La piel juega un papel vital en la modulación de la temperatura corporal, la percepción del dolor y la presión

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RESUMEN

Fondo:Granos verdes de Café arábica L. Familia: Rubiaceae son una rica fuente de polifenoles que previenen el daño oxidativo de la piel. En este estudio, los liposomas se formularon como portadores de fármacos para mejorar la permeabilidad cutánea de los polifenoles para la administración tópica. Materiales y Métodos: Se prepararon extractos de granos de café verde variando las proporciones de metanol y agua. Se realizaron análisis fitoquímicos y evaluación de antioxidantes in vitro en todos los extractos para elegir el mejor extracto para estudios posteriores. El potencial de citotoxicidad (ensayo MTT) y la actividad antielastasa del extracto elegido se evaluaron en líneas celulares L929 utilizando un citómetro de flujo. Los liposomas del extracto se prepararon mediante el método de hidratación de película fina y se optimizaron variando la proporción de fosfatidilcolina a colesterol y aumentando gradualmente la cantidad de extracto. La formulación liposomal se convirtió en el gel usando carbopol"974P como agente gelificante. La suspensión liposomal preparada y el gel liposomal se evaluaron para varios parámetros de formulación. Resultados: Los resultados del análisis fitoquímico, los ensayos antioxidantes in vitro y la evaluación in vitro de Las líneas celulares L929 concluyeron que el extracto metanólico al 25 por ciento no era tóxico con el contenido fenólico más alto y exhibió una buena actividad antielastasa. La eficiencia de encapsulación del ácido clorogénico en la formulación liposomal optimizada fue del 75 por ciento. El gel liposomal mostró una liberación sostenida del fármaco durante hasta 12 hr en comparación con 6-7 hr de la formulación convencional Conclusión: El gel formulado a base de liposomas cargado con extracto de grano de café verde puede servir como un vehículo potencial para los efectos antienvejecimiento.

Palabras clave:Granos de café verde (GCB), Ácido clorogénico, Extracto, Liposomas, Antioxidante, Antienvejecimiento.

INTRODUCCIÓN

La piel juega un papel vital en la modulación de la temperatura corporal, la percepción del dolor y la presión, y actúa como una barrera crucial contra la contaminación ambiental, lo que hace que el envejecimiento de la piel sea muy evidente.1 La exposición prolongada de la piel a la radiación ultravioleta produce radicales libres que inducen estrés oxidativo en la piel. piel que conduce al desarrollo de fotoenvejecimiento, quemaduras solares, melanogénesis, inmunosupresión y fotocarcinogénesis.² Los radicales libres son moléculas de oxígeno extremadamente reactivas que participan en la formación de enlaces cruzados con las moléculas de colágeno que conducen a la pérdida de elasticidad de la piel.3 El envejecimiento se manifiesta con flacidez, adelgazamiento, sequedad y manchas en la piel. Por lo tanto, con el deseo de lucir joven, los productos antienvejecimiento tienen una gran demanda. Los antioxidantes de origen vegetal han ganado importancia en la industria cosmética. Los antioxidantes ayudan a reparar y prevenir el daño oxidativo causado por los radicales libres. La actividad antioxidante de las hierbas se debe principalmente a las propiedades redox de los compuestos fenólicos.4 Por lo tanto, se ha descubierto que los antioxidantes son prometedores para retrasar los signos del envejecimiento, como las arrugas, las manchas y las líneas finas.

Los granos de café verde (Coffea arabica L, Rubiaceae) son una rica fuente de polifenoles como el ácido clorogénico y sus compuestos relacionados, como el ácido cafeico, el ácido cumárico y el ácido ferúlico, que previenen el daño oxidativo de la piel. Los estudios han revelado que los extractos de C. arabica poseen propiedades antibacterianas,5 antivirales,6 antiinflamatorias,7 curan heridas en la piel y reducen el daño oxidativo de las macromoléculas. y actividad supresora de la expresión de metaloproteinasas.10

El ácido clorogénico, el principal compuesto polifenólico de los granos de café verde, tiene propiedades antioxidantes y despigmentantes e inhibe el daño de la piel inducido por los rayos UV. I2 Según estudios científicos, los granos de café verde contienen una mayor cantidad de ácido clorogénico que los granos de café tostados y otras plantas. "3

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La entrega de polifenoles a través de la piel es ineficaz debido a su penetración limitada. Por lo tanto, se requiere la base de la formulación o potenciadores de la penetración que mejoren su penetración". Por lo tanto, se seleccionaron los liposomas como portadores de fármacos, ya que son de naturaleza anfifílica y las moléculas hidrofílicas se pueden incrustar fácilmente en las bicapas concéntricas. Los liposomas, que son fisiológicamente similares a la membrana celular, no son -naturaleza tóxica.La presencia de fosfolípidos en los liposomas mejora la absorción tópica del fármaco desde la epidermis hacia las capas inferiores debido a una mayor adhesión del complejo de fosfolípidos del fármaco en la piel.'5 El objetivo del presente estudio es desarrollar un gel que contiene liposomas cargados con extracto de grano de café verde para ser utilizado como una formulación cosmética antioxidante para efectos antienvejecimiento.

MATERIALES Y MÉTODOS Materiales

Los granos de café verde arábica L se obtuvieron del mercado local de Mumbai en agosto de 2019 y fueron autenticados por el Dr. Harshad M. Pandit. Ex-Director y Profesor Asociado de Botánica, Guru Nanak Khalsa College, Mumbai, India. La fosfatidilcolina se adquirió de HiMedia Laboratories Pvt Ltd, el colesterol 99 % se adquirió de Loba Chemie Pvt Ltd, 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH) y el ácido clorogénico se adquirió de Otto Chemie Pvt Ltd, Mumbai . El ácido gálico y el ácido ascórbico se obtuvieron de SD Fine Chemicals Ltd, Mumbai. Todos los productos químicos utilizados en este estudio fueron de grado AR. Los liposomas se produjeron usando un evaporador rotatorio, Rotaeva, Equitron y un espectrofotómetro UV-Visible, Shimadzu 1800 se usó para la evaluación de los liposomas.

Cistanche puede antienvejecimiento

Métodos

Metodología de extracción

Los granos de café verde en polvo se desengrasaron usando éter de petróleo 40-60 grados (1:6 por ciento p/v) durante 3 horas en un aparato soxhlet. El polvo de café verde desgrasado se extrajo con diferentes solventes como agua, metanol al 25 por ciento, metanol al 50 por ciento, metanol al 75 por ciento y metanol al 100 por ciento durante 2 horas usando un sistema soxhlet. Los extractos resultantes se concentraron en un plato de porcelana en un baño de agua eléctrico a 80 grados para eliminar el solvente. Los extractos preparados se utilizaron para el análisis cualitativo y cuantitativo.

Contenido fenólico total

El contenido de fenoles totales se determinó por el método del reactivo de Folin-Ciocalteu utilizando el procedimiento estándar. El ácido gálico se utilizó como estándar y el contenido polifenólico total se expresó como mg/g de ácido gálico equivalente (GAE) de la curva de calibración de ácido gálico.16

superposición espectral

Se utilizó el método espectrométrico UV para determinar la presencia de ácido clorogénico en el extracto. Para la preparación de soluciones estándar, se disolvieron 1 mg/ml de ácido clorogénico estándar en tampón de fosfato y se preparó una dilución adicional para obtener 10 ug/ml de solución estándar. Para la solución de muestra, se disolvió el 25 por ciento de 1 mg/ml de extracto metanólico en tampón de fosfato y se preparó una dilución adicional para obtener 10 ug/ml de solución estándar. Se obtuvo un espectro superpuesto de ambas soluciones usando espectrofotometría UV-Vis.

Cuantificación de ácido clorogénico en cada extracto Preparación de solución estándar

El ácido clorogénico estándar se disolvió en disolventes tales como agua, metanol al 25 por ciento, metanol al 50 por ciento, metanol al 75 por ciento y metanol al 100 por ciento. Con el fin de reducir el error en el procedimiento de preparación, se preparó la solución de 10 ppm de ácido clorogénico en cada uno de los disolventes anteriores, y luego se preparó la dilución correspondiente en el intervalo de concentración de 2 a 10 ppm. El gráfico de linealidad se realizó registrando la absorbancia a 324 nm utilizando un espectrofotómetro UV-Vis.

Preparación de la solución de muestra

Para la preparación de la Solución de muestra, los extractos se disolvieron en sus respectivos solventes y se preparó una solución de 10 ppm. La absorbancia de la solución de muestra se registró a 324 nm utilizando un espectrofotómetro UV-Vis. La absorbancia obtenida se extrapoló en la gráfica de linealidad para encontrar la concentración de ácido clorogénico en cada extracto.

Determinación de actividades antioxidantes

Ensayo de antioxidante PDF (2,2-difenil -1-picrilhidrazilo) Se investigó la actividad de eliminación de radicales de los extractos sobre los radicales DPPH siguiendo el método estándar. Se usó ácido ascórbico como estándar. El experimento se realizó por triplicado. El porcentaje de actividad eliminadora de radicales DPPH se representó gráficamente frente a cada concentración de extracto y se determinó la IC.Ensayo antioxidante de óxido nítrico

La actividad de captación de radicales de óxido nítrico se investigó mediante el uso de la reacción de Griess Illosvoy.imperio perdido cistanche18 Se utilizó ácido ascórbico como estándar. El experimento se realizó por triplicado. El porcentaje de actividad de eliminación de radicales de óxido nítrico se representó gráficamente frente a cada concentración de extracto y el porcentaje de inhibición IC para ambos estudios de antioxidantes se calculó usando la fórmula mencionada a continuación. La actividad de eliminación se expresó como el porcentaje de inhibición calculado usando la siguiente fórmula:

Determinación de la viabilidad celular mediante el ensayo MTT El extracto de granos de café verde, es decir, el extracto metanólico al 25 por ciento, se examinó para el estudio de citotoxicidad frente a las líneas celulares L929. Se sembraron 20ul de suspensión celular en una placa 96-pocillo con densidad celular (20,000 células por pozo), sin el agente de prueba. Se permitió que las células crecieran durante aproximadamente 24 horas. Se añadió una concentración apropiada del agente de prueba (25 por ciento de extracto metanólico), la placa se incubó durante 24 horas a 37 grados en una atmósfera con 5 por ciento de CO y se eliminó el medio gastado. Se añadió el reactivo MTT a una concentración final de (0,5 mg/ml) del volumen total y las placas se incubaron durante 2-3 h en condiciones de oscuridad. Se añadieron 100 ul de DMSO después de retirar el reactivo MIT y se agitó suavemente. La absorbancia se midió a 570 nm y 630 nm usando un espectrofotómetro en un lector ELISA. El valor de IC.o se determinó utilizando una ecuación de regresión lineal. Fórmulas utilizadas para el estudio:

Determinación de la actividad Anti Elastasa

Las células se cultivaron a una densidad de 3x105 células/2 ml y se incubaron en un incubador de CO2 durante 24 horas a 37 grados. 1 Para el estudio de anti-elastasa, las células tratadas con 250uM de galato de epigalocatequina (EGCG) se utilizaron como control positivo, las células tratadas con 200ug/ml de Se usó 25 por ciento de extracto metanólico como muestra de prueba (Tabla 6), y las células solo con medio de cultivo se usaron como control negativo y se incubaron en 2 ml de medio de cultivo durante 24 horas. Los tubos se centrifugaron durante cinco minutos a 300xga 25 grados y las células se lavaron con PBS. Se agregaron 0,5 ml de solución BD Cytofix/Cytoperm después de retirar el PBS y los tubos se mantuvieron en reposo durante 10 minutos. SEd Se añadieron 20 μl de anticuerpo monoclonal conjugado con elastasa de neutrófilo antihumano de ratón/ELA2 Alexa Fluor® 647-, se mezcló y se incubó durante 30 min a temperatura ambiente en condiciones de oscuridad. Las células se trataron con azida sódica al 0,1 por ciento y 0,5 ml de PBS y se analizaron mediante citometría de flujo con excitación y emisión de 650 nm y 668 nm respectivamente. En este estudio, se usaron compuestos de prueba, a saber, extracto de grano de café verde (extracto metanólico al 25 por ciento) y galato de epigalocatequina estándar (EGCG) para evaluar su efecto sobre la expresión de ELA-2 (anticuerpo conjugado de elastasa antihumano de ratón) en células L929. líneas.

Preparación de liposomas cargados con extracto de granos de café verde

Se utilizó el método de hidratación de película fina descrito por Bangham et al.1 para formular liposomas. La mezcla de lípidos se preparó disolviendo fosfatidilcolina y colesterol en cloroformo y metanol (2:1) en el matraz de fondo redondo (RBF) y se añadieron perlas de vidrio para la formación de una película homogénea. El RBF se conectó a un evaporador flash rotatorio (Roteva, ecuación) y se dejó girar a 80 rpm/min en un baño de agua termostatizado a 40 grados. Los disolventes orgánicos se eliminaron mediante la aplicación lenta de vacío, lo que condujo a la formación de una película de lípidos homogénea al 100 por ciento en las paredes del matraz. La película se dejó secar durante LH para la eliminación completa de los disolventes orgánicos. La película lipídica seca se hidrató con tampón de fosfato (pH: 5,4) que contenía extracto disuelto (25 por ciento de extracto metanólico) y luego se hizo girar el RBF a 150 rpm/min en un baño de agua termostatizado mantenido a 46 grados que está por encima de la temperatura de transición. de lípido. Se continuó la rotación durante 60 min hasta que se obtuvo una suspensión homogénea. Los liposomas producidos con este método son grandes y de tamaño heterogéneo, por lo que se utilizó el método de sonicación en baño durante 30 minutos para reducir el tamaño de los liposomas. La suspensión liposomal a base de extracto de granos de café verde se dejó reposar durante 2 horas a temperatura ambiente para asegurar una hidratación completa. La suspensión liposomal se almacenó en un frasco de vidrio de color ámbar en el refrigerador hasta su uso posterior.

Caracterización de liposomas

Los siguientes son los parámetros para los cuales se caracterizaron los liposomas preparados.

Determinación de la eficiencia de encapsulación Se utilizó un espectrofotómetro UV-Vis para estimar la eficiencia de encapsulación del ácido clorogénico en liposomas cargados con extracto de grano de café verde. La absorbancia del ácido clorogénico que quedaba en el sobrenadante después de la centrifugación se midió a 324 nm utilizando un espectrofotómetro UV-Vis.fracción de flavonoides purificada micronizada 1000 mg usosLuego, se calculó la concentración a partir del gráfico de calibración obtenido para el ácido clorogénico estándar.

La cantidad total de fármaco añadido a Microscopía Óptica

Se colocó una gota de la suspensión liposomal sobre un portaobjetos de vidrio limpio y se observó bajo la potencia de 45X y 100X del microscopio óptico (microscopio Motic). Determinación del tamaño de vesícula, índice de polidispersibilidad (PDI) y potencial zeta

El tamaño de las vesículas y el índice de polidispersibilidad se analizaron usando un instrumento de dispersión de luz dinámica con un sistema de inspección computarizado (analizador de tamaño de partículas Malvern). Los lotes de liposomas recién preparados se diluyeron en una proporción de 1:100 con agua desionizada. Todas las mediciones se realizaron por triplicado a 25 ± 0,5 grados. La suspensión liposomal se diluyó con agua desionizada y el potencial zeta se determinó utilizando Malvern Zetasizer.

Microscopía electrónica de transmisión (TEM) El análisis TEM se llevó a cabo para optimizar la suspensión cargada de fármaco mediante microscopía electrónica de transmisión (Tecnai T20,200Kev, FEI). Se colocó una gota de la suspensión con ayuda de una micropipeta sobre la rejilla. La rejilla se secó bien. La rejilla seca que contenía la muestra se bombardeó con electrones acelerados a 200 VK. Luego, el tamaño de las vesículas y la morfología liposomal se visualizaron mediante TEM al vacío (Figura 1). Preparación de Gel Liposomal

Se preparó un gel liposomal cargado con extracto de granos de café verde usando una base de gel carbopol@974P. Se pesó con precisión 0.5 por ciento de carbopol@974P y se mantuvo durante la noche para su hidratación en agua bidestilada que contenía conservantes. Los gránulos de liposomas obtenidos después de la centrifugación se dispersaron en agua destilada mediante sonicación y se añadieron a una solución de carbopol hidratada con agitación. La gelificación se indujo por neutralización usando trietanolamina (TEA). El gel se evaluó en cuanto a color, textura (suavidad y untuosidad), pH, viscosidad, contenido de fármaco, capacidad de esparcimiento y en el estudio de liberación del fármaco.

Estudio de liberación de fármacos in vitro

Se usó el aparato de células de difusión de Franz que tiene una capacidad de compartimento receptor de 22 ml y un área de superficie de 3,91 cm2 para estimar la membrana de diálisis de liberación de fármaco in vitro (límite de peso molecular 12,000-14,000) que se prehidrató remojándolos en tampón durante la noche y se montaron en las células. Se usó tampón de fosfato pH 5,4 (37 grados ± 0,5 grados) como fluido receptor. La solución del depósito se agitó a 100 rpm/min utilizando una perla magnética. Se colocaron 0,5 g de gel en el compartimento donante de la membrana. Se recogieron alícuotas a intervalos de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12 y 24 horas y se analizaron mediante espectrofotómetro UV-Vis a 324 nm.20

RESULTADOS Y DISCUSIÓN Metodología de Extracción

Los rendimientos porcentuales de extractos de granos de café verde arábica L. se presentan en la Tabla 3. La apariencia física de todos los extractos fue de color amarillo oscuro y marrón oscuro. El 25 por ciento del extracto metanólico mostró el rendimiento porcentual más alto con 26.54±0.13 en comparación con todos los demás extractos.

Contenido fenólico total

Se utilizó el método de Folin-Ciocalteu para estimar el contenido fenólico total de todos los extractos. El TPC de todos los extractos se expresa en términos de ácido gálico equivalente (La ecuación de la curva estándar: y= 0.0031 más 0.3477,r2=0.9953) mencionado en la Tabla 1. Entre todos los extractos, el mayor contenido fenólico se estima en un 25 por ciento de extracto metanólico. Cuantificación de superposición espectral de ácido clorogénico en cada extracto La cantidad de contenido de ácido clorogénico presente en cada extracto se menciona en la Tabla 3 y la Figura 2.oteflavonoideSegún los resultados, se encontró que la mayor cantidad de ácido clorogénico estaba presente en el 25 por ciento del extracto metanólico.

Con base en los resultados obtenidos del contenido fenólico total, la cuantificación del ácido clorogénico y el ensayo antioxidante, se encontró que el extracto metanólico al 25 por ciento contenía el contenido fenólico más alto, una mayor cantidad de ácido clorogénico y una actividad máxima de eliminación de radicales en comparación con otros extractos.

Determinación de la viabilidad celular mediante el ensayo MTT El ensayo de viabilidad es un ensayo que determina la capacidad de los tejidos, células u órganos para mantener o recuperar el estado de supervivencia. El estudio de citotoxicidad del compuesto de prueba, extracto de grano de café verde contra las líneas celulares L929 en los datos estadísticos del estudio de citotoxicidad celular realizado por el lector ELISA sugirió que el extracto de grano de café verde mostró propiedades potenciales de citotoxicidad moderadas con una concentración inhibidora (IC) de 306,38 ug/ml en comparación con el estándar fármaco Camptotecina con 23 ug/ml Tabla 5. La observación sugiere fuertemente que el extracto de grano de café verde no tiene un potencial de citotoxicidad significativo con concentraciones que van desde 12.5-200 ug/ml respectivamente con un período de incubación de 24 horas a 37 grados (Gráfico 1).

Determinación de la actividad Anti Elastasa

La enzima elastasa es capaz de descomponer la elastina, una proteína fibrosa elástica insoluble que, junto con el colágeno, contribuye a la resistencia mecánica del tejido conectivo. Varios estudios han sugerido que tanto el envejecimiento de la piel como los efectos antiarrugas se corresponden significativamente con la reducción de la actividad de la elastasa. Por lo tanto, se llevaron a cabo estudios de antielastasa para confirmar la utilidad del extracto de grano de café verde como agente antienvejecimiento. En este estudio, se utilizó el compuesto de prueba, a saber, extracto de grano de café verde y Std, EGCG, para evaluar su efecto sobre la expresión de ELA-2 (anticuerpo conjugado de ratón anti-elastasa humana) en la línea celular L929. Las concentraciones de los compuestos utilizados en el experimento fueron las siguientes:

El extracto de frijol GC compuesto de prueba dado suprimió la expresión ELA-2 en la línea celular L929. Los valores medios relativos de intensidad de fluorescencia de ELA-2 se redujeron casi de manera similar en el extracto de grano de café verde estándar, galato de epigalocatequina y compuesto de prueba. (Cuadro 7; Figura 3 e Histograma 1). Por lo tanto, el frijol GC puede considerarse un buen agente anti-elastasa. Preparación de liposomas cargados con extracto de granos de café verde

En este estudio se utilizó el método de hidratación de película delgada para formular liposomas.puritanos vitamina cEl motivo de seleccionar este

el método es el método más simple para preparar vesículas multilaminares y es capaz de cargar una mayor masa de moléculas hidrofílicas tales como ácido clorogénico en comparación con las vesículas unilamelares. Se encontró que el método de hidratación de película delgada proporcionaba un 75 por ciento de eficiencia de encapsulación para el ácido clorogénico presente en el extracto de la Tabla 2. Por lo tanto, este método se usó para la preparación de los liposomas.

Caracterización de liposomas Microscopía óptica

Se observó claramente la vesícula multilamelar (Figura 4). Se usaron observaciones microscópicas para evaluar la forma y el tamaño de las vesículas observadas para todos los lotes preparados.

Determinación del índice de polidispersibilidad (PDI), potencial zeta y tamaño de vesícula

PDI aparece básicamente para la distribución del tamaño de las vesículas en una muestra dada.sistancheEl valor numérico de PDI comienza desde {{0}}.0 (tamaño de partícula perfectamente uniforme) a 1,1 (tamaño de partícula altamente polidisperso). Los nanoliposomas con un tamaño de 0,3 e inferior son aceptables, ya que indican una población homogénea de vesículas de fosfolípidos.21 El potencial zeta es una técnica de caracterización significativa que se emplea para comprender la estabilidad física de las partículas. Generalmente se considera que un valor de -30 mV a más 30 mV tiene suficiente fuerza repulsiva para lograr una mejor estabilidad coloidal física.

El método de hidratación de película delgada da vesículas multilaminares grandes y heterogéneas. El análisis de tamaño de los liposomas producidos reveló un tamaño promedio z (d.nm) de 864.2 nm, PDI de 0.375 y Potencial Zeta de -12.4 con buena eficiencia de atrapamiento.

Microscopía electrónica de transmisión (TEM) El análisis morfológico de estos liposomas por TEM mostró liposomas de forma esférica. Preparación de Gel Liposomal

La dispersión liposomal se mezcló simplemente con el polímero para dar los geles correspondientes. La formulación de gel liposomal es ventajosa ya que la fusión de las vesículas puede evitarse o minimizarse de manera efectiva ya que el polímero sirve como espaciador entre los liposomas. Por lo tanto, el tamaño de la vesícula no se ve afectado porque es un proceso de interacción polímero/liposoma controlado. No se eligió la formulación de crema a base de liposomas porque se informan problemas de estabilidad en los productos a base de emulsión debido al método, ya que es el método más simple para preparar vesículas multilamelares y es capaz de cargar una mayor masa de moléculas hidrofílicas como el ácido clorogénico en comparación con vesículas unilamelares. Se encontró que el método de hidratación de película delgada proporcionaba un 75 por ciento de eficiencia de encapsulación para el ácido clorogénico presente en el extracto de la Tabla 2. Por lo tanto, este método se usó para la preparación de los liposomas.

Caracterización de liposomas Microscopía óptica

Se observó claramente la vesícula multilamelar (Figura 4). Se usaron observaciones microscópicas para evaluar la forma y el tamaño de las vesículas observadas para todos los lotes preparados.

Determinación del índice de polidispersibilidad (PDI), potencial zeta y tamaño de vesícula

PDI aparece básicamente para la distribución del tamaño de las vesículas en una muestra dada. El valor numérico de PDI comienza desde {{0}}.0 (tamaño de partícula perfectamente uniforme) a 1,1 (tamaño de partícula altamente polidisperso). Los nanoliposomas con un tamaño de 0,3 e inferior son aceptables, ya que indican una población homogénea de vesículas de fosfolípidos.21 El potencial zeta es una técnica de caracterización significativa que se emplea para comprender la estabilidad física de las partículas. Generalmente se considera que un valor de -30 mV a más 30 mV tiene suficiente fuerza repulsiva para lograr una mejor estabilidad coloidal física. 2

El método de hidratación de película delgada da vesículas multilaminares grandes y heterogéneas. El análisis de tamaño de los liposomas producidos reveló un tamaño promedio z (d.nm) de 864.2 nm, PDI de 0.375 y Potencial Zeta de -12.4 con buena eficiencia de atrapamiento.

Microscopía electrónica de transmisión (TEM) El análisis morfológico de estos liposomas por TEM mostró liposomas de forma esférica.

Preparación de Gel Liposomal

La dispersión liposomal se mezcló simplemente con el polímero para dar los geles correspondientes. La formulación de gel liposomal es ventajosa ya que la fusión de las vesículas puede evitarse o minimizarse de manera efectiva ya que el polímero sirve como espaciador entre los liposomas. Por lo tanto, el tamaño de la vesícula no se ve afectado porque es un proceso de interacción polímero/liposoma controlado. No se eligió la formulación de crema a base de liposomas porque se informan problemas de estabilidad en productos a base de emulsión debido a

la presencia de surfactante y exceso de aceite que puede interactuar con las vesículas. Varias propiedades, como la viscosidad, se pueden controlar fácilmente variando la concentración del polímero o cambiando el tipo de polímero. Por lo tanto, se prepararon geles liposomales porque eludían el problema de la estabilidad, proporcionaban una liberación controlada, eran fáciles de preparar y tenían un atractivo estético como cosméticos para el cuidado de la piel.23 Los lipogeles preparados eran de color amarillo pálido y opacos. Se encontró que 0.5 por ciento p/p de carbopol@974P tenía buena consistencia y apariencia suave sin agregación alguna. Se encontró que el contenido de fármaco para el gel liposomal era de 94,16 ± 1,3 con una viscosidad del gel en el rango de 13.500 cps a 16.500 cps y una capacidad de esparcimiento de alrededor de 7-8 g.cm/s.

Perfil de liberación de fármacos in vitro

La capa más externa de la piel es el estrato córneo y se compone principalmente de proteína queratina y lípidos. Los lípidos intercelulares juegan un papel vital en el control de la absorción percutánea. Los lípidos intercelulares pueden interactuar con los fosfolípidos presentes en los liposomas y, por lo tanto, provocar el hinchamiento de los lípidos sin alterar la estructura bicapa múltiple del estrato córneo. Estos lípidos hinchados hacen que el fármaco se acumule y forme un depósito intracutáneo. Aunque el mecanismo de los liposomas aplicados tópicamente no se comprende por completo, la composición lipídica, la carga superficial y la lamelaridad liposomal desempeñan principalmente un papel importante en la disposición del fármaco. Los estudios también han revelado que la administración tópica también está influenciada por el tamaño de los liposomas.24 La liberación del fármaco in vitro se realizó utilizando una membrana de diálisis. El estudio de liberación de =in vitro del gel liposomal ha demostrado un efecto de liberación sostenida de hasta 12 horas en comparación con las 7-8 horas del gel convencional Gráfico 2.

CONCLUSIÓN

Los extractos de granos de café arábica verde se analizaron para determinar el contenido fenólico total, la cuantificación del ácido clorogénico y el ensayo de antioxidantes. Con base en los resultados obtenidos de estos estudios, se eligió un 25 por ciento de extracto metanólico para incorporarlo a los liposomas por haber mostrado el mayor contenido fenólico, una mayor cantidad de ácido clorogénico y una mejor actividad antioxidante. Antes de incorporar el extracto en los liposomas, se analizó para MTT y ensayo de antielastasa. Según el ensayo de MT, el extracto no tenía potencial de citotoxicidad celular y según el ensayo de antielastasa, el extracto tenía actividad antielastasa. Por lo tanto, el extracto se puede utilizar para formular liposomas antienvejecimiento. Las vesículas multilaminares se prepararon utilizando el método de hidratación de película delgada. Los liposomas preparados tenían una buena eficacia de encapsulación y una mejor estabilidad física. La suspensión liposomal a base de extracto se formuló en un gel liposomal. Según el estudio de liberación de fármacos in vitro, el gel liposomal ha mostrado un efecto de liberación prolongada de hasta 12 horas en comparación con el gel convencional. Por lo tanto, los liposomas cargados con extracto de grano de café verde pueden considerarse un vehículo eficaz para la administración tópica con potencial antienvejecimiento.

RECONOCIMIENTO

Los autores agradecen a Stellixir Biotechechnology, Bengaluru y Karnataka por su ayuda para completar los estudios del ensayo de MTT y del ensayo de antielastasa, también agradecen a las soluciones de pruebas de Sprint, Mumbai por las imágenes TEM y al Dr. Bhanuben Nanavati College of Pharmacy de nuestra universidad SVKM por proporcionando las mejores instalaciones para llevar a cabo este estudio.

CONFLICTO DE INTERESES

Los autores declaran no tener conflicto de intereses.

ABREVIATURAS:

TPC: contenido fenólico total; DPPH:2,2-difenil -1-picrilhidrazilo; GAE: equivalente de ácido gálico; GC:Café Verde; GCB: Café verde en grano; ELA-2 (anticuerpo conjugado de elastasa antihumana de ratón): elastasa de neutrófilos; EGCG: galato de epigalocatequina; PC: fosfatidilcolina; CH: colesterol; RBF: matraz de fondo redondo; TEM: Microscopía Electrónica de Transmisión; MTT: 3-(4,5-diemtiltiazol-2-il)-2,5-bromuro de difeniltetrazolio; PDI: índice de polidispersibilidad; IC": concentración inhibitoria media máxima.

Este artículo está extraído de Desai y Mallya.: Desarrollo de gel liposomal antienvejecimiento cargado con extracto de granos de café verde