Estudio de Separación e Inmunocompetencia del Extracto Acuoso de Polisacárido de Cistanche Tubulosa

para más información:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1, LI Yang1, YAO Jun1, YUAN Jie2

(1. Escuela de Farmacia, Universidad Médica de Xinjiang, Urumqi 830011, China;2. Collage de Houbo, Universidad Médica de Xinjiang, Xinjiang Klamayi 834000, China）

RESUMEN OBJETIVO:Para aislar el extracto acuoso depolisacáridos de Cistanche tubulosay para investigar su inmunocompetencia in vitro. MÉTODOS: Se utilizó resina de adsorción macroporosa AB{{{{30}}}} para decolorar el polisacárido de C. tubulosa. El proceso de decoloración se optimizó mediante una prueba ortogonal con la tasa de retención y la tasa de decoloración del polisacárido como puntuación integral y usando la tasa de adsorción, el tiempo de decoloración y la concentración de la muestra como factores. Se realizaron las pruebas de verificación. Se usó la columna de intercambio iónico DEAE-650M para separar el extracto acuoso del polisacárido de C. tubulosa decolorado. El ensayo CCK-8 se utilizó para detectar los efectos de diferentes concentraciones de polisacárido (6,25-100 ug/mL) antes y después del aislamiento en la tasa de proliferación del macrófago de ratón RAW264.7. Se adoptaron el método de Griess y el ensayo ELISA para detectar los efectos de concentraciones bajas, medias y altas de polisacáridos (12,5, 25, 50 ug/mL) en la liberación de NO, IL-6 y TNF- en células RAW264.7 inducidas por LPS. RESULTADOS: En el proceso de decoloración óptimo de la resina de adsorción macroporosa AB-8, el caudal de adsorción fue de 1,2 BV/h, el tiempo de decoloración fue de 9 h y la concentración de la muestra fue de 25 mg/mL. Las puntuaciones integrales de 3 veces de las pruebas de verificación fueron 63,43%, 63,29% y 63,34%, respectivamente, con un promedio de 63,35% (RSD=0,11%, n=3). Un polisacárido neutro (CTZ) y 5 polisacáridos ácidos (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) se aislaron del polisacárido de C. cistanche, los contenidos fueron 299,2,168.0,123,2,121,6,54,4, 11,2 mg/g. En comparación con el grupo de control, 6.25-100 ug/mL CTZ (excepto 6,25 μ g/mL), CT2, CT4, CT5 y 6,25 μ g/mL CTC (el polisacárido antes de la separación) podría aumentar significativamente la tasa de proliferación de células RAW264.7（P＜{{80}}.05）, mientras que 6.25-100 ug/mL CT1,CT3 y 50 ug/mL CTC podrían disminuir la tasa de proliferación de RAW264. 7 celdas (P<0.05). en="" comparación="" con="" el="" grupo="" de="" lps,="" la="" liberación="" de="" no="" disminuyó="" significativamente="" en="" los="" grupos="" de="" concentración="" baja,="" media="" y="" alta="" de="" ctc,="" ct2,="" ct3="" y="" ct5,="" grupo="" de="" baja="" concentración="" de="" ctz=""><0.05), mientras="" que="" aumentó="" significativamente="" en="" los="" grupos="" de="" alta="" concentración="" de="" ct1="" y="" ct4=""><0,05). la="" liberación="" de="" il-6="" (excepto="" para="" el="" grupo="" de="" alta="" concentración="" de="" ct1="" y="" el="" grupo="" de="" baja="" concentración="" de="" ct5)="" y="" tnf-="" (excepto="" para="" el="" grupo="" de="" concentración="" media="" de="" ct1)="" se="" redujo="" significativamente="" en="" los="" grupos="" de="" concentración="" baja,="" media="" y="" alta=""><0,05). ）.="" conclusiones:="" la="" tecnología="" de="" decoloración="" optimizada="" de="" la="" resina="" de="" adsorción="" macroporosa="" es="" estable="" y="" factible="" en="" el="" estudio.="" un="" polisacárido="" neutro="" y="" 5="" polisacáridos="" ácidos="" se="" pueden="" aislar="" del="" extracto="" acuoso="" de="" polisacáridos="" de="" c.="" tubulosa,="" entre="" los="" cuales="" el="" polisacárido="" ct2="" tiene="" la="" mayor="" capacidad="">

PALABRAS CLAVE:polisacárido de Cistanche tubulosa; Decoloración; Separación; Inmunocompetencia

Cistanche tubulosaes un tallo seco y carnoso con hojas escamosas deCistanche tubulosa (Schenk) Wightde la familia de las Lidanáceas. Estudios modernos han demostrado que Cistanche Tubula contiene glucósidos de alcohol fenetílico, glucósidos iridoides, lignanos, polisacáridos, alcaloides y otras sustancias biológicamente activas, que tienen propiedades afrodisíacas, laxantes, protectoras del hígado y antienvejecimiento. , Inmunidad mejorada antifatiga y efectos nootrópicos [1-4], se pueden usar para el tratamiento clínico de la deficiencia de riñón yang, deficiencia de esencia y sangre, impotencia e infertilidad, debilidad de cintura y rodillas, debilidad de músculos y huesos, intestinos secos y estreñimiento [5].

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El extracto acuoso de laPolisacárido de Cistanche tubulosaes de color amarillo pardusco. El experimento anterior de nuestro grupo de investigación encontró que además de laCistanche tubulosa polisacárido, el extracto acuoso también contiene componentes no objetivo, como pigmentos y proteínas solubles en agua. Esto contribuye a la separación y purificación de los polisacáridos. La investigación de la actividad biológica ha causado grandes dificultades. El tratamiento tradicional de decoloración con solventes orgánicos destruirá la estructura química del componente objetivo en el extracto crudo y reducirá la actividad farmacológica de la persona y la introducción de ingredientes nocivos para el cuerpo humano [6]. La resina de adsorción macroporosa es un material común para la decoloración de polisacáridos en extractos de medicina china. Es un material de adsorción de polímero rentable con propiedades físicas y químicas estables. Puede ser objetivo por su rendimiento de adsorción y tamizado selectivo para componentes de pigmento. Para eliminar los pigmentos en los extractos de la medicina tradicional china, además, se puede regenerar mediante decapado y lavado alcalino, por lo que es muy utilizado [7]. Este estudio pretende utilizar resina de adsorción macroporosa para decolorar el extracto acuoso del polisacárido Cistanche Tubula y utilizar un experimento ortogonal para optimizar las condiciones de decoloración; después de la decoloración del extracto, según la diferente naturaleza del grupo transportado por el polisacárido, se planea usar El método de cromatografía en columna de intercambio iónico separa aún más los componentes de polisacárido neutro y ácido en el polisacárido deCistanche tubulosa.

Los estudios han demostrado queplanta de cistancheLos polisacáridos tienen efectos inmunomoduladores y son inmunomoduladores naturales que pueden activar el sistema del complemento y las células inmunitarias, como los linfocitos T/B, los macrófagos, las células asesinas naturales (NK), y también pueden promover una variedad de liberación de citoquinas y promover la producción de anticuerpos. , etc [8-11]. El lipopolisacárido (LPS) puede activar la vía de señales inflamatorias de los macrófagos, inducir el óxido nítrico (NO) y citocinas proinflamatorias como la interleucina 6 (IL-6) y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-). Síntesis y liberación, desencadenando así una serie de reacciones inflamatorias en el organismo [12]. Este estudio tiene la intención de establecer un modelo de inflamación de macrófagos RAW264.7 de ratón inducido por LPS, a partir de los efectos del polisacárido Cistanche Tubula sobre la proliferación de macrófagos, la secreción de factores inflamatorios y la producción de NO, y la evaluación preliminar de su efecto sobre la actividad inmune del cuerpo. Su objetivo es proporcionar una base teórica para el estudio en profundidad de la base de la sustancia activa antiinflamatoria deCistanche tubulosapolisacárido y el desarrollo de sus recursos de polisacáridos.

Estudios preliminares han encontrado que cuando los polisacáridos en Cistanche cistanche se extraen con agua, más sustancias solubles en agua se disuelven juntas, lo que afecta la pureza de lacistanche polisacáridos de cistanche. Por lo tanto, una mayor separación y purificación de ellos puede sentar las bases para el estudio de la actividad biológica y la base del material polisacárido. El método de resina de adsorción macroporosa es un método de decoloración de uso común [17-19]. Dado que todavía no está claro acerca de la composición del pigmento enCistanche tubulosa, por lo que el grupo de investigación utilizó experimentos de adsorción estática para seleccionar la resina de adsorción macroporosa AB-8 más adecuada a partir de resinas de adsorción macroporosa de diferentes polaridades. El polisacárido de Cistanche deserticola tiene una buena capacidad de retención. Con el fin de lograr un mejor efecto de decoloración, esta investigación se basa en la investigación anterior y utilizó experimentos ortogonales para determinar el proceso de decoloración (lavado). Se han optimizado el caudal de desorción, el tiempo de decoloración y la concentración de masa de la muestra. Como resultado, el método de decoloración óptimo para el polisacárido de Cistanche tubulosa fue una velocidad de flujo de elución de 1,2 BV/h, un tiempo de decoloración de 9 h y una concentración de masa de muestra de 25 mg/mL. Los resultados del experimento de verificación muestran que el método de decoloración es factible.

La pureza y el tipo de polisacáridos naturales son factores importantes que afectan su actividad. Por lo tanto, la investigación relevante sobre los métodos de aislamiento y purificación de polisacáridos sigue siendo el foco del trabajo de investigación de polisacáridos activos naturales. Los métodos comúnmente utilizados para la separación de polisacáridos incluyen la precipitación, la cromatografía en gel, la cromatografía de intercambio aniónico, la cromatografía en columna de resina macroporosa y la ultrafiltración [20]. Debido a las diferentes composiciones de los monosacáridos, los polisacáridos tienen diferentes propiedades de carga. Se pueden dividir en polisacáridos neutros y polisacáridos ácidos. Los polisacáridos neutros son polímeros compuestos por dos o más monómeros diferentes a base de azúcar que no contienen ácidos orgánicos. Los polisacáridos ácidos son más complejos que los polisacáridos neutros en términos de composición y estructura, excepto que contienen más de dos monómeros a base de azúcar. , También contiene ácido urónico mono Cuerpo [21]. La cromatografía en columna de intercambio aniónico utiliza la diferencia de carga de los polisacáridos para separar los polisacáridos neutros de los polisacáridos ácidos [22]. Por esta razón, este estudio utilizó una columna de cromatografía de columna de intercambio iónico DEAE-650M para separar los polisacáridos de Cistanche Tubula, y se separó un total de 1 polisacárido neutro y 5 polisacáridos ácidos. Los macrófagos son células inmunocompetentes que pueden regular la inmunidad engullendo y matando microorganismos patógenos. Los estudios han demostrado que cuando el cuerpo humano es estimulado por un daño patológico o mecánico, una intervención farmacológica puede activar los macrófagos para mejorar la capacidad fagocítica de los macrófagos inducida por LPS, inhibiendo así la producción de NO y una serie de células inflamatorias como la IL{{ 9}} y la secreción del factor TNF, protegiendo así al huésped de los patógenos [23]. Con este fin, este estudio probó los efectos de varios polisacáridos de Cistanche tubulosa sobre la tasa de proliferación de células RAW264.7, así como los efectos sobre los macrófagos inducidos por LPS para liberar NO, IL-6 y TNF-. Como resultado, dentro del rango de concentración de masa de 12,5, 25 y 50 ug/mL, no solo promovió la proliferación de células RAW264.7 sino que también inhibió significativamente la proliferación de células RAW264.7.

lospolisacárido de Cistanche tubulosaen células RAW264.7 inducidas por LPS para liberar NO, IL-6 y TNF- son CT2. Estudios relevantes han demostrado que la composición de monosacáridos y el peso molecular de los polisacáridos afectarán suinmunomoduladoractividad. Los monosacáridos como la galactosa, la arabinosa, la manosa y la glucosa se correlacionan positivamente con la actividad inmunitaria de los polisacáridos [24]. Los polisacáridos con pesos moleculares más grandes pueden contener una mayor estructura de nudos Múltiples altamente repetitivos, pueden interconectar los receptores de la superficie de la membrana plasmática multidireccionalmente, y específicamentemejorar el inmunomoduladorefecto [25]. Por lo tanto, la composición de monosacáridos del polisacárido ácido CT2 en este estudio puede contener monosacáridos especiales o monosacáridos múltiples que están positivamente relacionados con la actividad inmunológica, y el peso molecular puede ser mayor que los polisacáridos neutros y otros polisacáridos ácidos, pero se necesita más investigación para confirmar . En resumen, el proceso de decoloración de resina de adsorción macroporosa optimizado en esta investigación es estable y factible; Del extracto acuoso de Cistanche cistanche cistanche se pueden separar 1 polisacárido neutro y 5 polisacáridos ácidos, entre los que destaca la actividad inmunológica del polisacárido ácido CT2 Stronger. Este estudio puede sentar las bases experimentales para el desarrollo y la utilización de los polisacáridos Cistanche Tubula.