Los métodos de detección de la circulación exosómica PD-L1

Contacto:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Todavía faltan métodos aceptados y convencionales para la detección de PD-L1 exosómico circulante. Los métodos tradicionales de detección de exosomas, como el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) y el análisis de flujo, se pueden utilizar para detectar PD-L1 en exosomas circulantes, y ELISA es actualmente el método más utilizado. El método ELISA puede detectar cuantitativamente el contenido de PD-L1 en exosomas circulantes y es fácil de operar. La citometría de flujo se puede utilizar para detectar cuantitativamente el PD-L1 exosómico circulante en muestras grandes, pero requiere un equipo de alta detección. Con la investigación en profundidad sobre exosomas, los métodos de detección de proteínas exosómicas y ácidos nucleicos también se enriquecen y desarrollan, y se han introducido algunos métodos nuevos en el campo de la detección de PD-L1 en exosomas circulantes (Figura).

Detección decirculanteexosómicoPD-L1

1. PCR digital

Debido a la pequeña cantidad de ácido nucleico contenido en los exosomas, es difícil para los métodos de detección convencionales detectar con precisión sus números de copias de genes. La tecnología de PCR digital es un método de detección de ácidos nucleicos con una sensibilidad extremadamente alta y una cuantificación absoluta. Su sensibilidad puede alcanzar el nivel de una sola molécula de ácido nucleico, por lo que tiene ventajas en la detección del contenido de ácido nucleico de los exosomas. Los investigadores utilizaron la tecnología de PCR digital para analizar cuantitativamente con precisión el número de copias de ARNm PD-L1 en exosomas plasmáticos de pacientes con melanoma y cáncer de pulmón de células no pequeñas y revelaron la relación entre el número de copias de ARNm de PD-L1 exosómico plasmático y la correlación anti-PD1 entre los efectos del tratamiento. La introducción de la tecnología de PCR digital ha mejorado significativamente la capacidad de detección del ARNm exosómico PD-L1, que es de gran importancia para la investigación de PD-L1 exosómico. Sin embargo, puede haber inconsistencias entre el contenido de ARNm exosómico PD-L1 y la expresión de la proteína PD-L1. Por lo tanto, la detección de ARNm exosómico PD-L1 solo puede tener ciertos defectos, que necesitan más investigación y aclaración.

Beneficios de cistanche del desierto contra el cáncer del extracto de cistanche

2. ELISA

ELISA es un método de análisis inmunológico tradicional, que a menudo se utiliza para detectar pequeñas proteínas moleculares en plasma o medio de cultivo. Tiene alta sensibilidad y puede ser analizado cuantitativamente. ELISA también se puede utilizar para detectar la proteína PD-L1 exosómica y puede lograr la detección cuantitativa de grandes lotes de muestras. El kit de detección de proteínas PD-L1 basado en el principio del método ELISA también se ha aplicado a la detección cuantitativa de la proteína PD-L1 exosómica plasmática. Chen et al. construyeron un sistema exosómico de detección de proteínas PD-L1 basado en el principio de ELISA, que se utilizó para la detección de proteínas EXOSÓMICAs PD-L1 derivadas de medios de cultivo celular o plasma. El rango de detección lineal fue de 0,2-12,0 ng/mL. ELISA es un buen método para detectar la proteína EXOSOMAL PD-L1, que es fácil de detectar cuantitativamente y tiene una buena repetibilidad. Sin embargo, debido a la presencia de proteína PD-L1 libre en el plasma, interferirá con su precisión. Por lo tanto, este método detecta la circulación. La sensibilidad y la especificidad de la proteína EXOSOMAL PD-L1 aún deben explorarse más a fondo.

Raíz de Herba cistanche: anticancerígeno

3. Método de análisis de flujo

La citometría de flujo se utiliza a menudo para tipificar y contar células u otras partículas biológicas suspendidas en líquido, por lo que este método también se ha introducido en la detección y el recuento de exosomas. THEODORAKIS et al. utilizaron primero la cromatografía para separar inicialmente los exosomas en el plasma de pacientes con cáncer de cabeza y cuello y luego utilizaron el análisis de flujo para detectar y contar los exosomas PD-L1 positivos. La expresión de la proteína PD-L1 se expresó como intensidad de fluorescencia. Los resultados muestran que el método tiene una buena reproducibilidad en la detección de la proteína PD-L1 exosómica, y su variación intraindividual es del 7% cuando se realizan múltiples ensayos paralelos en una sola muestra de paciente. Al mismo tiempo, para verificar la precisión del método, los investigadores utilizaron el análisis de fluorescencia confocal como método de referencia para la detección de la proteína exosómica PD-L1. Se probaron tres muestras en paralelo y se compararon los resultados, y se encontró que los resultados de la citometría de flujo y el análisis de fluorescencia confocal fueron altamente consistentes, lo que indica que la citometría de flujo fue un método preciso para el análisis cuantitativo de PD-L1 exosomal. Además, LUX et al. también detectaron con éxito la expresión de proteínas exosómicas PD-L1 y c-Met en el suero de pacientes con cáncer de páncreas mediante citometría de flujo, pero el rendimiento del método de detección debe estudiarse más a fondo. En la actualidad, también se han lanzado analizadores de flujo especialmente utilizados para la detección de exosomas, como el analizador de nanoflujo ultrasensible Apogee, que es más adecuado para la detección de proteínas de exosomas que los analizadores de flujo tradicionales.

El beneficio del suplemento de extracto de cistanche tubulosa: antitumoral y cáncer

4. Tecnología de dispersión Raman mejorada en superficie

La dispersión Raman mejorada en superficie (SERS) es una técnica de espectroscopia de huellas dactilares altamente sensible que se ha utilizado ampliamente en los campos biomédicos. En la actualidad, los estudiosos han utilizado la tecnología SERS para detectar la proteína EXOSOMAL PD-L1. Los investigadores primero utilizaron perlas magnéticas modificadas con TiO2 para adsorber exosomas no específicamente en plasma, y luego utilizaron sondas SERS vinculadas a anticuerpos PD-L1 para modificar nanopartículas de oro, y luego incubaron las muestras de exosomas con nanopartículas de oro. Forma una estructura compleja de nanopartículas magnéticas de perla-exosoma-oro, y finalmente utiliza un campo magnético para enriquecer y separar el complejo, y luego se coloca en un espectrómetro Raman confocal láser para la detección, a fin de realizar la detección de exosomas positivos PD-L1. Detección de contenido corporal. Este método tiene una alta sensibilidad de detección, y su límite de detección más bajo puede alcanzar 1 pd-L1 + exosoma / μL plasmático. Además, los investigadores utilizaron este método para detectar un grupo de muestras con diferentes concentraciones. Los resultados mostraron que la intensidad del SERS se relacionó linealmente con el logaritmo de la concentración de muestras de exosomas, lo que indica que el método de detección tiene una buena estabilidad y puede ser utilizado directamente en plasma. Detecte exosomas sin un paso adicional de aislamiento de exosomas. En la actualidad, existen pocos estudios sobre la aplicación directa de la tecnología SERS a la detección de la proteína EXOSÓMICA PD-L1, pero se ha llevado a cabo la investigación sobre la aplicación de la tecnología SERS a la detección de otros exosomas, que también tiene una referencia importante para la detección del valor exosómico de la proteína PD-L1.

Situación de crecimiento del cistanche desértico

5. Método HOLMES-ExoPD-L1

El método HOLMES-ExoPD-L1 es un nuevo método de detección de la proteína exosómica PD-L1. En este método, se diseñó un nuevo aptámero MJ5C dirigido a la proteína PD-L1, que puede unirse eficientemente a la proteína PD-L1 en la membrana del exosoma y no es interferido por la glicosilación de la proteína PD-L1. En este método, el aptámero MJ5C marcado fluorescentemente y los exosomas se coincublicaron primero en un capilar delgado para unirse entre sí, y el láser infrarrojo se centró en el capilar delgado para formar un gradiente de temperatura a escala de micras. Las tasas de termoforesis de los complejos de aptámero MJ5C libre y aptámero exosómico MJ5C fueron significativamente diferentes, y el agotamiento termoforético del aptámero libre fue más rápido que el del complejo exosoma-aptámero. separados. Por lo tanto, bajo la acción de la luz de excitación, el contenido de la proteína EXOSOmal PD-L1 se puede determinar detectando la intensidad de fluorescencia de los aptámeros marcados fluorescentemente. El método tiene una alta sensibilidad y un límite de detección de 17,6 pg/ml. Además, también tiene las ventajas de menos volumen de muestra y corto tiempo de detección. Es un método muy original para la detección de la proteína exosómica PD-L1, que es muy importante para el desarrollo de la nueva El método de detección de proteínas exosómicas PD-L1 tiene un valor esclarecedor.

Antitumoral: suplemento de cistanche

La PD-L1 exosómica tiene amplias perspectivas de aplicación en el campo de la inmunoterapia de tumores malignos y se ha convertido en uno de los puntos calientes en el campo de la investigación de exosomas. En comparación con la detección de la expresión tisular de PD-L1, la detección de PD-L1 exosómico circulante es más fácil de obtener muestras y realizar la detección en tiempo real, evitando al mismo tiempo el problema de heterogeneidad tisular causado por el muestreo patológico; LA PD-L1 exosómica también conduce a la inmunidad tumoral. Es una causa importante de escape y está relacionada con la progresión de tumores malignos, y puede convertirse en un indicador importante para la evaluación de la enfermedad y la predicción del pronóstico. Además, también se espera que los niveles plasmáticos exosómicos de PD-L1 se utilicen para evaluar a los pacientes adecuados para la inmunoterapia anti-PD-L1 y predecir su respuesta al tratamiento. Sin embargo, todavía faltan métodos reconocidos y eficaces para la detección de exosomas circulantes PD-L1. Es necesario establecer un exosoma circulante ideal con separación simple o nula, menos demanda de muestras, alta sensibilidad, buena repetibilidad y señales de detección menos susceptibles. Un método para la detección de PD-L1 in vivo. El método de detección de PD-L1 exosómico circulante aún necesita una mayor investigación en profundidad, pero se cree que con el desarrollo y la aplicación de nuevos métodos de detección en el futuro, el PD-L1 exosómico circulante podrá guiar mejor la inmunoterapia anti-PD1 y se utilizará en el diagnóstico y tratamiento de tumores malignos. juegan un papel más importante.