Estudio sobre la función neuroendocrina-inmune de Cistanche Deserticola y sus productos para cocinar al vapor vino de arroz en el modelo de rata Ⅱ inducido por glucocorticoides
Aug 16, 2024
3.2.4. Inmunohistoquímica
La apoptosis neuronal está controlada por muchos genes apoptóticos y antiapoptóticos, principalmente el gen Bax promotor de la apoptosis y los genes antiapoptóticos de la familia de genes Bcl-2. Bcl-2 se localiza en orgánulos reactivos productores de oxígeno, como las mitocondrias, el retículo endoplásmico y las membranas nucleares. Bcl-2 tiene poco impacto sobre los radicales libres de oxígeno, pero puedeprevenir el daño oxidativo en las células. Bax se transporta desde el citoplasma a la membrana mitocondrial, cambia la estructura de la membrana mitocondrial y promueve la liberación de citocromo c y la inducción de apoptosis.
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Hubo una expresión en el citoplasma suprarrenal de las proteínas Bax y Bcl-2. La tinción mostró todas las partículas amarillas. En comparación con la del grupo BC, la densidad óptica promedio de la proteína Bax en el grupo MC aumentó significativamente (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).
La Figura 5 (b) muestra que, en comparación con la del grupo BC, la densidad óptica promedio de la proteína Bcl-2 en el grupo MC disminuyó significativamente (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).
La proteína caspasa-3 se localiza principalmente en el citoplasma en su forma original en los tejidos normales y tiene baja expresión. Las señales positivas son de color amarillo pálido o amarillo parduzco. En comparación con la del grupo BC, la expresión de caspasa-3 en el grupo MC aumentó significativamente (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).
En tejidos normales, la expresión del gen Fas se redujo y la señal positiva para la hibridación in situ fue de color amarillo parduzco. Como se muestra en la Figura 5 (d), en comparación con la del grupo BC, la densidad óptica promedio de la proteína Fas en el grupo MC aumentó (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).
La proteína FasL se localiza principalmente en la membrana celular o citoplasma y sus señales positivas son de color marrón. En comparación con la del grupo BC, la densidad óptica promedio del gen FasL en el grupo MC aumentó significativamente (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).
Los resultados demostraron que CD y WCD podríaninducir apoptosis en células inflamatoriasy reducir el daño suprarrenal al promover la expresión de la proteína FasL y unirse a la proteína Fas, activando la proteína caspasa-3 y desencadenando una cascada de caspasas. El efecto del grupo WCD-HD fue el mejor.
3.3. Determinación de la función inmune
3.3.1. Índice de órganos inmunes
En comparación con los del grupo BC, el coeficiente de timo y el índice de bazo del grupo MC disminuyeron significativamente (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.
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3.3.2. Detección de subconjuntos de linfocitos T en sangre periférica
El porcentaje de células CD4+ en el cuadrante superior izquierdo y de células CD8+ en el cuadrante inferior derecho en el BC y en cada grupo de fármaco fue mayor que en el grupo MC. En comparación con el grupo BC, la proporción de CD4+ThCD8+ disminuyó significativamente en el grupo MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).
3.3.3. Determinación del nivel de IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α e IFN-C en suero
La Figura 8 muestra que, en comparación con el grupo BC, el nivel de IL-6, TNF- e IFN-c aumentó significativamente (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.
3.3.4. Resultados del experimento de observación con microscopio de tejido de Lymus
La Figura 9 muestra que en el grupo BC estaba presente una gran cantidad de linfocitos. Los linfocitos y reticulocitos estaban dispuestos de forma laxa en el centro con timocitos dispersos, redondos u ovalados. No hubo necrosis, infiltración de células inflamatorias ni cambios anormales.
El grupo MC mostró una gran cantidad de tejido de necrosis linfoide, con una disposición desordenada de linfocitos y reticulocitos en el centro. Los timocitos redondos u ovalados desaparecieron, se evidenció degeneración celular masiva o necrosis y hubo infiltración de células inflamatorias con cambios patológicos anormales.
En los grupos de EC, las características morfológicas de los linfocitos habían vuelto a la normalidad y la disposición de los linfocitos centrales y los reticulocitos era casi normal. Se habían recuperado timocitos redondos u ovalados, pero quedaba un pequeño número de linfocitos degenerativos o necróticos y células inflamatorias infiltrantes.
En los grupos WCD y PC, las características morfológicas de los linfocitos se repararon mejor. Los linfocitos y reticulocitos del centro estaban bien alineados, los timocitos redondos u ovalados eran casi normales, pero quedaba un pequeño número de linfocitos infiltrantes y degenerativos.
3.4. Expresión génica de la proteína CaM
Se consideró el valor RQ (ARNm de CaM -ARNm de actina) para examinar la expresión de ARNm de CaM. El RQ del grupo BC fue 1. La expresión de ARNm de CaM en el hipotálamo en el grupo MC aumentó significativamente (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.
4. Discusión
La Farmacopea China [2] registra que CD y WCD se pueden utilizar en la clínica como los principales tipos de piezas de decocción. Después de ser cocidos al vapor con vino de arroz, elEfectos antienvejecimiento y tonificantes del riñón-yang.fueron potenciados. A través de UPLC-QqQ-MS, detectamos los cambios cuantitativos en la base del material químico durante el proceso de cocción al vapor del vino de arroz. Los glucósidos iridoides eran inestables y el contenido de estos glucósidos disminuyó, llegando incluso a ser indetectable. El contenido de glucósidos de feniletanol también cambió, lo que podría inducir cambios en la farmacodinámica y el efecto clínico.
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El modelo clásico de deficiencia de yang en el riñón se replicó mediante inyección subcutánea de corticosterona [19]. Una sobredosis de corticosterona podría inhibir la secreción de CRH en el hipotálamo. Mientras tanto, también se inhibió el secreto de ACTH. El nivel de la hormona de la corteza suprarrenal disminuyó y, por tanto, se redujo la función del eje HPA. La hipofunción del eje HPA es una característica común de la deficiencia de yang del riñón [20]. Entonces las ratas muestran fenómenos de "agotamiento" y los síntomas concuerdan con los de la deficiencia de yang del riñón en la clínica.
En el grupo MC, el nivel de CRH, ACTH, T y CORT en el suero de rata disminuyó significativamente (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.
La modulación de la proporción de miembros de la familia Bcl-2 es uno de los mecanismos centrales por los cuales FasThFasL media en la vía del receptor de muerte, y la familia Bcl-2 regula la vía mitocondrial [21]. El factor inhibidor de la apoptosis Bcl-2 y los factores inductores de apoptosis, como Bax, pertenecen todos a la familia Bcl-2 [22]. La apoptosis celular puede estar determinada por la proporción relativa de factores inhibidores de la apoptosis y factores inductores de la apoptosis [23]. Las mitocondrias tienen la función de puntos de control centrales para muchas formas de apoptosis [24]. El presente estudio demostró que CD-MD y WCD podrían deducir la expresión de Bax y aumentar Bcl-2 amejorar la deficiencia de riñón-yang. Fas es el principal receptor de muerte que induce la apoptosis mediante ligadura con el ligando de Fas (FasL) [25]. La expresión de Fas y FasL en el grupo MC aumentó, mientras que esta expresión aumentó significativamente en el grupo WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).
La deficiencia de la función inmune es una de las manifestaciones importantes de la deficiencia de yang del riñón [28]. En este estudio, encontramos que el índice del bazo y el timo del grupo WCD-MD se recuperó significativamente (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).
El eje HPA es el sistema regulador más importante porque regula la secreción de glucocorticoides y el sistema endocrino para mantener la función secretora de la corteza suprarrenal [32]. La sobreexpresión de ARNm de CaM en el tejido del hipotálamo se relacionó con la deficiencia de yang del riñón. CD y WCD podrían bloquear los canales de calcio, inhibir la expresión de ARNm de CaM en el hipotálamo y disminuir la entrada de calcio, disminuyendo así la actividad del complejo Ca2+·CaM.
La formación de una deficiencia de yang en el riñón es un proceso de desarrollo de una enfermedad crónica. Riñón ya no es un concepto puramente anatómico, sino un término general para los sistemas de inmunidad neuroendocrina y genitourinario. La red neuroendocrino-inmune (NEI) es un importante sistema regulador integrado [33]. CD y WCD pueden regular la función del eje HPAT y mejorar la recuperación de la deficiencia de riñón-yang. Este resultado proporciona la base experimental para la prevención clínica y el tratamiento de la deficiencia de yang de riñón.
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