Liang Qingsong 1,2,4, Pan Yingjie 2,4, Chen Ziying 2,4, Zhang Ying 1,3, Wu Menghua 1,3, Cao Hui 1,3, Ma Zhiguo 1,3*

(1. Escuela de Farmacia, Universidad de Jinan, Guangzhou 510632, Guangdong; 2. Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd., Foshan 528244, Guangdong; 3. Centro de Investigación de Medicina Tradicional China Lingnan, Universidad de Jinan, Guangzhou 510632, Guangdong; 4. Laboratorio clave de la empresa de gránulos de fórmula de medicina tradicional china de Guangdong, Foshan 528244, Guangdong)

Abstracto: Objetivo Preparar la decocción estándar de cistanche deserticola y proporcionar un método confiable para su control de calidad. Métodos De acuerdo con los requisitos de preparación de la decocción estándar, se prepararon 14 lotes de la decocción estándar de Cistanche deserticola. Los contenidos de echinaside y piloside en la decocción estándar se determinaron por HPLC, se calculó la tasa de transferencia, se midieron la tasa de extracción y el valor de pH de la decocción, y se estableció la huella digital UPLC de la decocción estándar de Cistanche deserticola. Resultados Las tasas de transferencia promedio de echinaside y piloside en 14 lotes de la decocción estándar de Cistanche deserticola fueron 22,99 por ciento y 17,{{20}}9 por ciento, respectivamente. La tasa de extracción varió de 25,1 por ciento a 56,6 por ciento, y el valor de pH varió de 4,30 a 5,15. Hay 6 picos comunes en la huella dactilar y, entre ellos, el pico n.° 1 se identifica como glucósido de equinácea, el pico n.° 3 se identifica como angiocianina A, el pico n.° 4 se identifica como pilósido y el pico n.° 5 el pico se identifica como isopilósido. Se evaluó la similitud de 14 lotes de la decocción estándar de Cistanche deserticola, y la similitud varió de 0,789 a 0,999. Conclusión La preparación de la decocción estándar de Cistanche deserticola está estandarizada, con buena homogeneidad general, calidad controlable, buena precisión, estabilidad y repetibilidad del método de determinación, y alta similitud de huellas dactilares, lo que puede proporcionar una referencia para el control de calidad de la decocción estándar de Cistanche deserticola .

Palabras clave: Cistanche desertica; decocción estándar;equinacósido; pilósido; Huella dactilar; Evaluación de la calidad

Cistanche deserticola es un tallo seco, escamoso y carnoso del género Cistanche en Orobaceae o Cistanche tubulosa ma. Tiene los efectos de tonificar el yang del riñón, beneficiar la esencia de la sangre, humedecer los intestinos y aliviar el estreñimiento. Es ampliamente utilizado en la impotencia. , infertilidad, sensibilidad en la cintura y las rodillas, debilidad muscular y ósea, y sequedad intestinal y estreñimiento".

Beneficios para la salud del polvo de cistanche: riñón tonificante

Haga clic aquí para ver los productos Cistanche para la enfermedad renal

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Contiene principalmente glucósidos de feniletanoide, glucósidos de alcohol bencílico, iridoides y sus glucósidos, lignina y sus glucósidos y otros compuestos. Entre ellos,glucósidos feniletanoidesse consideran los principales componentes efectivos de Cistanche deserticola ma.

El glucósido de feniletanol es el principal componente activo de Cistanche deserticola

La decocción estándar de rebanadas de medicina tradicional china (es decir, la decocción estándar) es una decocción única de rebanadas de medicina tradicional china preparada a través de procesos estandarizados, guiada por la teoría de la medicina tradicional china y basada en la aplicación clínica, con referencia a los métodos de extracción modernos. Debido a que la decocción estándar no tiene interferencia de excipientes y no se somete a un proceso de secado, es consistente con la decocción tradicional para uso clínico y es fácil probar varias concentraciones ideales a través de la preparación de rebanadas o extractos. Por lo tanto, la decocción estándar de rebanadas de la medicina tradicional china, como estándar de calidad para las preparaciones clásicas de Ming Fang y referencia estándar para medir las partículas de la fórmula de la medicina tradicional china, es actualmente una forma eficaz de garantizar la seguridad, la eficacia y la estabilidad de la medicina tradicional china. para lograr consistencia en la eficacia clínica. Actualmente, no hay informes de literatura sobre el estudio de la decocción estándar de piezas de decocción de Cistanche deserticola.Este experimento preparó la decocción estándar correspondiente para 14 lotes de Cistanche deserticola y llevó a cabo una investigación sobre la decocción estándar para Cistanche deserticola, con miras a establecer muestras centrales de marcadores de calidad para Cistanche deserticola, proporcionando una base experimental para el desarrollo de gránulos de fórmula de Cistanche deserticola. .

Cistanche en polvo

1.Aparatos y Materiales

1.1 Instrumentos y equipos

cromatografía líquida de alta resolución Waterse2695 (Waters); balanza ME204E 1/10000 (Mettler Toledo); escala XP26 millonésima (Mettler Toledo); WatersAcquire UPLC Ultra High-Performance Liquid Chromatography (WATSCH); Limpiador ultrasónico KQ-500E (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.).

1.2 Reactivos y materiales

equinacósidosustancia de referencia (número de lote: S-003-190403),antocianinaUna sustancia de referencia (número de lote: G-066-181216),Acteósidosustancia de referencia (número de lote: M-011-181106), yisopilósidosustancia de referencia (número de lote: Y{{0}}) se compraron todos de Chengdu Ruifensi Biotechnology Co., Ltd., con una pureza de más del 98,0 por ciento. ácido fórmico cromatográfico puro, Tianjin Kemio Chemical Reagent Co., Ltd; metanol puro cromatográfico, Merck Co., Ltd; El agua experimental es un sistema de agua ultrapura de laboratorio, Merck Co., Ltd; Otros reactivos son analíticos puros. En este estudio, se recolectaron del mercado un total de 14 lotes de piezas preparadas de Cistanche deserticola y el profesor Ma Zhiguo de la Universidad de Jinan las identificó como tallos secos, escamosos y carnosos del género Cistanche deserticola o Cistanche tubulosa, una planta del género Cistanche en la familia Orobaceae. Muestra de información (ver Tabla 1).

Equinósido, el principal componente químico de Cistanche deserticola

2 .Métodos y Resultados

2.1 Preparación de la decocción estándar y la solución de prueba

2.1.1 Preparación de la decocción estándar de Cistanche deserticola:

De acuerdo con el Reglamento sobre la gestión de la sala de decocción de la medicina tradicional china en las instituciones médicas, los requisitos técnicos para el control de calidad y la formulación estándar de los gránulos de las fórmulas de la medicina tradicional china y la sopa estándar de la medicina tradicional china, tome 100 g de las rebanadas preparadas de Cistanche deserticola , colóquelos en una olla de cerámica eléctrica, agregue agua para cocer dos veces, agregue 9 veces el agua por primera vez, remoje durante 30 minutos, caliente y hierva con Wuhuo (500 W), manténgalos ligeramente hirviendo a fuego suave (200 W), continúe para decocer durante 60 minutos, y filtrar el líquido decocido a través de un tamiz de malla 350 mientras está caliente. Agregue 7 veces la cantidad de agua por segunda vez, caliéntelo a fuego tibio y déjelo hervir. Cambie a fuego lento y manténgalo ligeramente hirviendo. Continúe cocinando durante 40 minutos. Filtre la decocción con un tamiz de malla 350 mientras esté caliente y combine las dos decocciones. Transfiera la decocción a un matraz de fondo redondo de 2000 ml, use un evaporador rotatorio para reducir la presión y concéntrese a baja temperatura (temperatura: 60 grados; grado de vacío: - 0.10 MPa) hasta un volumen constante de 500 ml y agite bien. .

Tabla 1 Información de muestra de Herba Cistanche

2.1.2 Preparación de la solución de prueba de piezas de decocción de Cistanche deserticola:

Tome aproximadamente 1 g del polvo de Cistanche deserticola (tamizado a través de un cuarto tamiz), péselo con precisión, colóquelo en un matraz aforado marrón de 100 ml, agregue con precisión 50 ml de metanol al 50 %, cierre la tapa y agite bien. , pese el peso, remoje durante 30 minutos, tratamiento ultrasónico durante 40 minutos (potencia: 250 W, frecuencia: 35 kHz), enfríelo, pese nuevamente el peso, agregue 50 por ciento de metanol para compensar el peso perdido, agite bien, déjelo reposar, tome el sobrenadante, y diluirlo con filtración por membrana microporosa 0,22 μ M, obtenido.

2.1.3 Preparación de la solución de prueba de la decocción estándar de Cistanche deserticola:

Tome la sopa de cistanche estándar, agite bien, mida con precisión de 5 ml a 50 ml en un matraz volumétrico, agregue etanol anhidro para diluir a escala, agite bien y diluya con filtración de membrana microporosa de 0,22 μ M, obtenida.

2.1.4 Preparación de la solución de referencia:

Tome una cantidad adecuada de muestra de control de glucósido de equinácea y muestra de control junto a la piscina, péselas con precisión, colóquelas en un matraz volumétrico marrón de 10 ml, disuélvalas con 50 por ciento de metanol y diluya hasta la escala. agitar bien y preparar una solución con concentraciones de 0,0200 y 0,02100 mg · mL - 1 para los dos componentes anteriores, respectivamente, para obtener una solución de control mixta.

Acteoside, el principal componente químico de Cistanche deserticola

2.2 Contenido de los componentes equinósido y pilósido

El método de determinación del contenido de Cistanche deserticola en el Volumen I de la Farmacopea China (edición 2015) se realizó con la columna cromatográfica Agilent ZORBAXB-C18 (4,6 × 150mm, 5 μ m) Con metanol como fase móvil A y 0.1 por ciento de solución de ácido fórmico como fase móvil B, se realizó una elución en gradiente (0 a 17 min, 26,5 por ciento A; 17 a 20 min, 26,5 por ciento → 29,5 por ciento A; 20 a 27 min, 29,5 por ciento A); Caudal: 1,0 ml · min-1; Temperatura de la columna: 30 grados; Longitud de onda de detección: 330 nm; El número de placas teóricas calculadas en base al pico de equinácea no debe ser inferior a 3000. Se determinaron los contenidos de glucósido y poolside de equinácea en las piezas preparadas de Cistanche deserticola y su decocción estándar, y los resultados se muestran en la Tabla 2.

2.3 Determinación de los parámetros característicos de evaluación de la decocción estándar de piezas de decocción de Cistanche deserticola

Tabla 2 Resultados del análisis de calidad de Herba Cistanche y su decocción estándar (n=2)

2.3.1 Rendimiento de pasta:

Agite bien la Cistanche deserticola estándar preparada bajo 2.1.1, succione con precisión 100 mL, colóquela en un plato de evaporación de peso constante (peso: m1), evapore en un baño de agua, séquela en un horno a 105 grados durante 3 h, tome colóquelo en una secadora para que se enfríe y se seque durante 30 minutos, péselo, registre su peso como m2 y el peso del material medicinal como M. De acuerdo con la fórmula, "Rendimiento de crema=(m2 m1 )" × 500/(100 × M) × Calcule la tasa de pegado por "100 por ciento" y tome el valor promedio después de 2 copias paralelas de cada muestra. Resultados (ver Tabla 2).

2.3.2 Tasa de transferencia:

Sobre la base de los resultados de medición anteriores del contenido de glucósidos y pilósidos de equinácea, se calcularon las tasas de transferencia de glucósidos y pilósidos de equinácea de acuerdo con la fórmula de tasa de transferencia (tasa de transferencia=calidad de los componentes indicadores en la decocción/calidad estándar de Cistanche deserticola). de componentes indicadores en piezas de decocción × 100 por ciento), 2 copias paralelas para cada muestra. Resultados (ver Tabla 2).

2.3.3 Valor pH:

Agite la decocción estándar de Cistanche deserticola preparada según 2.1.1 de manera uniforme, tome una cantidad adecuada, mida el valor de pH con un medidor de pH y tome un valor promedio. Cada muestra se divide en dos partes en paralelo. Resultados (ver Tabla 2).

2.4 Establecimiento de la huella UPLC de la decocción estándar de Cistanche deserticola

2.4.1 Condiciones cromatográficas:

Utilizando una columna WatersHSST3 (2,1 × 100mm, 1,8 μ m); Usando metanol como fase móvil A y 0.1 por ciento de solución de ácido fórmico como fase móvil B, se realizó la elución en gradiente (0 a 4 min, 34 por ciento A; 4 a 10 min, 34 por ciento → 40 por ciento A, 10 a 15 min, 40 por ciento → 46 por ciento A, 15 a 17 min, 46 por ciento → 34 por ciento A, 17 a 20 min, 34 por ciento A); Caudal: 0,3 ml · min-1; Temperatura de la columna: 30 grados; Longitud de onda de detección: 330 nm; Volumen de inyección de solución de referencia 1 μ 50. Cantidad de inyección de solución de prueba 0,4 μ L.

2.4.2 Preparación de la solución de referencia:

Tome una cantidad apropiada de las sustancias de control Echinacetin, Angioside A, Piloside e Isopiloside, péselas con precisión, colóquelas en un matraz volumétrico marrón de 10mL, disuélvalas con 50 por ciento de metanol, diluya a la balanza, agitar bien y preparar soluciones con las concentraciones de los cuatro componentes anteriores de 0.196, 0.234, 0.228 y 0.213 mg · mL - 1, respectivamente, para obtener una solución de control mixto.

2.4.3 La preparación de la solución de prueba es la misma que en el Punto 2.1.3.

2.4.4 Prueba de precisión:

Tome la solución de prueba del mismo lote de decocción estándar de Cistanche deserticola (GH{{0}}) e inyéctela seis veces continuamente de acuerdo con las condiciones cromatográficas en 2.4.1. Utilizando el lado de la piscina (pico 4) como pico de referencia, calcule que la RSD del tiempo de retención relativo de cada pico común es inferior al 0,2 por ciento, y la RSD del área relativa del pico es inferior al 5,0 por ciento, indicando que el instrumento tiene buena precisión.

Estudio Experimental sobre Cistanche deserticola

2.4.5 Prueba de estabilidad:

Tome la solución de prueba del mismo lote de decocción estándar de Cistanche deserticola (GH{{0}}) e inyéctela en 0, 2, 4, 8, 12, 16, 20, 24 y 28 horas después de la preparación según las condiciones cromatográficas de 2.4.1. Utilizando el lado de la piscina (pico 4) como pico de referencia, calcule que la RSD del tiempo de retención relativo de cada pico común es inferior al 0,3 por ciento, y la RSD del área relativa del pico es inferior al 4,8 por ciento, lo que indica que la solución de prueba tiene buena estabilidad dentro de las 28 horas.

2.4.6 Prueba de repetibilidad:

Tomar el mismo lote de la decocción estándar de Cistanche deserticola (GH{{0}}), preparar 6 partes de la solución en paralelo según el método del Punto 2.1.3, analizar según las condiciones cromatográficas del Punto 2.4. 1, registre el cromatograma y calcule que la RSD del tiempo de retención relativo de cada pico común es inferior al 0,2 por ciento, y la RSD del área relativa del pico es inferior al 3,8 por ciento. Los resultados muestran que la repetibilidad del método es buena.

2.4.7 Establecimiento de la huella dactilar:

Prepare la solución de prueba de 14 lotes de decocción estándar de Cistanche deserticola de acuerdo con el punto 2.1.3 e inyecte la muestra para determinación de acuerdo con las condiciones cromatográficas del punto 2.4.1 para obtener la huella UPLC de 14 lotes de decocción estándar de Cistanche deserticola. Los cromatogramas de huellas dactilares UPLC de 14 lotes de solución de prueba se importaron al software "Sistema de evaluación de similitud de huellas dactilares cromatográficas de medicina china" (Versión 2{{10}}12), usando SI como el cromatograma de referencia, la coincidencia de picos fue se realizó con un ancho de tiempo de 0.1, y se usó el método de la mediana para generar la huella digital de referencia R de la sopa estándar Cistanche deserticola (ver Figura 1). Al mismo tiempo, se calculó la similitud y se obtuvieron los resultados (ver Tabla 3). En el mapa coincidente, se puede ver que hay 6 picos comunes en la decocción estándar de Cistanche deserticola. De acuerdo con el área del pico y el tiempo de retención de los seis picos comunes, el tiempo de retención relativo (número de picos (tiempo de retención relativo promedio) se calculó como pico 1 (0.434), pico 2 (0 .643), pico 3 ({{40}}.919), pico 4 (1.000), pico 5 (1.635) y pico 6 (1.858), respectivamente; pico relativo áreas, [número de pico (área de pico relativa promedio)] fueron pico 1 (6,340), pico 2 (0,890), pico 3 (0,295), pico 4 ( 1.000), pico 5 (0,674) y pico 6 (0,0190), respectivamente. Entre ellos, el pico 1 se identificó como glucósido de equinácea, el pico 3 se identificó como antocianina A, el pico 4 se identificó como junto a la piscina, y el pico 5 se identificó como isopilósido; el análisis de similitud mostró que la similitud entre los 14 lotes de decocción estándar y el mapa de control estaba entre 0.789 y 0.999 (ver Figura 2).

Tabla 3    14 Similitud de la huella digital UPLC del lote de decocción estándar de Cistanche deserticola

Figura 1 Cromatogramas UPLC de solución de referencia mixta (A), decocción estándar de cistanche deserticola (B) y decocción estándar de cistanche tubulosa (C)

1. Equinósido; 3. Antocianina A; 4. Glucósidos de Physalis; 5. Isopilósido

Figura 2    14 Huella digital UPLC del lote de decocción estándar de Cistanche deserticola

3 .Discusión

3.1 Preparación de la decocción estándar

Como estándar de calidad, la decocción estándar de rebanadas de medicina tradicional china estandariza diferentes formas de medicación clínica, lo que actualmente es uno de los focos de investigación en el campo de la medicina tradicional china. La preparación de la decocción estándar requiere que la fuente de las piezas de la decocción sea auténtica y representativa. Por lo tanto, la Farmacopea China incluye 9 lotes de Cistanche deserticola preparada y 5 lotes de Cistanche deserticola preparada. Antes de la preparación, se probaron los cortes preparados y todos cumplieron con los requisitos de la edición 2015 de la Farmacopea China.

3.2 Investigación de la cantidad de inyección de la solución de prueba

En la prueba de determinación del contenido de los componentes del índice en la decocción estándar, la cantidad de inyección de muestra del artículo de prueba fue de 10 μ En L, no hubo pico de poolside en el cromatograma de la decocción estándar de Cistanche deserticola, excepto por glucósido de equinácea. Aunque tanto el glucósido de equinácea como el poolside aparecieron en el cromatograma de decocción estándar de Cistanche deserticola, las áreas de los picos tanto del glucósido de echinacea como del poolside fueron pequeñas, y se encontró que apareció un pico alto en la posición del pico del solvente en el cromatograma del artículo de prueba. El motivo del análisis es que el volumen constante de la muestra de prueba es etanol anhidro sin agua, y es inconsistente con el solvente de preparación de la muestra de control, 50 por ciento de metanol, lo que resulta en un efecto solvente significativo, lo que no genera retención de equinácea. y junto a la piscina. Algunas muestras tienen picos de equinácea y proporcionan debido a su contenido relativamente alto y retención parcial. Ajuste respectivamente la cantidad de inyección del artículo de prueba a 5 y 3 μ L. Investigue el efecto de eliminación del efecto del solvente y el resultado muestra que la cantidad de inyección de muestra del artículo de prueba es de 3 μ A L, el efecto del solvente se puede eliminar y el pico de equinácea puede ser normal, por lo que la cantidad de inyección de muestra del artículo de prueba se establece en 3 μ L. De manera similar, el efecto solvente generado durante la determinación de la huella dactilar de la decocción estándar se eliminó investigando la cantidad de inyección de la solución de prueba, y se determinó que la cantidad de inyección óptima era de 0,4 μ L.

3.3 Razones de la baja similitud de la huella dactilar de la decocción estándar de Cistanche deserticola

La similitud de las huellas dactilares de 14 lotes de la decocción estándar de Cistanche deserticola y Cistanche tubulosa osciló entre 0,789 y 0,999. El lote de similitud más bajo fue RCR-9 con una sopa estándar de 0.789. La similitud de otros lotes está por encima de 0.98. En comparación con otras muestras, la similitud general de la sopa estándar RCR-9 no es alta. Del cromatograma de huellas dactilares de la sopa estándar RCR-9, se puede ver que tiene dos picos evidentes en comparación con otras muestras en tiempos de retención de 12,278 y 15,466. Debido a los complejos componentes químicos de la medicina tradicional china, las diferencias en el entorno de crecimiento, el tiempo de cosecha, los métodos de procesamiento, etc. conducen a diferentes acumulaciones de material y contenido de componentes de las rebanadas preparadas. La poca similitud de la sopa estándar RCR-9 puede deberse a varios factores que hacen que la acumulación de material de este lote de rebanadas preparadas sea diferente de otros lotes.

3.4 Control de calidad de la decocción estándar de Cistanche deserticola

Este experimento analizó la tasa de extracción, el valor de pH y las tasas de transferencia de echinacósido y junto a la piscina de 14 lotes de decocción estándar de cistanche deserticola. La tasa de extracción de 14 lotes de la decocción estándar de Cistanche deserticola osciló entre el 25,1 y el 56,6 por ciento. Debido al bajo contenido de azúcar de las piezas preparadas de Cistanche deserticola en comparación con las piezas preparadas de Cistanche deserticola, la tasa de extracción de la decocción estándar de Cistanche deserticola deserticola fue menor que la de la decocción estándar de Cistanche deserticola. El valor de pH de 14 lotes de la decocción estándar de Cistanche deserticola osciló entre 4,30 y 5,15, lo que indica que el valor de pH de la decocción estándar de Cistanche deserticola era relativamente estable. La tasa de transferencia promedio de Echinacetin en 14 lotes de Cistanche deserticola y decocción estándar de Cistanche deserticola fue de 22,99 por ciento, y la tasa de transferencia promedio junto a la piscina fue de 17,09 por ciento. Entre ellos, la tasa de transferencia de componentes índice en la decocción estándar preparada con piezas de decocción de Cistanche deserticola fue relativamente estable, mientras que la tasa de transferencia de componentes índice en la decocción estándar preparada con piezas de decocción de Cistanche deserticola fue relativamente grande entre lotes.

4.Conclusión

En este estudio, se utilizó el método UPLC para establecer la huella digital de la decocción estándar de Cistanche deserticola, que puede reflejar y evaluar de manera integral la calidad interna de la decocción estándar de Cistanche deserticola. Los resultados de la tasa de extracción, la tasa de transferencia del componente índice y el análisis de huellas dactilares de la decocción estándar de cistanche mostraron que la homogeneidad general de los 14 lotes preparados de la decocción estándar de cistanche fue buena, el método de preparación fue consistente con la práctica clínica y la calidad fue buena. controlable. Esto ayuda a estandarizar las diferentes formas de medicación de cistanche, garantizar la consistencia de la eficacia clínica del fármaco y resolver las diferencias de calidad causadas por los diferentes procesos de producción y métodos de preparación.

Superman hierbas cistanche

referencia

〔1〕Editado por la Comisión Nacional de Farmacopea. Farmacopea china (Parte I) [S]. Beijing: Prensa de ciencia y tecnología farmacéutica de China, 2015135

〔2〕Li Chenghua, Liu Jinghui, Xu Zhenxia, ​​et al. Determinación simultánea de cuatro glucósidos de feniletanol en Cistanche tubulosa por RP-HPLC. Revista de Análisis Farmacéutico, 2010, 30 (06): 1003-1006

〔3〕Ding Yan, Zhang Kaimei, Cang Xiaoxin, et al. Progreso de la investigación sobre componentes químicos y actividades biológicas de Cistanche L. Journal of Dalian University of Technology, 2016, 35 (06): 395-402

〔4〕Gao Yan, Guo Linong, Ma Shuangcheng, et al. Estudio comparativo de tres especies de cistanche deserticola basado en el mapa de características UPLC y contenido de componentes principales ［ J ］. Revista china de medicina tradicional china, 2019, 44 (17): 3749-3757

〔5〕Chen Shilin, Liu An, Li Qi, et al. Estrategia de investigación para la decocción estándar de rebanadas de medicina tradicional china ［ J ］. Revista china de medicina tradicional china, 2016, 41 (08): 1367-1375