Estudio sobre la función neuroendocrina-inmune de los glucósidos feniletanoide de la hierba Cistanche que vive en el desierto en un modelo de rata perimenopáusica

para más información:ali.ma@wecistanche.com

Shuo Tiana y otros

Resumen

Relevancia etnofarmacológica:

vida en el desiertoCistanchehierbase registró por primera vez en "Shen Nong'Herbal Classic" y figura como la medicina herbaria de grado superior en él.Feniletanoideglucósidosson componentes indicativos para la identificación y determinación del contenido de la vida del desiertoCistanchehierbaen la farmacopea china, que también es uno de los principales componentes activos. En esta investigación, exploramos el mecanismo defeniletanoideglucósidosde la vida en el desiertoCistanchehierbaa las ratas modelo perimenopáusicas.

Apuntar:

El propósito de este estudio es investigar los efectos defeniletanoideglucósidosde Desertliving Cistancheherb (PGC) en elneuroendocrino-inmunefunción del síndrome perimenopáusico en ratas modelo perimenopáusicas.

Materiales y métodos:

Se seleccionaron ratas hembra Wistar. Se extirparon los ovarios izquierdos de todas las ratas excepto en el grupo de control en blanco (BC), y los ovarios derechos se extirparon en el 80 por ciento. El frotis vaginal mostró cambios irregulares en el ciclo estral para las ratas modelo perimenopáusicas. Y las ratas modelo perimenopáusicas fueron alimentadas Gengnian'an,Feniletanoideglucósidosde la vida en el desiertoCistanchehierbasuspensión alta, media, baja que es de 450 mg/(kg día), 133,33 mg/(kg día), 66,67 mg/(kg día), 33,33 mg/(kg día); el grupo de BC y el grupo modelo (MC) recibieron agua destilada en el mismo volumen que el grupo de drogas durante 30 días consecutivos. Las puntuaciones de ejercicio vertical horizontal se midieron a los 29 días de dosificación. Después de la última administración, se extrajo sangre de la aorta abdominal y se midieron los niveles de E2, LH, FSH, GnRH, BGP en suero y los niveles de -EP en plasma respectivamente. Se calcularon los índices de órganos del timo, el bazo y el útero. Se midió el contenido de receptores de estrógenos (RE) en los tejidos hipotalámico, pituitario y del útero y el contenido de receptores de andrógenos (AR) en el homogeneizado hipotalámico. Los cambios patológicos del timo, bazo, útero, ovario se observaron mediante tinción con HE.

Resultados:

En comparación con MC, PGC aumenta la actividad, el índice de órganos (timo, bazo, útero), E2, T, nivel de BGP en suero, nivel de -EP en plasma, nivel de AR en el hipotálamo, nivel de ER en el hipotálamo, pituitaria, útero en ratas modelo perimenopáusicas. Y también redujo los niveles de FSH, LH, GnRH en suero y mejoró las lesiones uterinas y ováricas en ratas modelo perimenopáusicas.

Conclusión:

Cada dosis de PCG podría contrarrestar el trastorno de la hormona sexual en ratas modelo perimenopáusicas, corregir el desequilibrio de los niveles de ER y AR, potenciar y restaurar el efecto del útero y las células nerviosas del hipotálamo, y mejorarinmunefunción.

Palabras clave:Feniletanoideglucósidosde vivir en el desierto,Cistanchehierba, ratas modelo perimenopáusicas,neuroendocrino-inmunefunción

FeniletanoideglucósidosdeCistanchehierbatiene unneuroendocrino-inmunefunción

Haga clic en el tallo de Cistanche

1. Introducción

Con el envejecimiento de la población, la incidencia del síndrome perimenopáusico va en aumento. Algunos estudios han encontrado que la edad de aparición del síndrome perimenopáusico ha ido descendiendo a nivel internacional y ha disminuido de los 65 a los 35 años. La medicina moderna cree que el síndrome perimenopáusico se refiere a los síntomas causados ​​por la disminución de la función ovárica (Miao et al., 2017a,b). El nivel de estrógeno es bajo, lo que provoca funciones anormales como las funciones endocrinas, nerviosas yinmunefunciones Las principales manifestaciones clínicas son los sofocos, la sudoración, las palpitaciones, el insomnio, la irritabilidad, la menstruación irregular, la osteoporosis y la incidencia de enfermedades cardiovasculares (Lobo et al., 2014; Alvarado-García et al., 2015), que afectan gravemente la vida. de mujeres perimenopáusicas. La terapia de reemplazo hormonal (TRH) es el método principal para el tratamiento de este síndrome, pero la terapia de reemplazo de estrógenos a largo plazo puede causar efectos adversos como coprofagia, dolor distendido en el seno, carcinoma de endometrio, cáncer de mama y mayor incidencia de enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares, y es susceptible de recurrencia (Perrone et al., 2013). Estos síntomas limitan su aplicación clínica, por lo que las personas están prestando cada vez más atención a los problemas de esta etapa especial de la menopausia.

Las características de síndromes como "vísceras", "coagulación de sangre vieja", "enfermedad del lirio", "síndrome de depresión" y "no desobediencia" registradas en la medicina tradicional china son similares a las del síndrome menopáusico médico moderno. Pertenecen a la categoría de varios síntomas antes y después de la menopausia. "Suwen: Shanggu Tianzhen Lun", dijo: "El canal Ren es débil cuando la gente tenía 49 años, y el buque de paso se reducirá, la esencia estimulante del sexo se agota y otros fenómenos, por lo tanto, una mujer pierde la función de un feto." Y la esencia estimulante del sexo se transforma en esencia renal, por lo que la medicina tradicional china (MTC) cree que el principal patógeno de la enfermedad es la deficiencia renal (Peng, 2014). Los estudios también han demostrado que la disminución de la función ovárica es la causa del síndrome de astenia renal en la terminología de la MTC. La reducción de los niveles de E2, LH, FSH, es una expresión de la astenia renal (Liu et al., 2010), y el estudio encontró que la mayoría de los fármacos de reposición del yang renal tienen un mejor efecto de tratamiento sobre el síndrome perimenopáusico (Zhang y Miao, 2011; Cao et al., 2016; Wang et al., 2016; Tian et al., 2017a,b), por lo que debemos comprender firmemente el papel de la "deficiencia renal" en la terminología de la MTC como la patogenia principal en la clínica. tratamiento, y enfatizando el objetivo principal de reponer el riñón. Los estudios han demostrado que al reponer los riñones, la medicina china puede regular la disfunción del eje HPO, retrasar el envejecimiento ovárico, regular lanervioso endocrino-inmunesistema, mejorar la inmunidad y prevenir la osteoporosis (Shi et al., 2007), entre otros efectos. vida en el desiertoCistanchehierbaes un tallo seco, escamoso y carnoso de Cistanche deserticoLa YCMa o Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, es una planta medicinal parásita perenne. Tiene el efecto de reponer el riñón, reponer la esencia y la sangre, aflojar el intestino para aliviar el estreñimiento y otros efectos. vida en el desiertoCistanchehierbase usa comúnmente en la medicina tradicional china para vigorizar el riñón y fortalecer el yang, que se llama "ginseng del desierto". La investigación moderna ha demostrado que tiene efectos antienvejecimiento, mejora la inmunidad del cuerpo, mejora la capacidad de aprendizaje y memoria, efectos antiinflamatorios y antifatiga, entre otros (Li et al., 2010). La composición química de la hierba Desertliving Cistanche es compleja y el contenido defeniletanoideglucósidoses el más alto en los materiales medicinales originales. También es uno de los principales componentes activos del DesertlivingCistanchehierbapara ejercer un efecto similar al de los andrógenos y propiedades inmunomoduladoras (Zhao y Pan, 2013). Y PGC podría mejorar el trastorno de la hormona sexual (E2, T, FSH, LH) en ratones perimenopáusicos, y tiene un buen efecto terapéutico en ratones perimenopáusicos, consulte el estudio relacionado (Tian et al., 2017a,b).

En la actualidad, la investigación sobre el síndrome perimenopáusico se centra en el sistema endocrino, sistema nervioso,inmunefunción, etc., pero el trastorno de endocrino-inmuneregulación es la causa principal del síndrome perimenopáusico (Wang et al., 1999; Zhang y Wang, 2001). Este estudio examinó el efecto de PGC en las ratas modelo perimenopáusicas desde la perspectiva de la endocrino-inmunefunción.

2. Materiales y métodos

2.1. animales de experimentación

Se compraron ratas Wistar hembra (210–230 g) de ShandongLukang Pharmaceutical Co., Ltd., Número de permiso de animales: 0017216, certificado de laboratorio No. SYXK (Henan) 2010–001. Todas las ratas se mantuvieron con libre acceso a alimentos y agua en jaulas de plástico a 22 ± 2 grados, humedad relativa del 50 al 60 por ciento. Y los animales se alojaron durante una semana antes de los experimentos.

2.2. Materiales y reactivos

Carboximetilcelulosa sódica, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co., Ltd., número de lote: 20120418; Bencilpenicilina potásica para inyección, Huabei China Pharmaceutical Co., Ltd., Especificación: 4 millones de unidades, Número de lote de producción: c1206807; Solución de formaldehído (puro analítico), Yantai Shuangshuang Chemical Co., Ltd., lote de producción n.°: 20130902; hidrato de cloral, Instituto de Investigación Química Fina de Tianjin Guangfu, número de lote 20120827; rata E2, T, FSH, LH, GnRH, AR, ER, BGP, -EP Caja de reactivos de detección ELISA, I+D, número de lote: 20140101A.

2.3. Drogas experimentales

Se ha publicado el método de preparación específico y la detección de contenido de PGC. Ver la literatura y el contenido es 66,47 por ciento (Tian et al., 2017a,b). Cápsula Gengnian, ingredientes: Rehmannia, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicas, Scrophulariaceae, Cortex Moutan, Poria, Mother of Pearl, Curculigo, Schisandra, Magnet, Shouwu Vine, Uncaria, Floating Wheat, Polygonum multiflorum. Indicaciones: nutrir el yin y el yang, deshacerse del problema y calmar la mente, y se usa para la menopausia con sofocos, sudoración, vértigo, tinnitus, irritabilidad e insomnio. Especificaciones: 0,3 g por cápsula. Modo de empleo y dosificación: Oral, 3 cápsulas a la vez, 3 veces al día. Empresa de producción: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. Número de lote de producción: 121104. Número de aprobación: Medicina Nacional Zhunzi Z14021848.

FeniletanoideglucósidosdeCistanchehierbatiene unneuroendocrino-inmunefunción

2.4. instrumento experimental

Cámara de prueba de actividad de apertura, Chengdu Taimeng Software Co., Ltd., modelo OFT-100; microscopio motorizado, empresa japonesa OLYMPUS, modelo: BX61; lector de microplacas, empresa estadounidense BIO-RAD, modelo: 680; Centrífuga refrigerada de alta velocidad X3R, EE. UU. Mercury Technology Co., Ltd.

2.5. Preparación y agrupación de modelos animales

Se tomaron ochenta ratas que pesaban 210–230 g y se seleccionaron aleatoriamente 12 ratas como grupo BC, y las ratas restantes se usaron para modelos animales perimenopáusicos. El método de preparación de ratas modelo perimenopáusicas, método de literatura de referencia (Miao et al., 2015), eliminó completamente el ovario izquierdo, se eliminó el 80 por ciento del ovario del lado derecho. Cuidadosamente criados después de la operación, y para la prevención de la infección a la inyección de penicilina 20U/kg (0,1 ml) por vía intramuscular, durante 3 días consecutivos, una vez al día. Después de 5 días de la cirugía, se realizó el examen de frotis vaginales de las ratas uno a uno, una vez al día y consecutivos durante 5 días. Las ratas con reacciones de celo fueron descartadas. Sesenta ratas ovariectomizadas se dividieron al azar y por igual en 5 grupos para uso experimental. Eran el grupo modelo (MC), el grupo Gengian'an (GC),Feniletanoideglucósidosde la vida en el desiertoCistanchehierbagrupo de dosis alta (PGC-HD), media (PGC-MD), baja (PGC-LD).

2.6. Método de configuración de drogas

(1) Las dosis de PGC-HD, PGC-MD, PGC-LD son 133,33 mg/kg, 66,67 mg/kg y 33,33 mg/kg (volumen de administración 1 ml/100 g) respectivamente. Método de configuración: Pesar PGC 1333,3 mg, 666,7 mg, 333,3 mg, primero disuelto con una pequeña cantidad de agua destilada, y luego agregar agua destilada a 100 ml y mezclar bien, es decir, el PGC-HD, PGC-MD, PGC requerido -Suspensión LD.

(2) La dosis de GC es de 450 mg/kg, y el volumen de administración es el mismo que el anterior, lo que equivale a 10 veces la dosis clínica. Método de configuración: tome 15 cápsulas de GengrianCapsule, disuélvalas primero con una pequeña cantidad de agua destilada, luego ajústelas a 100 ml y mézclelas. Esta es la suspensión de GC deseada.

2.7. Método de administración

A cada grupo de animales se le suministró el fármaco correspondiente el día 10 después de la operación. Al grupo GC se le administró 450 mg/kg de Gengnian Capsule Suspension, y PGC-HD, PGC-MD, PGC-LD se administró respectivamente con PGC-HD, PGC-MD, PGC-LD suspensión que es 133,33 mg/kg, 66,67 mg /kg, 33,33 mg/kg. Los grupos BC y MC se administraron respectivamente con el mismo volumen de agua destilada, una vez al día durante 30 días.

2.8. Prueba de campo abierto

Las ratas de cada grupo se sometieron a prueba para las puntuaciones de ejercicio horizontal-vertical a los 29 días de la administración. El dispositivo experimental es una caja abierta cúbica con una altura de 40 cm y una longitud de 80 cm y un ancho de 80 cm. La pared periférica y la superficie inferior son negras, y la superficie inferior está compuesta por 25 bloques de igual área, que están divididos por líneas blancas. Durante el experimento, las ratas se colocaron en el cuadrado de la caja abierta y se observaron las puntuaciones de actividad horizontal de los rayos que pasaban a través de la superficie inferior en 5 minutos (los cuadrados en los que se introdujeron las cuatro garras), y se observó la actividad vertical. Se levantó una veintena del número de patas traseras (dos patas delanteras se desocuparon o treparon por la pared). Las heces deben eliminarse por completo después de cada experimento y medirse una vez después de 2 h de administración. Este experimento se llevó a cabo en una habitación tranquila.

2.9. Determinación del nivel de E2, T, LH, FSH, GnRH, BGP en suero y niveles de -EP en plasma

Las ratas de cada grupo después de la última administración de 2 h (ayuno durante 12 h), anestesia abdominal, se extrajo sangre de la aorta abdominal, se separó el suero y el plasma (4 grados, 3500 rpm, 10 min), se almacenaron en un refrigerador a −80 grados. El uso de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas midió el nivel de E2, T, LH, FSH, GnRH, BGP en suero y el nivel de -EP en plasma. El método específico de operación se realizó de acuerdo con las instrucciones.

2.10. Determinación de ER y AR en homogeneizados de hipotálamo, hipófisis y tejido uterino

Después de extraer sangre de la aorta abdominal, se sacrificaron las ratas. Se extrajeron del cuerpo el hipotálamo, la hipófisis y el útero. Se homogeneizaron el hipotálamo, la hipófisis y la mitad del útero. El método de homogeneización fue el siguiente:

El bloque de tejido se enjuagó en 0 cloruro de sodio al 0,9% enfriado con hielo, se extrajo la sangre y se secó el tejido con papel de filtro, se pesó el tejido, se cortó en tubos de homogeneizado de vidrio y se homogeneizó por agregando 0.9 por ciento de cloruro de sodio preenfriado (La proporción de tejido y0.9 por ciento de cloruro de sodio es 1:9). El tubo de homogeneización manual izquierdo se inserta en el recipiente que contiene la mezcla de hielo y agua. La mano derecha se inserta en la carcasa verticalmente y se gira hacia arriba y hacia abajo varias veces (6–8 min), tritura completamente, homogeneiza el tejido, centrifuga (4 grados, 3500 rpm, 10 min) y almacena a -80 grados en el refrigerador. .
El contenido de ER en homogeneizados de hipotálamo, hipófisis y tejidos uterinos, y el contenido de AR en homogeneizados de hipotálamo se determinaron mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) de acuerdo con las instrucciones.

FeniletanoideglucósidosdeCistanchehierbatiene unneuroendocrino-inmunefunción

2.11. Cálculo del índice de órganos

Las ratas de cada grupo después de la última administración de 2 h (en ayunas durante 12 h), se sacrificaron las ratas y se extirparon el timo, el bazo, el útero y el 20 por ciento restante del tejido ovárico, se pesaron los pesos húmedos y se extrajo el órgano. Se calculó el índice del timo, bazo, útero. La fórmula es la siguiente:

Índice de órganos=Peso de órganos húmedos (mg)/ Masa corporal de rata (g)

2.12. Observación de la morfología del útero, ovario, timo, bazo y medición del grosor de la corteza tímica y los nódulos del bazo

El timo, el bazo, el útero y el ovario se fijaron en una solución de formaldehído al 10 por ciento, se incluyeron en parafina, se seccionaron, se tiñeron con HE y se observaron los cambios histomorfológicos bajo un microscopio óptico. Usando el micrómetro, se midió el grosor de la corteza del timo en los puntos más gruesos y más estrechos de cada rata en cada grupo experimental. El promedio es el grosor de la corteza del timo. La línea base del micrómetro se colocó en los nódulos del bazo hacia el centro. Determinación del grosor del bazo en ambos lados con la arteria central como centro, y el promedio es el grosor del bazo.

2.13. análisis estadístico

El análisis de datos utiliza el paquete estadístico médico SPSS21.0 para realizar el procesamiento estadístico de los datos, y los datos metrológicos se expresan como media ± desviación estándar (x(-) ± s), la comparación entre los grupos utiliza un solo factor análisis de varianza. Se utilizó el método LSD para la prueba de varianza de homogeneidad, el método de Games-Howell para la prueba de varianza desigual y la prueba de Ridit para los datos de grado.

3. Resultados experimentales

3.1. Efectos del comportamiento en ratas modelo perimenopáusicas

De la Fig. 1 (A y B). Se puede ver que, en comparación con BC, las puntuaciones de movimiento horizontal y vertical de las ratas del grupo MC se redujeron significativamente (P < 0.01),="" lo="" que="" refleja="" la="" curiosidad="" de="" las="" ratas="" por="" lo="" desconocido.="" ambiente.="" en="" comparación="" con="" mc,="" cada="" grupo="" pudo="" aumentar="" significativamente="" la="" puntuación="" de="" ejercicio="" horizontal="" de="" las="" ratas="" (p="">< 0.01),="" y="" pgc-hd,="" pgc-md,="" pgc-ld="" aumentaron="" significativamente="" la="" puntuación="" de="" movimiento="" vertical="" de="" las="" ratas="" (p=""><0,05). el="" grupo="" pgc-ld="" tenía="" la="" tendencia="" a="" aumentar="" la="" integral="" de="" movimiento="" vertical="" de="" las="">

3.2. Efecto del índice de órganos relacionados en ratas modelo perimenopáusicas

En la Fig. 2 (A, B, C), pudimos ver que, en comparación con BG, el índice de órganos del timo, el bazo y el útero en las ratas del grupo MC disminuyó significativamente (P < 0.{{3}="" }1),="" lo="" que="" indica="" que="" el="" timo,="" el="" bazo="" y="" el="" útero="" parecían="" contraerse="" en="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas="" debido="" a="" la="" extirpación="" incompleta="" del="" ovario.="" en="" comparación="" con="" mc,="" el="" índice="" de="" órganos="" del="" timo="" y="" el="" bazo="" de="" las="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas="" aumentó="" significativamente="" en="" cada="" grupo="" de="" fármacos="" (p="">< 0.01).="" los="" grupos="" pgc-hd,="" pgc-md="" y="" gc="" aumentaron="" significativamente="" el="" índice="" uterino="" de="" las="" ratas="" modelo="" de="" perimenopausia="" (p="">< 0,01).="" pgc-md="" aumentó="" significativamente="" el="" índice="" del="" útero="" de="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas="" (p=""><>

3.3. Efecto de indicadores bioquímicos en ratas modelo perimenopáusicas

Como se muestra en la Fig. 3. (A, B, C, D), en comparación con el grupo BC, los niveles de E2 y T en suero en el grupo MC se redujeron significativamente (P < 0).{{4="" }}1),="" y="" los="" niveles="" de="" lh="" y="" fsh="" aumentaron="" significativamente="" (p="">< 0.{{10}}1),="" lo="" que="" indica="" que="" la="" extirpación="" incompleta="" del="" ovario="" en="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas="" conduce="" al="" trastorno="" de="" hormonas="" sexuales,="" el="" modelo="" de="" ratas="" perimenopáusicas="" se="" replicó="" con="" éxito.="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" mc,="" cada="" grupo="" de="" fármacos="" podría="" aumentar="" significativamente="" los="" niveles="" de="" e2,="" t="" en="" suero="" y="" reducir="" los="" niveles="" de="" fsh="" (p="">< 0,01);="" pgc-md,="" el="" grupo="" gc="" podría="" reducir="" significativamente="" los="" niveles="" elevados="" de="" lh="" (p="">< 0,01),="" pgc-hd="" podría="" reducir="" significativamente="" el="" nivel="" de="" lh="" (p="">< 0,05);="" pgc-ld="" podría="" reducir="" el="" nivel="" de="">

A partir de la Fig. 3 (E, F), en comparación con el grupo BC, el nivel de GnRH del grupo MC en suero aumentó significativamente y el nivel de -EP en plasma disminuyó significativamente (P < 0.="" 01),="" se="" indica="" que="" la="" ablación="" ovárica="" incompleta="" conduce="" a="" un="" trastorno="" de="" las="" hormonas="" sexuales="" en="" las="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas,="" y="" las="" hormonas="" relacionadas="" secretadas="" por="" el="" hipotálamo="" también="" estaban="" alteradas="" debido="" a="" la="" regulación="" por="" retroalimentación="" negativa.="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" mc,="" el="" nivel="" de="" gnrh="" en="" cada="" grupo="" de="" fármacos="" se="" redujo="" significativamente="" (p="">< 0.01);="" el="" nivel="" de="" -ep="" aumentó="" significativamente="" en="" el="" grupo="" pgc-hd,="" pgc-md,="" gc="" (p="">< 0,01),="" el="" nivel="" de="" -ep="" en="" plasma="" fue="" significativamente="" elevado="" en="" pgc-ld="" (p=""><>

3.4. Efecto de los niveles de BGP en suero en ratas modelo perimenopáusicas

Puede verse en la Fig. 4 que el nivel de BGP en suero en el grupo MC fue significativamente más bajo que el grupo BC (P < 0.01),="" lo="" que="" indica="" que="" el="" nivel="" de="" bgp="" en="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas="" con="" ovarios="" incompletos="" se="" redujo.="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" mc,="" los="" niveles="" de="" bgp="" en="" el="" grupo="" pgc-hd,="" pgc-md,="" pgc-ld,="" gc="" aumentaron="" significativamente="" (p=""><>

3.5. Efecto de ER, AR en ratas modelo perimenopáusicas

Se puede ver en la Fig. 5 que, en comparación con el grupo BC, los niveles de ER y AR en las ratas modelo perimenopáusicas disminuyeron significativamente (P < 0.01),="" lo="" que="" indica="" que="" la="" hormona="" los="" receptores="" en="" los="" tejidos="" relacionados="" con="" el="" cuerpo="" de="" las="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas="" causados="" ​​por="" una="" ovariectomía="" incompleta="" se="" redujeron,="" lo="" que="" redujo="" los="" efectos="" biológicos="" del="" estrógeno="" y="" el="" andrógeno.="" como="" se="" muestra="" en="" la="" fig.="" 5="" (a,="" b,="" c),="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" mc,="" cada="" grupo="" de="" fármacos="" podría="" aumentar="" significativamente="" el="" nivel="" de="" er="" en="" el="" hipotálamo,="" la="" pituitaria="" y="" el="" útero="" (p="">< 0.01);="" a="" partir="" de="" la="" fig.="" 5="" (d),="" los="" niveles="" de="" ar="" en="" el="" hipotálamo="" en="" el="" grupo="" pgc-hd,="" pgc-md,="" gc="" aumentaron="" significativamente="" (p=""><>

3.6. Efecto de la morfología patológica del útero en ratas modelo perimenopáusicas

De acuerdo con los cambios en el endometrio, las glándulas y las capas musculares de las ratas de cada grupo, se utilizaron criterios semicuantitativos para clasificar la histopatología en cuatro niveles de "-, plus, plus plus, plus plus plus". A partir de la prueba de Ridit, se puede ver en la Fig. 6 y la Tabla .1 que, en comparación con BC, el útero de MC mostró cambios patológicos significativos (P < 0.01).="" en="" comparación="" con="" mc,="" cada="" grupo="" de="" fármacos="" podría="" mejorar="" significativamente="" las="" lesiones="" patológicas="" del="" tejido="" del="" útero="" (p=""><>

3.7. Efecto de la morfología patológica en el tejido ovárico en ratas modelo perimenopáusicas

Con base en los cambios de los folículos ováricos, el cuerpo lúteo, las células de la granulosa y los vasos sanguíneos a diferentes niveles en los grupos experimentales, se adoptaron criterios semicuantitativos para clasificar la morfología del tejido patológico en cuatro niveles: "-, plus, plus plus, más más más ". Con base en la prueba de Ridit, se puede ver en la Fig. 7 y la Tabla .2 que, en comparación con el grupo BC, el ovario del grupo MC mostró lesiones patológicas significativas (P < 0.01="" ).="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" mc,="" cada="" grupo="" de="" fármacos="" podría="" mejorar="" significativamente="" los="" cambios="" patológicos="" del="" tejido="" ovárico="" (p=""><>

3.8. Efecto de la morfología del tejido del timo en ratas modelo perimenopáusicas

Se puede ver en la Fig. 8 que el grosor de la corteza del timo en el grupo MC se redujo significativamente en comparación con el grupo BC (P < 0.01),="" lo="" que="" indica="" que="" la="" atrofia="" del="" timo="" se="" observó="" en="" las="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas.="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" mc,="" todos="" los="" grupos="" pudieron="" aumentar="" significativamente="" el="" grosor="" cortical="" del="" timo="" (p=""><>

Fig. 8. Efecto de la morfología patológica del tejido del timo en ratas modelo perimenopáusicas. (A): Cambios patológicos en el tejido del timo (HE × 200); (B): Grosor tímicocortical (μm); En B, "a" representa que existe una diferencia significativa entre el grupo MC y el grupo BC (P < 0.01);="" "b"="" representa="" que="" existe="" una="" diferencia="" significativa="" entre="" los="" diferentes="" grupos="" de="" administración="" y="" el="" grupo="" mc="" (p="">< 0,01),="" n="" ​​="12">

3.9. Efectos de la morfología del tejido del bazo en ratas modelo perimenopáusicas

Se puede ver en la Fig. 9 que, en comparación con BC, el volumen del nódulo del bazo del grupo MC se redujo significativamente (P < 0.01),="" lo="" que="" indica="" que="" la="" atrofia="" del="" bazo="" se="" observó="" en="" las="" ratas="" modelo="" perimenopáusicas.="" en="" comparación="" con="" mc,="" el="" nivel="" de="" volumen="" de="" los="" nódulos="" esplénicos="" aumentó="" significativamente="" en="" el="" grupo="" pgc-hd,="" pgc-md,="" gc="" (p=""><>

Fig. 9. Efecto de la morfología patológica del bazo de ratas modelo perimenopáusicas. (A): Histopatología del bazo (HE × 200); (B): Grosor de los nódulos esplénicos (μm); En B, "a" representa que existe una diferencia significativa entre el grupo MC y el grupo BC (P < 0.01);="" "b"="" representa="" que="" existe="" una="" diferencia="" significativa="" entre="" los="" diferentes="" grupos="" de="" administración="" y="" el="" grupo="" mc="" (p="">< 0,01),="" n="" ​​="">

4. Discusión

4.1. Selección de modelos animales.

Con el desarrollo de la investigación sobre el síndrome perimenopáusico, también surgen continuamente métodos de preparación de varios modelos animales perimenopáusicos, como modelos animales de castración, destrucción por irradiación de rayos X del modelo animal ovárico (Li et al., 2012), {{ 2}}anillo de vinilo Modelo animal de agotamiento del folículo de etileno (Brooks et al., 2016), un modelo animal de lesión ovárica inducida por alcohol (Huang et al., 2007), un modelo animal de depresión perimenopáusica (Miao et al., 2017a,b), un modelo animal de síndrome perimenopáusico con sofocos (Zhang et al., 2010), modelo animal perimenopáusico natural (Cai et al., 2007), etc. Los diferentes modelos animales tienen sus propias aplicaciones y sus caracteristicas Este estudio se basa en el análisis de modelos animales de las características de los síntomas clínicos del síndrome perimenopáusico (Tian et al., 2015) de acuerdo con el nuevo método de evaluación del modelo animal de medicina tradicional china establecido en la etapa inicial de nuestro laboratorio (Tian et al. al., 2017a,b) y la redacción del modelo animal para el síndrome perimenopáusico (Borrador) (Miao et al., 2018). Este estudio utilizó ratas modelo perimenopáusicas con el método de castración incompleta, y este modelo animal es ampliamente utilizado para estudiar mujeres perimenopáusicas con osteoporosis, obesidad, aterosclerosis y otras condiciones, y también utilizó los estudios sobre factores relacionados con la acción de los estrógenos, como la relación entre el estrógeno y la autoinmunidad, el cáncer (Sun y Jin, 2005) y el modelo tiene una alta tasa de éxito, maduro y estable, y es ampliamente utilizado por los investigadores. Además, el ovario no solo sintetiza estrógeno sino que también participa en lainmunefunción, secretando y sintetizando otras hormonas. Y la función de los ovarios perimenopáusicos humanos no se pierde por completo, el modelo animal de castración incompleta está más cerca de la perimenopausia humana. Es más consistente con las características de los síntomas clínicos.

4.2. Selección de control positivo

Este estudio tomó la cápsula de Gengnian'an como el fármaco de control positivo, la cápsula de Gengnian'an es un fármaco clínicamente reconocido para el tratamiento del síndrome perimenopáusico, puede mejorar eficazmente los síntomas clínicos del síndrome perimenopáusico de fiebre mareal con sudoración, vértigo y tinnitus, vigilia, inquietud, y otros. Y los estudios clínicos y experimentales han demostrado que la cápsula de Gengnian'an regula el sistema endocrino yinmunefunciones de los pacientes perimenopáusicos en su conjunto, y podría mejorar los síntomas clínicos de las mujeres perimenopáusicas de varias maneras. Tiene un buen efecto terapéutico sobre el síndrome perimenopáusico (Ou et al., 2011; Wang et al., 2010; Yu et al., 2010; Li y Liu, 2011; Xie, 2003).

FeniletanoideglucósidosdeCistanchehierbatiene unneuroendocrino-inmunefunción

4.3. Efectos sobre el sistema neuroendocrino

El eje HPO humano es un sistema neuroendocrino coordinado y está controlado por el sistema nervioso central. En circunstancias normales, el hipotálamo secreta GnRH y promueve la síntesis y liberación de FSH y LH en la hipófisis, promoviendo así la secreción de hormonas sexuales y el crecimiento y desarrollo de los folículos. La interacción de HPO mantiene el sistema endocrino reproductivo femenino relativamente estable. Cuando las mujeres ingresan al período perimenopáusico, la función ovárica disminuye, la secreción de estrógeno disminuye y la retroalimentación negativa hacia el hipotálamo y la pituitaria se debilita, la glándula pituitaria secreta una gran cantidad de FSH y LH, lo que lleva a un desequilibrio de HPO, un trastorno. de un sistema endocrino, y así atender los síntomas de sofocos, sudoración, osteoporosis, y otros síntomas relacionados.

Los cambios en el contenido de FSH y LH son expresiones directas de la función de secreción hipofisaria. Los cambios en el contenido de GnRH y -EP reflejan directamente el estado de secreción del hipotálamo en el eje HPO. La secreción de E2 y T está determinada por el estado funcional del ovario. El hipotálamo, la pituitaria, el útero y otros tejidos tienen distribución ER, AR está ampliamente distribuido en el sistema nervioso central y la corteza cerebral, por lo que puede representar la función del eje HPO y reflejar el estado del sistema neuroendocrino que la detección de FSH , LH, GnRH, - EP, E2, T, ER, AR en los tejidos, suero y plasma relevantes. Además, el nivel de BGP puede reflejar directamente la actividad de los osteoblastos (Xun y Wang, 2017), el estrógeno puede inhibir el número y la actividad de los osteoclastos, tiene un impacto en el metabolismo óseo, la determinación de este índice puede reflejar la rata perimenopáusica. caso de osteoporosis. Por lo tanto, este experimento probó los indicadores bioquímicos anteriores y observó los cambios patológicos del útero y el ovario en ratas perimenopáusicas, para determinar mejor el efecto defeniletanoideglucósidossobre el sistema neuroendocrino de ratas perimenopáusicas.

4.4. Efectos sobre la función inmunológica

La glándula del timo es una importante centralinmuneórgano (Han y Lu, 2017), y también es un órgano endocrino. Durante el período de perimenopausia, debido a la falta de estimulación fisiológica del estrógeno y la reducción de los receptores de estrógeno intracelulares, la estructura del timo puede reducirse y la secreción de timosina puede reducirse, la atrofia del timo inevitablemente afectará directamente a la célula.inmuney tiene un efecto indirecto sobre la inmunidad humoral. Las células inmunoactivas del timo pueden liberar factores polipeptídicos y pasar la información al sistema neuroendocrino, produciendo respuestas fisiológicas o fisiopatológicas relevantes, como la disminución del nivel de estrógeno, puede reducir la producción de IL-2 , -EP y otras sustancias inmunomoduladoras eninmunecélulas. El bazo es el periférico más grande.inmuneórgano y también es un lugar para recibir estimulación antigénica y respuesta inmune. El bazo y el timo son componentes importantes del sistema inmunológico del cuerpo. Por lo tanto, el cuerpoinmuneLa función puede reaccionar indirectamente con el índice del timo y el bazo.

En este trabajo, a través del estudio del timo, el índice de órgano del bazo, los cambios histopatológicos, el grosor cortical del timo, el grosor de los nódulos esplénicos, etc., se responde que el PGC tiene el efecto de mejorar lainmunefunción de ratas modelo perimenopáusicas, y mejorando los cambios patológicos del timo y el bazo.

5. Conclusión

Cada dosis de PGC podría no solo contrarrestar el trastorno de las hormonas sexuales (E2, T, FSH, LH) en el síndrome perimenopáusico, aumentar los niveles de hormonas sexuales, sino también mejorar el desequilibrio de los niveles del receptor de andrógenos (ER, AR), y también mejorar el cuerpoinmunefunción y corrección de la osteoporosis, puede mejorar y restaurar el índice de órganos de las organizaciones relacionadas y mejorar los cambios patológicos del útero, el timo y el bazo. Además, en comparación con GC, PGC no tiene una diferencia significativa en el movimiento horizontal-vertical, índice de órganos, trastorno de hormonas sexuales, etc. Incluso con la mejora del nivel de E2 en el suero, redujo el nivel de FSH en el suero, mejoró nivel de expresión de ER en el útero y el hipotálamo, y los cambios patológicos de tejidos relacionados que tienen más eficaz que GC, especialmente el PGC-HD y PGC-MD. Esto indica que el PGC está regulado por el sistema endocrino yinmunesistema en su conjunto, no solo desempeña el papel de estrógeno, sino que mejora los síntomas y la calidad de vida a través de varios mecanismos, proporciona una base experimental para una amplia gama de aplicaciones clínicas para DesertlivingCistanchehierbay desarrollo de nuevos fármacos para medicinas tradicionales chinas. En el seguimiento de este estudio, se están llevando a cabo los mecanismos pertinentes para esclarecer el mecanismo de acción específico defeniletanoideglucósidosdel neuroendocrino-inmunered en el tratamiento del síndrome perimenopáusico.

Además, este estudio mostró que la PGC podría aumentar el nivel de BGP en el suero de ratas modelo perimenopáusicas y tiene un efecto sobre el metabolismo óseo, lo que sugiere que la PGC puede tener un mejor efecto terapéutico sobre la osteoporosis causada por el síndrome de la perimenopausia, la investigación relevante que la osteoporosis causada por el síndrome de la perimenopausia se puede llevar a cabo en la etapa posterior y desarrollar nuevas aplicaciones. Este estudio proporciona una buena base experimental para el nuevo uso clínico de PGC y proporciona nuevas ideas de investigación para el estudio de fármacos similares.

Declaración de contribuciones del autor

Mingan Miao y Xiumin Li diseñaron y guiaron los experimentos, Mingsan Miao, Xiumin Li, Shuo Tian, ​​Ming Bai, Yanyi Wu y Zhenzhen Wei realizaron los experimentos y analizaron los datos medidos, Miao Mingsan y Xiumin Li llegaron a la conclusión final. Ambos autores revisaron el manuscrito.

Expresiones de gratitud

Base nacional de cooperación internacional (2016–65); Académico de China central (162101510003); Avance científico y tecnológico de la provincia de Henan (162102310181). Agradecemos al Sr. Henry Ehrlich por leer y editar nuestro manuscrito.

FeniletanoideglucósidosdeCistanchehierbatiene unneuroendocrino-inmunefunción

Referencias

Alvarado-García, A., Hernández-Quijano, T., Hernández-Valencia, M., Negrín-Pérez, MC, Ríos-Castillo, B., Valencia-Pérez, GU, Vital-Reyes, VS, BasavilvazoRodríguez, MA, Torres-Arreola, LP, Ortiz-Luna, GF, Sánchez-Aguirre, F., Montaño-Uscanga, A., 2015. Diagnóstico y tratamiento de la posmenopausia y la perinemopausia. Rev.Med. Inst. méx. Seguro Soc. 53, 214–225.
Brooks, HL, Pollow, DP, Hoyer, PB, 2016. El modelo de ratón VCD de la menopausia y la perimenopausia para el estudio de las diferencias sexuales en las enfermedades cardiovasculares y el síndrome metabólico. Fisiología 31, 250–257.
Cao, S., Tian, ​​S., Bai, M., Liu, SY, Jia, JJ, Miao, MS, 2016. Efectos de los glucósidos totales de Curculigo orchioides en el modelo de perimenopausia de ratón de organización relacionada y morfología de órganos. Bangladesh J. Pharmacol. 11, S72–S81.
Cai, X., Huang, H., Wang, L., 2007. Avances en la investigación sobre modelos animales climatéricos. Diario chino de fórmulas médicas tradicionales experimentales 13, 71–73.
Han, SH, Lu, JB, 2017. El efecto de la timectomía en el cuerpo y nuevas terapias alternativas. Chin J Cell Mol Immunol 12, 1722–1726.
Huang, C., Zhu, XF, Ye, P., 2007. Avances en la investigación de experimentos con animales sobre la prevención y el tratamiento del síndrome climatérico por la medicina tradicional china. Revista de la Universidad de Jiangxi de TCM 19, 92–93.
Lobo, RA, Davis, SR, De Villiers, TJ, Gompel, A., Henderson, VW, Hodis, HN, Lumsden, MA, Mack, WJ, Shapiro, S., Baber, RJ, 2014. Prevención de enfermedades después de la menopausia . Climatérico 17, 540–556.
Li, H., Liu, GZ, 2011. Estudio clínico sobre el tratamiento del síndrome climatérico por cápsula de gengnianan. J. Shanxi Coll. tradición Barbilla. Medicina. 2, 34–35.

Li, Y., Song, YY, Zhang, HQ, 2010. Avances en la investigación de los componentes químicos y la actividad medicinal de la cistanche. Barbilla. Res. de plantas silvestres 29, 7–11.

Liu, YL, Song, ZM, Ding, Y., 2010. Estudio experimental sobre la relación entre la depresión menopáusica y el ARNm de 5-HTR1A del hipocampo y la corteza. Investigación de medicina y materia médica de Lishizhen 21, 1898–1900.

Li, RQ, Bai, M., Miao, MS, 2012. Características y perspectivas de los modelos animales del síndrome de la menopausia. Diario chino de medicina china 27, 708–710.
Miao, MS, Guo, L., Wang, T., Wang, T., Cao, S., Liu, SY, Fang, XY, 2015. Efectos de los glucósidos totales de curculigo en el modelo de ratas con síndrome perimenopáusico basado en la teoría de las hormonas endocrinas. Clínica Básica. Farmacol. Toxicol. 117, 5–6.
Miao, MS, Tian, ​​S., Bai, M., Xin, WY, 2017a. Glucósidos totales del rizoma de Curculigo para el modelo de ratones del período perimenopáusico. Pak. J. Pharm. ciencia 30, 975–978.
Miao, MS, Tian, ​​S., Guo, L., Bai, M., Fang, XY, Liu, SY, 2017b. El efecto del curculigosido en un modelo de ratón de depresión perimenopáusica. Arabia J. Biol. ciencia 24, 1894–1902.
Miao, MS, Tian, ​​S., Xin, WY, Bai, M., 2018. Estándar (borrador) para la preparación del modelo de síndrome perimenopáusico. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy 3, 996–1000.
Ou, Y., Zhang, YP, Xu, J., Kong, DM, 2011. Estudio experimental sobre el efecto del compuesto de ligustrum lucidum en la regulación del neuroendocrino -inmunefunción en ratones hembra de edad avanzada. J. Guiyang Coll. tradición Barbilla. Medicina. 33, 18–19.
Perrone, G., Capri, O., Galoppi, P., Patacchioli, FR, Bevilacqua, E., De Stefano, MG, Brunelli, R., 2013. Síntomas menopáusicos después de la interrupción de la terapia de reemplazo hormonal a largo plazo en mujeres menores de 60 años: un 3-año de seguimiento. ginecol. obstetra investigando 76, 38–43.
Peng, X., 2014. Avances recientes en la medicina tradicional china para el síndrome perimenopáusico. CJGMCM 29, 1118–1120.
Shi, HB, Miao, YB, Zhong, CL, Wang, W., 2007. Efecto del gránulo de Fushun en el sistema neuroendocrino en ratas con deficiencia de yin en la menopausia. Revista china de ciencia y tecnología médica tradicional 14, 16–17.
Sun, YH, Jin, RM, 2005. Progreso de la investigación sobre el establecimiento de modelos animales del síndrome climatérico femenino. Investigación de medicina y materia médica de Lishizhen 16, 570–573.
Tian, ​​S., Miao, MS, Bai, M., Wei, ZZ, 2017a.Feniletanoideglucósidosdecistancheen el modelo de síndrome menopáusico en ratones. Farmacéutico saudí. J. 25, 537–547.
Tian, ​​S., Bai, M., Miao, MS, 2015. Características clínicas en modelos animales basados ​​en el síndrome perimenopáusico. Diario chino de fórmulas médicas tradicionales experimentales 21, 217–221.
Tian, ​​S., Cao, LH, Miao, MS, Bai, M., 2017b. Un nuevo método para la evaluación de modelos animales utilizados en la Medicina Tradicional China basado en las características clínicas de la medicina china y occidental. Farmacología y Clínicas de Materia Médica China 33, 165–169.
Wang, R., Fu, Q., Li, LF, Ma, SP, 2010. Efecto de la cápsula de gengnianan en la ovariectomía de ratones hembra. Investigación farmacéutica y clínica 18, 247–249.
Wang, T., Miao, MS, Li, Y., Li, M., Zhang, Y., Tian, ​​S., 2016. Efecto de los flavonoides Monomorium en la morfología del modelo de ratones con depresión perimenopáusica. Revista farmacéutica saudita 24, 322–328.
Wang, WJ, Yu, J., Li, DJ, Bu, SZ, 1999. Observación de los cambios en los niveles de ER, IL-2 y TNF esplénicos en ratas hembra envejecidas. Chin J Endocrinol Metab 15, 225–228.
Xie, CX, 2003. Se usó una cápsula georgiana para tratar 100 casos de síndrome climatérico. Hunan Revista de medicina tradicional china 6, 44.
Xun, CF, Wang, LZ, 2017. Correlación entre los niveles de estrógeno y los cambios de los marcadores metabólicos óseos en mujeres perimenopáusicas. Cuidado de la salud maternoinfantil de China 32, 1229–1232.
Yu, LL, Kong, DM, Zhang, YP, 2010. Estudio experimental sobre los efectos de la cápsula de gengnianyi en la función de incremento en ratas ovariectomizadas. Lishizhen medicina e investigación médica material 21, 3131–3132.
Zhang, Y., Miao, MS, 2011. Estudio de la medicina tradicional china comúnmente utilizada para tonificar el yang renal en el tratamiento del síndrome climatérico. Diario chino de medicina china 26, 1084–1087.
Zhao, W., Pan, YN, 2013. Avance en la investigación de la actividad farmacológica defeniletanoideglucósidosen cistanche. Medicina tradicional de Asia y el Pacífico 9, 77–79.
Zhang, YP, Wang, XX, 2001. Efecto de la píldora de kunningan en el sistema endocrino reproductivo.inmunefunción en pacientesconel síndrome climatérico. ITCM 18, 52–54.
Zhang, XP, Liu, ZP, Xiang, Q., Wang, W., Zhang, X., Li, N., 2010. Estudio comparativo de dos modelos animales de sofocos de mujeres menopáusicas. Investigación en salud 39, 110–111.