

Persicaria senticosafue recogido de Seo-myeon, Chuncheon-si, Gangwon-do, Corea, en 2016 (GPS: N 37° 55′ 30.1", E 127° 37′ 57.0", altitud: 434 m). Especímenes de cupones (G071) fueron autenticados por el Dr. Chun Whan Choi.Persicaria senticosafueron depositados en el herbario de Biocenter, Gyeonggido Business & Science Accelerator, Suwon, Sur Corea (Fig. S3). El extracto de metanol al 99,9% de treinta y cuatro Polygonum se obtuvo del Banco de Extractos vegetales de Corea en el Instituto de Investigación de Biociencia y Biotecnología de Corea (Daejeon, Corea). 1 Los experimentos de RMN H y 13C fueron realizado en un espectrómetro Bruker Ascend 700 MHz con tetrametilsilano (TMS). LC-ESI-MS se obtuvo en un instrumento Triple TOF 5600+ (AB SCIX, USA) y HRESI-MS en un instrumento LTQ Orbitrap XL (Thermo, USA). Se realizó cromatografía de capa delgada (TLC) con gel de sílice 60 F254 (Merck, Alemania) y gel de sílice 60 RP-18 F254S (Merck, Alemania) placas. La cromatografía en columna (CC) se realizó utilizando gel de sílice 60 (malla 70 ~ 230, Merck, Alemania), ODS-A (12 nm S-7 μm, YMC GEL, Japón), y preparativo HpLC se realizó en LC-8A (Shimadzu, Japón).

2.2. NO Ensayo.

Las células RAW 264.7 se sembraron en placas de 96 pocillos (5 × 104 células/pozo) y fueron tratados con una muestra durante 1 h antes de la estimulación con LPS (1 μg/ml) durante 24 h. El control negativo fue tratado con medios sin suero. La cantidad de nitrito, a metabolito estable de NO, se midió mediante el uso de Griess reactivo (1% de sulfanilamida y 0,1% de diclorhidrato de naftilendiamina en ácido fosfórico al 2,5%). Absorbancia posteriormente se midió a 540 nm utilizando un ELISA lector. La cantidad de nitrato se determinó a partir de un curva estándar para nitrito de sodio [5–7].

2.3. Ensayo de citotoxicidad celular.

Las celdas RAW 264.7 fueron chapadas en un densidad de 5 × 104 células/pozo en placas de 96 pocillos. Las células fueron tratado con muestras durante 1 h antes de la estimulación de LPS (1μg/mL) durante 24 h. MTT (5 mg/mL en PBS) se agregó a cada pocillo e incubado durante 2 horas. El medio fue retirado del pozos por aspiración, DMSO se agregó a cada pozo, y el el plato fue sacudido. Se midió la absorbancia de cada pozo a una longitud de onda de 540 nm utilizando un lector ELISA. Los datos son presentada como la media ± desviación estándar de tres réplicas.

2.4. Ensayo de actividad de eliminación de radicales DPPH.

Radical DPPH La actividad de barrido se midió mediante el método descrito por Blois [8] y Ozgen et al. [9]. Solución DPPH disuelto en metanol se añadió a la muestra, que fue diluido a la concentración requerida, y la reacción fue realizado a temperatura ambiente durante 30 min. Absorbancia se midió a 517 nm utilizando un lector ELISA. El antioxidante hidroxianisol butilado (BHA) se utilizó como positivo control, y se determinó el valor IC50 de la muestra.

2.5. Actividad de eliminación de radicales ABTS.

La actividad de eliminación de radicales ABTS se midió mediante el uso de un método [10, 11]. ABTS+ se formó mezclando 7 mM ABTS solución y persulfato de potasio de 2,45 mM (K2S2O8) solución con ABTS: K2S2O8 (relación 2: 1) durante 12–16 h para formar un catión (ABTS+ ). La absorbancia se midió a 734 nm utilizando un lector ELISA. BHA, un antioxidante, se utilizó como el control positivo.

2.6. Ensayo de inhibición de la tirosinasa.

Tirosinasala actividad inhibitoria se midió utilizando el método descrito por Yagi et al. [12]. La reacción se llevó a cabo en 0,1M de potasio tampón de fosfato (pH 6.5) que contiene 1,5 mM de L-tirosina y 1250 unidades/ml de seta tirosinasa. La mezcla de reacción se incubó a 37° C durante 20min. Las muestras de prueba fueron ensayado para la inhibición de la tirosinasa midiendo su efecto sobretirosinasaactividad utilizando SpectraMax 190PC microplate ELISA lector a 490 nm. Se utilizaron arbutina y ácido kójico como control positivo, y se determinó el valor IC50 de la muestra.

2.7. Ensayo de inhibición de la elastasa.

La reacción se llevó a cabo en Tampón Tris de 0,5 mM (pH 8,5) que contiene 1 mg/ml de N-succinil- (Ala)3-p-nitroanilida y 0,6 unidades/ml de elastasa. La reacción la mezcla se incubó a 25° C durante 10 min. Las muestras de prueba se ensayaron para la inhibición de la elastasa midiendo su efecto en la actividad de elastasa utilizando un lector ELISA a 405 nm. Ursólico se utilizó ácido como control positivo, y el valor IC50 del se determinó la muestra [13].

2.8. Análisis estadístico.

El análisis estadístico de los datos fue realizado por el software PRIZM5 (GraphPad, CA, EE. UU.), y los datos se presentan como media ± SD. Prueba t de Student de cola única se utilizó para analizar la significación de la diferencia entre grupos, y P< 0:05="" was="" considered="" statistically="">

3. Resultados y discusión

3.1. Propiedades relacionadas con la piel de los extractos de plantas en la familia Polygonaceae.

Efecto de eliminación de radicales sobre DPPH, eliminación de radicales ABTS, inhibición de elastasa,tirosinasainhibición, y se encontró un ensayo de óxido nítrico en varios extractos de Polygonum para mostrar una actividad potente. Los resultados mostraron que la Persicaria japonica y Rumex longifolius tienen el ensayo no (IC50 45.3 y por debajo de 25,0 μg/ml). Para DPPH, el IC50 de metanol el extracto de Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum y Persicaria Chinensis fue de 36,9, 15,4 y 19,2 μg/ml, respectivamente. En la actividad de eliminación de radicales ABTS, el IC50 de metanol extracto de Polygonum cuspidate y Polygonum alpinum fue 5,2 y 5,3 μg/ml, respectivamente. Entirosinasaactividad inhibitoria, el IC50 del extracto metanólico de Polygonum sachalinens raíz y Polygonum cuspidata fue de 289,0 y 483,9 μg/mL, respectivamente. En el ensayo de inhibición de la elastasa, el IC50 de extracto metanólico de Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hydropiper, Persicaria sieboldi, Polygonum orientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumex acetosella, Rumex Crispus, Polygonum alpinum, Persicaria longiseta, Persicaria Chinensis, Persicaria japonica, Persicaria vísceras, Persicaria conspicua, Rheum palmatum, y Persicaria lapathifolia estaba por debajo de 100 μg/ml (Tabla 1).

3.2. Propiedades relacionadas con la piel de las fracciones de Persicaria senticosa.

Efecto de eliminación de radicales sobre 1,1-difenil-2-picrilhidracilo (DPPH), eliminación de radicales ABTS, inhibición de elastasa, y ensayo de óxido nítrico en variosPersicaria senticosaFracciones se encontró que muestran una actividad potente. Los resultados mostraron que las fracciones CH2Cl2 y EtOAc tienen el ensayo NO (bajo 25 y 44,64 μg/mL, respectivamente). Las actividades de eliminación de radicales DPPH y ABTS de las fracciones de EtOAc fueron de 13,7 y 5,0 μg/ml. En el ensayo de inhibición de la elastasa, el IC50 de las fracciones de n-hexano y CH2Cl2 fue inferior a 100 μg/ml (Tabla 2).

3.3. Aislamiento y determinación de compuestos a partir de Extracto de Persicaria senticosa.

Persicaria senticosapiezas aéreas (1,4 kg), secos a la sombra y en polvo, se añadieron a 40 L de etanol al 70% (grado HPLC) y dos veces a temperatura ambiente (cada vez durante 2 días) y se concentraron en vacío a 40° C para producir 180,4 g de extractos. Los extractos fueron suspendidos en agua destilada y luego dividida con n-hexano (4:0L× 3), CH2Cl2 (4:0L×3), EtOAc (4:0L×3) y n-butanol (4:0L×3 ) para dar n-hexano (11,7 g), CH2Cl2 (7,4 g), EtOAc (21,7 g), butanol (22,5 g) y fracciones solubles en agua (110,1 g), (Esquema 1). La fracción de EtOAc (21,7 g) fue separada por MPLC que utilizaba mezclas degradadas como eluyentes (F001-003). Los compuestos 1 (3,2 mg) y 5 (3,9 mg) se aislaron de F002 que fueron utilizados por prep-HPLC. La fracción F001 fue separada por MPLC que utiliza mezclas de gradiente como eluyentes (F011-F018). El compuesto 6 (1,5 mg) se aisló de F016 que se utilizó por HPLC preparativo. El compuesto 7 (2,7 mg) se aisló de F017 que fue utilizado por HPLC preparativo. F012 se separó mediante el uso de MPLC que utiliza mezclas de gradiente como eluyentes (F121-F124). El compuesto 4 (10,8 mg) se aisló de F124 que fue utilizado por hpLC preparativo. Además, F014 se separó por HPLC preparativo utilizando mezclas degradadas como eluyentes (F141- F143). El compuesto 3 (2,3 mg) se aisló de F141 utilizando HPLC preparativo. El compuesto 2 (4,8 mg) se aisló de F142 utilizando HPLC semipreparativo. La purificación de la capa soluble de EtOAc se realizó mediante separación por cromatografía en columna y análisis MPLC a compuestos 1-7. Fue identificado como loliolido (1) [14], quercetina-3-O-glucósido (2) [15], quercetina-3-O-glucurónido (3) [16], ácido 4-metoxi caftrárico (4) [17], kaempferol-3-(6-metilglucuronida) (5) [18], quercetina-3-(6- metilglucururo) (6) [19, 20], y quercetina (7) [21]. La estructura fue dilucidada mediante una combinación de RMN 1D y 2D y Espectrometría de EM, así como una comparación con la literatura informada (Figura 1).

3.4. Propiedades relacionadas con la piel de los compuestos de Persicaria senticosa.

Efecto de eliminación de radicales sobre DPPH,tirosinasainhibición y ensayo de óxido nítrico en varios compuestos dePersicaria senticosase encontró que muestra una actividad potente (Fig. S4–7). Los resultados mostraron que el Compuesto 7 tiene el NO ensayo (IC50 29,7 μg/mL). Para DPPH, el IC50 de compuestos 2, 3, 5 y 7 fueron 39,6, 31,2, 37,0 y 22,7 μg/ml, respectivamente. En la actividad inhibidora de la tirosinasa, el IC50 de El compuesto 7 fue de 14,3 μg/ml (Tabla 3).

4. Conclusiones

Persicaria senticosaes una planta anual de la familia Polygonaceae que se distribuye en toda Corea. Desde los primeros tiempos, esta planta se ha utilizado como medicina popular con beneficios efectos para el tratamiento de diversas enfermedades. Este estudio evaluó las propiedades relacionadas con la piel y los componentes de la antena. extracto parcial de Persicaria senticosa y treinta y cuatro plantas de Polygonaseae. En el curso de la detección de ingredientes cosméticos mediante la medición del efecto de eliminación de radicales sobre DPPH, La eliminación de radicales ABTS, la antirrusa se evaluó utilizando La inhibición de la elastasa, el blanqueamiento se estudió portirosinasainhibición y antiinflamatorio se probó con óxido nítrico Ensayo. Se encontró que varios extractos de Polygonum muestran potentes actividad. Los resultados mostraron que la Persicaria senticosa El extracto metanólico tiene las actividades de eliminación de radicales DPPH y ABTS (IC50 61.0 y 17.5 μg/mL). En el ensayo de inhibición de la elastasa y el ensayo de óxido nítrico, el IC50 de metanol el extracto de Persicaria senticosa fue de 241,5 μg/ml y 71,8 μg/ml, respectivamente. La Persicaria senticosa 70% el extracto etanólico se dividió con n-hexano, CH2Cl2, EtOAc, n-BuOH y fracciones acuosas.

La fracción soluble de EtOAc mostró una potente relación con la piel actividad (Figura 2 y Tabla 3). Estos resultados sugirieron que los componentes activos enPersicaria senticosaresponsable de la la actividad relacionada con la piel se concentró en el EtOAc soluble fracción de Persicaria senticosa (Esquema 1). Por otro lado mano, la fracción soluble de n-hexano, diclorometano, y la fracción soluble de BuOH derivada del extracto de Persicaria senticosa mostró actividad equipotente sobre el óxido nítrico ensayo, DPPH y actividad de eliminación de radicales ABTS, mientras que la fracción de agua restante demostró una mala inhibición efectos (Tabla 2).

Por lo tanto, la purificación guiada por bioensayo de tres fracciones activas, es decir, la fracción soluble etOAc dePersicaria senticosase llevó a cabo para purificar los principios activos responsables para la actividad relacionada con la piel seguida del proceso descrito en el esquema 1, respectivamente.

La purificación de la capa soluble de EtOAc a partir dePersicaria senticosaEl extracto etanólico al 70% se realizó mediante cromatografía en columna de separación y análisis MPLC para Compuestos 1-7. Se identificó como loliolido (1), quercetina3-O-glucósido (2), quercetina-3-O-glucurónido (3), 4- ácido metoxi caftrárrico (4), kaempferol-3-(6-metilglucuronida) (5), quercetina-3-(6-metilglucuronida) (6) y quercetina (7). La estructura fue dilucidada por una combinación de 1D y espectrometría 2D de RMN y EM, así como comparación con las literaturas reportadas (Fig. S2). Efecto de eliminación de radicales en 1,1-difenil-2-picrilhidracilo (DPPH),tirosinasase encontró que la inhibición y el ensayo de óxido nítrico en varios compuestos de Persicaria senticosa muestran una actividad potente. El los resultados mostraron que el compuesto 7 tiene el ensayo no (IC50 29,7 μM). Para DPPH, el IC50 de los compuestos 2, 3, 5 y 7 fue de 39,4, 32,1, 37,0 y 22,7 μM, respectivamente. Entirosinasaactividad inhibitoria, el IC50 del Compuesto 7 fue de 14,3 μM. Como se muestra en la Figura 3, los compuestos 2 y 5 son los principales compuestos en la fracción soluble etOAc de Persicaria senticosa(- Higo. S1). Y los compuestos 2 y 5 mostraron excelente actividad antioxidante (Figura 4), que es consistente con estudios previos [18, 22].

Este estudio demostró quePersicaria senticosay las poligonasas contienen compuestos químicos con actividades relacionadas con la piel y podría ser interesante como novela fuente de agentes bioactivos para las industrias cosméticas.