SLC37A2, una molécula relacionada con el fósforo aumenta en las células del músculo liso en la aorta calcificada Ⅱ

Resultados

Búsqueda de moléculas candidatas encalcificado inducido con fosfatoAoSMC. Para buscar moléculas cuya expresión aumenta en AoSMC calcificado, se realizó un análisis de micromatrices de ADN de aproximadamente 26,000 genes usando ARNm de AoSMC calcificado y no calcificado. La Figura 1 muestra el HeatMap de diferentes genes expresados ​​entre los AoSMC no cultivados con 2,6 mM y los cultivados con 2,6 mM P durante 12 días. Un total de 3066 genes aumentaron más del doble en AoSMC cultivados frente a no cultivados. Los genes con mayor expresión fueron moléculas relacionadas con la formación de osteoblastos, como osteopontina, factor específico de osteoblastos de periostina (POSTN), Wnt3, interleucina-6 (IL-6), yfactor de crecimiento de fibroblastos23 (FGF23), así como varias moléculas de la superfamilia SLC (Tabla 1). Entre estas moléculas, nos centramos en SLC37A2, cuyo ARNm aumentó aproximadamente 3,1 veces en AoSMC cultivadas con 2,6 mM P durante 12 días en comparación con AoSMC no cultivadas con 2,6 mM P. Se ha informado que SLC37A2 está relacionado con la regulación de P, pero se desconoce su función detallada. de inflamación en la expresión de SLC37A2.calcificación vascularSe ha informado que es promovido por la inflamación, por lo que examinamos si el ARNm de SLC37A2 se ve afectado por la respuesta inflamatoria. A las 24 h después del tratamiento con LPS, la IL-6 aumentó significativamente en comparación con las AoSMC no tratadas con LPS (Fig. 2A). Estos resultados también se observaron 72 h después del tratamiento con LPS. No hubo diferencias significativas entre los grupos en la expresión del ARNm de SLC37A2 (Fig.2B).

HAGA CLIC AQUÍ PARA OBTENER EXTRACTO DE CISTANCHE ORGÁNICO NATURAL CON 25% DE EQUINACOSIDO Y 9% DE ACTEÓSIDO PARA LA FUNCIÓN RENAL

Servicio de apoyo de Wecistanche: el mayor exportador de cistanche de China:

Correo electrónico:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Compre para obtener más detalles de especificaciones:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Expresión de SLC37A2 en AoSMC calcificado inducido por fosfato. Para determinar si SLC37A2 está involucrado en la calcificación, examinamos la expresión del ARNm de SLC37A2 en AoSMC calcificado y no calcificado (Fig.3). Se observó calcificación en AoSMC cultivado con 2,6 mM P durante 6 días, y se observó una calcificación más avanzada en AoSMC cultivado con 2,6 mM P durante 12 días (Fig. 3A). El ARNm de Runx2 aumentó significativamente en AoSMC calcificado en comparación con AoSMC no calcificado (Fig. 3B). El ARNm de SLC37A2 comenzó a aumentar significativamente el día 3 en AoSMC calcificado, y el día 9, AoSMC calcificado aumentó significativamente aproximadamente dos veces en comparación con AoSMC no calcificado (Fig. .3C). La expresión de la proteína SLC37A2 aumentó significativamente aproximadamente dos veces el día 6 en AoSMC calcificadas en comparación con AoSMC no calcificadas (Fig. 3D).

Expresión de SLC37A2 en ratas modelo CKD.

Para revelar si SLC37A2 está involucrado en la calcificación vascular in vivo, examinamos la expresión del ARNm de SLC37A2 en vasos de ratas con ERC inducida por adenina. Se crearon ratas con ERC inducida por adenina de acuerdo con el protocolo que se muestra en la Fig. 4A. La Tabla 2 muestra el peso corporal y los datos bioquímicos el día del sacrificio. El peso corporal deERC inducida por adeninaen ratas fue significativamente menor en comparación con las ratas sin ERC. En comparación con el grupo sin ERC, los grupos con ERC tuvieron niveles plasmáticos más altos de P y Cr, niveles más bajos de Ca en plasma y excreción urinaria de 24- horas de P, Ca y Cr. Además, estos resultados fueron más prominentes en el grupo CKD-HP, como se observó en estudios previos.37,39) Por lo tanto, la función renal disminuyó en el grupo CKD, particularmente en el grupo CKD-HP. Examinamos la expresión de ARNm en los vasos aórticos de ratas con ERC (Fig. 4). Aunque no hubo diferencias significativas en la expresión del ARNm de Runx2, un factor de transcripción que se mueve temprano en el mecanismo de calcificación vascular, entre los grupos (Fig. 4B) la expresión del ARNm de osteopontina aumentó significativamente en un grupo con theCKD-HP en comparación con el grupo sin grupo de ERC y elgrupo CKD-LP(Fig. 4C). La expresión del ARNm de SLC37A2 también aumentó significativamente en el grupo CK D-HP en comparación con el grupo sin CKD y el grupo CKD-LP (Fig. 4D). Debido a que hubo grandes diferencias individuales en estas ratas, examinamos la correlación entre la osteopontina y el ARNm de SLC37A2 y encontramos una correlación significativa entre estas moléculas (Fig. 4E). El examen histológico de la aorta toracoabdominal reveló calcificación medial sólo en la aorta del grupo CKD-HP (Fig. 5A). Para examinar el sitio de expresión de SLC37A2 en la aorta, realizamos inmunotinción de la aorta de CKD-HPrats. SLC37A2 se expresó fuertemente en el área dondecalcificación vascularocurrió (Fig. 5B).

Fig. 1. HeatMap de genes expresados ​​de manera diferente entre AoSMC no cultivados con P 2,6 mM y AoSMC cultivados con P 2,6 mM. El rojo representa genes con un nivel de señal alto y el verde representa genes con un nivel de señal bajo. Células del músculo liso aórtico AOSMC. Vea la figura en la versión en línea.

Discusión

Investigamos moléculas candidatas relacionadas con P implicadas en la calcificación vascular. Nuestros resultados mostraron que SLC37A2 es una de las moléculas que aumentan concalcificación vascularin vitro e in vivo.

La familia SLC37 pertenece a la superfamilia SLC e incluye proteínas: SLC37A 1-440) La familia SLC37 contiene proteínas transmembrana en la membrana del retículo endoplásmico y tiene una secuencia homóloga al antiportador organofosforado bacteriano.(41) SLC37A4 es mejor conocido comotransportador de glucosa6-fosfato.(2-44 Sin embargo, hay pocos informes sobre SLC37A2 y los detalles sobre su función no se comprenden completamente. SLC37A2, también conocido como SPX2, se expresa abundantemente en macrófagos murinos, bazo, timo y tejido adiposo blanco (WAT ) de modelos de ratones genéticamente obesos y células similares a osteoclastos derivadas de células Raw264.7.(45.6) La proteína SLC37A2 transporta intercambios de glucosa-6-fosfato/fosfato y fosfato/fosfato.(4) Recientemente, informes han demostrado una asociación de SLC37A2 con enfermedad animal. (47-49) Un defecto de SLC37A2 causaosteopatía craneomandibular(CMO), una enfermedad ósea proliferativa autolimitada, en razas terrier. (47) En el ganado lechero, una mutación homocigótica SLC37A2 es responsable de la muerte embrionaria. (8.9) Además. SLC37A2 se ha considerado un objetivo para los genes diana de la vitamina D. (entonces) También se ha considerado el potencial del gen diana del receptor de progesterona fósforo-Ser294 en la progresión del cáncer de mama (1). Se ha informado que la inflamación puede causar y exacerbar la calcificación vascular. (2s26) Además. SLC37A2 se expresa abundantemente en macrófagos y WAT que se ven afectados por la infiltración de macrófagos. (s) Por lo tanto. Consideramos que SLC37A2 podría ser una molécula expresada durante la inflamación.. Sin embargo, nuestros hallazgos no mostraron ningún aumento en la expresión de SLC37A2 en AoSMC expuestas a una respuesta inflamatoria; esta molécula no parece verse afectada directamente por la estimulación inflamatoria. SLC37A2 puede estar involucrado en la calcificación vascular a través de un mecanismo distinto a la inflamación.

Se ha informado que SLC37A2 actúa como un enlace Panti-portero. (41) Además, se informó que SLC37A2 es un gen diana para la vitamina D, y el gen SLC37A2 contiene un importante sitio de unión al receptor de vitamina D (ss2). Cambios sistemáticamente correlacionados en la expresión de los genes SLC37A2 y las formas circulantes de vitamina D. Se ha observado en células mononucleares de sangre periférica humana. (50) Los receptores de vitamina D se unen a la 1a, 25-dihidroxi vitamina D, que es un metabolito de la vitamina D, y regulan la expresión genética. Lo, 25dihidroxivitamina D, actúa en la absorción de Ca y P en el intestino, la movilización de Ca en los huesos y la reabsorción de Caín en los riñones. (3) Hay un informe de que en ratas modelo de ERC inducida por adenina, la 25-dihidroxi vitamina D en suero fue significativamente mayor en ratas con una ingesta de dieta alta en p, con calcificación vascular avanzada, en comparación con ratas con dieta baja. -p ingesta dietética.39) SLC37A2 puede estar relacionado con la regulación de P a través de la vitamina D. Se necesitan más estudios para aclarar que la vitamina D afecta la expresión de SLC37A2 in vitro y Vivo.

Se ha demostrado que el mecanismo de calcificación vascular es similar al de formación ósea. La deficiencia de SLC37A2 causada por CMO es clínicamente comparable a la hiperostosis cortical infantil humana, también conocida como enfermedad de Caffey.7 Además, hay informes de que SLC37A2 se expresa en la médula ósea y los osteoclastos.o Hytone et al.(7 plantearon la hipótesis de que una disfunción de SLC37A2 causaría un desequilibrio en la función de formación de hueso osteoblástico y osteoclástico y, como resultado, conduciría a hiperostosis.

Runx2 es un factor de transcripción esencial para la calcificación vascular. También se informa que Runx2 es un factor de transcripción de diferenciación de osteoblastos expresado en células epiteliales mamarias en desarrollo. (s435) Runx2 parece ser necesario para la regulación de los genes diana de progesterona fósforo-Ser294, que están asociados con la progresión del cáncer de mama. SLC37A2 se considera un gen diana candidato para el receptor de progesterona fósforo-Ser294. (s1) Por lo tanto, se considera que Runx2 puede regular SLC37A2. En el presente estudio, la expresión del ARNm de SLC37A2 en la aorta de ratas CkD se correlacionó con el ARNm de osteopontina, que se dirige al gen de Runx2.