¿Cuáles son los beneficios del polisacárido de cistanche en la función inmune?
Mar 10, 2022
Contacto: emily.li@wecistanche.com
La actividad inmunológica y el mecanismo de Cistanche Polysaccharide
Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang
[Resumen]Objetivo: Estudiar lainmuneactividad deCistanchePolisacárido(CDPS) y el mecanismo de suinmuneregulación in vitro. Métodos: Se utilizó el método colorimétrico del azul de tiazol (MTT) para observar el efecto de regulación de CDPS (Polisacárido de Cistanche) sobre IQS DEX TNF inhibiendo la proliferación de linfocitos tímicos de ratón in vitro; CDPS (Polisacárido de Cistanche) se utilizó para realizar el ciclo celular y el análisis del ciclo celular mediante citometría de flujo. Determinación de Ca2 intracelular. Resultados: CDPS (Polisacárido de Cistanche) a una concentración más alta puede resistir el efecto inhibidor de ISQDEX sobre la proliferación de linfocitos y el efecto inhibidor de TNF de alta concentración sobre la proliferación de linfocitos, y sinergizar el efecto de promoción de la proliferación de TN F de baja concentración sobre linfocitos; 100 ug/ml 200 ug/ml CDPS (Polisacárido de Cistanche) puede aumentar significativamente las células en la fase de división; mayor concentración (100ug/ml) CDPS (Polisacárido de Cistanche) puede promover significativamente la concentración de iones de Ca en timocitos de ratón. Conclusión: CDPS (Polisacárido de Cistanche) puede promover que las células entren en la fase de división, y se infiere que su efecto promotor sobre la proliferación de linfocitos tímicos de ratón está relacionado con su promoción de la liberación de calcio en linfocitos tímicos de ratón.
Cistanche(CistancheDeserticolaYC Ma) es un material medicinal chino raro y precioso en mi país. Está catalogado como el grado más alto en "Materia médica de Shen Nong".Cistanchetiene las funciones de nutrir la sangre, nutrir el riñón y ayudar al yang, hidratar los intestinos y retrasar el envejecimiento. La investigación farmacológica moderna muestra queCistanchePolisacáridopuede mejorar el cuerpoinmunefunción, promueve la síntesis de ADN, fortalece la fuerza física, mejora la inteligencia y tiene efectos antienvejecimiento evidentes [1]. El autor estudió la regulación de CDPS(Polisacárido Cistanche), un polisacárido componente deCistanche, sobre elinmunefunciónde linfocitos de ratón.
Polisacárido de Cistanchepromoviendoproliferación delinfocitos
1 Material y métodos
1.1 Reactivos y fármacos.
RPM, medio I 1640: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamina: Fábrica de reactivos de Shanghai Dongfeng; Penicilina y estreptomicina: fábrica farmacéutica del norte de China; Concanavalina (ConA), MTT: Empresa SIGM A; Fitohemaglutinina (PHA): Laboratorio Médico de Shanghai; Isoproterenol (ISO): Fábrica farmacéutica Shanghai Tianfeng; Mercaptoetanol: Fluka Company; Suero de ternera recién nacida: Sijiqing Bioengineering Company; La dexametasona (DEX) fue presentada por el Dr. Ma Liang, del Primer Hospital Afiliado de la Facultad de Medicina de la Universidad de Zhejiang; El factor supresor de tumores (TNF) fue proporcionado por Yu Yuehan, profesor del Departamento de Células de la Facultad de Ciencias de la Vida de la Universidad de Zhejiang; El resto de los reactivos son todos de grado analítico de producción nacional.
1.2 Animales de experimentación.
Se compraron ratones ICR, machos, de 68 semanas de edad, con un peso de 18-20g, 22, del Centro de animales experimentales de Zhejiang.
1.3 Extracción del polisacárido de Cistanche [2]:
CistanchePolisacáridoes extraído por nuestro laboratorio! Después de triturar la droga crudaCistanche, se sumerge en etanol caliente, se extrae en agua hirviendo y se precipita en etanol. Enzima neutra combinada con el método Sewag para la desproteinización, cromatografía de intercambio de aniones DEAE-Sephadex A- 50 y cromatografía de filtración en gel Sephacry S-200 para obtener un componente único de CDPS (Polisacárido de Cistanche)). Mantenga seco, use RPMI1640 incompleto para hacer una cierta concentración antes de usar y esterilice por ultrafiltración
1.4 Preparación de linfocitos de bazo y timo [3]:
The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, ajuste la concentración de células de bazo a X 10 /ml y la concentración de timocitos a × 10 grados /ml
1.5 Reacción de proliferación de linfocitos:Según el método de Mosmanmn [4] Mejora: 96-placa de cultivo de células de pocillo, añadir 10/ml de suspensión de células de bazo o agua, 10/ml de suspensión de timocitos 100M1 y diferentes concentraciones de fármacos 10041 en cada pocillo. Cultivar en una incubadora de CO2.37C durante 72 horas. 4 horas antes de finalizar el cultivo, agregar 8μl de MTT (5 mg/ml) a cada pocillo. Al final del cultivo, aspire 150"1 del sobrenadante de cada pocillo y agregue 150M1 de clorhidrato de isopropanol 0,5 N. Agite suavemente en el microagitador para disolver completamente los cristales azules. Mida la DO570 en el lector de microplacas. Configure cada experimento punto como tres réplicas de pozos.
1.6 Determinación de la influencia en el ciclo celular [5]:
{{0}}placa de cultivo celular de pocillos, añadir 4 10 grados/ml suspensión de timocitos 1ml a cada pocillo, añadir varios reactivos y solución de polisacáridos a 2ml en CO fuerte, 37 incubadoras Después de cultivar durante 72h, centrifugar a 1500 r/min durante 15 min, deseche el sobrenadante, agregue 7 etanol para fijar las células precipitadas, almacene a 4 °C para la prueba de espera, lave las células dos veces con PBS, centrifugue a 1500 r/min durante 15 min, deseche el Después de digerir 0,5 ml de 0,1 RNaseA a 4 °C durante 30 min, se tiñeron 50 ug/ml de bromoacetato durante 30 min a 4 °C y se midió la intensidad de fluorescencia de las muestras de células en el citómetro de flujo FACScan. Se recolectaron 10,000 puntos de prueba de celda para cada muestra, y los datos se usaron para análisis de software de triciclo múltiple.
1.7 Determinación de la concentración de iones de calcio intracelular [6]
Tome timocitos de ratón de la misma manera que arriba. Suspender en medio de cultivo RPMI1640 incompleto y ajustar la concentración celular a × 10'/ml. Agregue 1 ml de suspensión de timocitos y 1 μM a cada tubo experimental Fluo-3AM solución de tinción 5 μ1, 2 por ciento F-275μ1, después de la incubación a 37 °C durante 30 min, lave dos veces con RPM1640 incompleto, 1500r/ min, centrifugar durante 10 min, descartar el sobrenadante y agregar diferentes concentraciones de polisacáridos y polisacáridos a las células precipitadas Después de ConA, se midió la intensidad de fluorescencia en el citómetro de flujo FACScan. Se recolectaron los datos de 10,000 puntos de prueba de células para cada muestra y se analizaron con el software CELLQUEST. 1.8 Se utilizaron métodos estadísticos para el análisis de varianza, y el ciclo celular y la medición de iones de calcio se analizaron mediante el software del citómetro de flujo.
Cistanche Polisacárido de cistanche deserticola
2 resultados
2.1 Cistanche Polysaccharide in vitro inhibe la proliferación de linfocitos tímicos de ratón por ISO DEX TNF
El agonista de los receptores adrenérgicos isoproterenol (ISO) y una clase de hormona de la corteza suprarrenal dexametasona (DEX) inhiben la proliferación de linfocitos CDPS (Polisacárido de Cistanche) a una concentración más alta (75 125ug/ml) puede resistir el efecto inhibitorio de ISO DEX sobre la proliferación de linfocitos (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polisacárido) (125 ug/ml) a una concentración más alta puede resistir el efecto inhibidor del TNF y promover sinérgicamente la proliferación de linfocitos con una concentración baja de TNF (Figura 2)
2.2 Regulación del ciclo de los linfocitos del timo por parte del polisacárido Cistanche
CDPS (CistanchePolisacárido) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml se aplicaron tres concentraciones en linfocitos tímicos de ratón durante 72 horas, se midió el contenido de ADN en las células mediante FACS y se calculó el índice de proliferación (PI). según la fórmula. Los resultados muestran que tanto 100 ug/ml como 200 ug/ml pueden aumentar significativamente las células en la fase de división, y el índice de proliferación (68,0 por ciento, 56,6) de ambos es significativamente mayor que el del grupo de control (44,6), y el de 200 ug/ml es ligeramente inferior al grupo de 100 ug/ml porque, a la concentración de 200 ug/ml, su efecto sobre la proliferación celular se ha convertido en una tendencia a la baja [7]. El valor de PI (47,5 por ciento) del grupo de 25 ug/ml no fue significativamente mayor que el del grupo de control.
2.3 El efecto de Cistanche Polysaccharide sobre la concentración de iones de calcio en timocitos de ratón
Los resultados experimentales muestran que una mayor concentración (100 ug/ml) de CDPS (Cistanche polisacáridoe) puede promover significativamente el aumento de la concentración de iones de calcio en los timocitos de ratón En comparación con el grupo de control, existe una diferencia significativa (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">
3 Discusión
Cistanche, comúnmente conocido como"ginseng del desierto", es un tallo seco, escamoso y carnoso deCistanche.Cistanchetiene las funciones de nutrir el yang del riñón, nutrir la esencia, la sangre y los intestinos. Pertenece a un tipo de excitación de la corteza pituitaria-suprarrenal o tiene un efecto similar a una hormona similar a la corteza suprarrenal. Una valiosa medicina china que puede regular elinmunefuncióndel cuerpo. Los resultados de nuestras investigaciones anteriores muestran que CDPS (Polisacárido de Cistanche) in vitro puede promover la proliferación de linfocitos T tímicos que no han sido activados o activados por ConA PHA. Combinado con ConA PHA, hay dos tipos de estimulador de células T, creemos que CDPS (Polisacárido de Cistanche) es un adyuvante para las células T, y también encontramos que CDPS (Polisacárido de Cistanche) puede aumentar significativamente la secreción de linfocitos esplénicos de ratón en concentraciones más altas [8]
Algunos estudios han encontrado que el TNF recombinante puede causar la apoptosis de grupos de linfocitos T humanos y de ratón normales in vitro, y este efecto puede ser potencialmente inhibido por IIL-2 IL-1 IFN e IIL-4 con dexametasona (DEX) Puede inhibir la proliferación de linfocitos al inhibir la expresión de linfocitos y la secreción de IL-2 y regular a la baja la producción de IL-2R de alta afinidad. Este experimento encontró que una mayor concentración de CDPS (CistanchePolisacárido) puede contrarrestar los efectos de la alta concentración de TN F sobre la proliferación de linfocitos. Inhibición, sinérgica con baja concentración de TNF para promover la proliferación de linfocitos, y puede contrarrestar el efecto inhibidor de ISQ DEX sobre la proliferación de linfocitos. Estos efectos son precisamente a través de CDPS (CistanchePolisacárido) para promover la proliferación de linfocitos T y son autocrinos por las células T IL-2 y otras citocinas para completar.
En los últimos años, se han realizado muchos estudios sobre los efectos inmunofarmacológicos de los polisacáridos vegetales, pero pocos estudios sobre lainmunemecanismo de regulación de los polisacáridos, especialmente la vía de transducción de señales de los polisacáridos que actúan sobre los linfocitos con Ca2 como segundo mensajero. No hay informe. Este experimento llevó a cabo una investigación preliminar en esta área. Las moléculas de señalización intracelular incluyen cAM R Ca", IP3 DG cGMP, etc., entre las cuales Ca" tiene un efecto fisiológico extremadamente importante en las células. El aumento de la concentración de Ca² intracelular es un fenómeno importante en la etapa temprana de activación y proliferación de linfocitos. Este proceso ocurre principalmente en las primeras decenas de segundos a minutos cuando las células son activadas por estimuladores. La forma clásica de activación de las células T es el fosfatidilinositol (PIB) para metabolizar el músculo fosfatidilo. El metabolito del alcohol 1,4.5-inositol trifosfato (IP3) puede promover la liberación de Ca" almacenado en la malla interna uniéndose a los receptores de la malla interna, aumentando el nivel de Ca2 intracelular y la concentración de Ca intracelular * aumenta. Alto puede promover la producción de NF-AT (factor desnudo de células T activadas), este último tiene el efecto de promover la expresión del gen IIL-2. Los resultados experimentales muestran que una concentración más alta (100ug/ml ) del CDPS (CistanchePolisacárido) es eficaz durante 5 10 min El tiempo tiene un efecto significativo en el aumento de la concentración de Ca* en los timocitos de ratón y tiene un efecto sinérgico con ConA. Por lo tanto, especulamos que CDPS (Polisacárido de Cistanche) promueve la liberación de calcio en linfocitos tímicos de ratón para aumentar la concentración de iones de calcio intracelular. El aumento promueve la expresión del gen IL-2 y conduce a la proliferación de células T, que es uno de los fundamentos teóricos deCistanchepolisacáridosefecto regulador en el cuerpo
Polisacárido de Cistanche
Referencias
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