Parte 2: Los extractos de Cistanche Deserticola pueden antagonizar la inmunosenescencia y prolongar la vida útil en ratones propensos a la senescencia acelerada en ratones 8 (SAM-P8)
Mar 12, 2022
Contacto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correo electrónico:audrey.hu@wecistanche.com
3.5. extractos dfCistanche desertica(ECD)Promover.
Apoptosis e inhibición de la necrosis de linfocitos en ratones SAM-P8. Los niveles de necrosis y apoptosis en las poblaciones de linfocitos en sangre se analizaron mediante doble tinción con Anexina V-FITC V/PI. Esto reveló que la proporción de linfocitos necróticos en SAM-P8mic fue significativamente mayor que en los animales de control SAM-R1, mientras que la proporción de linfocitos apoptóticos fue menor (Figura 7). La suplementación de la dieta de ratones SAM-P8 con tres dosis diferentes de ECD fue capaz de inhibir los niveles de necrosis observados en las poblaciones de linfocitos periféricos, mientras que solo los dos niveles más altos de suplementación de ECD produjeron un cambio significativo en el nivel de linfocitos apoptóticos (Figura 7).
3.6.Extractos deCistanche desertica(ECD) Disminuir la citocina proinflamatoria IL-6 en ratones SAM-P8.
Como un indicador adicional de la capacidad de ECD para influir en los cambios relacionados con la edad en el sistema inmunológico, el efecto de la suplementación de la dieta ECD en el nivel de una serie de citocinas (IFN-, TNF-, IL-2.IL{4 }}.IL-10, GM-CSF e IL-3) se analizó mediante análisis de matriz de perlas citométricas (CBA), que implica la tinción con anticuerpos marcados con tinte fluorescente junto con perlas citométricas de captura. Los resultados (Figura 8) mostraron que la citoquina inflamatoria IL-6 no aumentó en ratones SAM-P8 de 8-meses de edad en comparación con los ratones SAM-R1 de control de la misma edad, pero aumentó significativamente cuando en comparación con ratones SAM-R1 de 6-meses de edad (no se muestran los resultados). Sin embargo, la suplementación dietética con dosis altas y medias de ECD pudo producir una disminución estadísticamente significativa en el nivel plasmático de IL-6 (Figuras 8(a) y 8(b),<>
(IFN-, TNF-, IL-2, IL-10, GM-CSF e IL-3) no mostraron variaciones significativas entre los grupos de ratones tratados con SAM-P8, SAM-R1 y ECD (datos no mostrado).
4. Discusión
La defensa inmunitaria contra los nuevos microorganismos invasores o las células tumorales endógenas depende de la diversidad del repertorio de células T, que a su vez depende de la generación y el mantenimiento de células T vírgenes[19]. Durante el proceso de envejecimiento, se ha demostrado que la diversidad del repertorio de células T se reduce drásticamente debido al agotamiento progresivo de las células T vírgenes en la reserva periférica. Se cree que esta escasez de células T vírgenes que responden es la responsable de la susceptibilidad de las personas mayores a las infecciones, el cáncer y los malos resultados después de la vacunación [20]. Varias intervenciones, incluida la restricción calórica [7], el ejercicio [21] y la suplementación con vitamina E [8], se han utilizado con éxito para reponer las células T vírgenes y, por lo tanto, prolongar la vida útil y reducir la aparición de infecciones y cáncer entre los ancianos. En este estudio, hemos demostrado que ECD es capaz de aumentar el nivel de células T vírgenes en el grupo periférico y hubo una prolongación concomitante de la vida útil y una reducción en la frecuencia de formación de tumores en ratones con senescencia acelerada (grupo terapéutico ECD versus SAM-P8 ,0 frente a 1/6). Por lo tanto, parece razonable concluir que la capacidad de ECD para revertir el agotamiento dependiente de la edad de las células T vírgenes periféricas puede contribuir a sus efectos conocidos en la reducción de la enfermedad relacionada con la edad que se deriva de observaciones clínicas a largo plazo.
5. Materiales y Métodos
5.1.Materiales.
En la respuesta inmune normal, luego de la contención y eliminación de un antígeno extraño, la mayoría de las células T expandidas clonalmente experimentan apoptosis y solo una pequeña fracción se retiene como células T de memoria. En consecuencia, a medida que el organismo inmunocompetente envejece, las células T de memoria periféricas se acumulan como resultado de una vida de exposición a antígenos extraños que convierten las células T vírgenes en células de memoria [22,23]. Varios estudios han sugerido que los defectos de la apoptosis de los linfocitos en animales mayores y humanos también contribuyen a la ampliación del compartimento de las células T de memoria [24,25]. Además, un estudio reciente ha demostrado que una sobreabundancia de células T de memoria periférica puede inhibir la proliferación homeostática de células T vírgenes [26]. Estos estudios recientes también han sugerido que las células T de memoria pueden secretar altos niveles de citoquinas proinflamatorias que pueden contribuir a inflamaciones persistentes en varios tejidos de los ancianos. En consecuencia, la reducción del nivel de células T de memoria debería ser beneficiosa tanto para la proliferación homeostática de células T vírgenes como para aliviar el exceso de estado inflamatorio observado en organismos más viejos. En este estudio, se demostró que la suplementación dietética con ECD puede reducir el nivel de células T de memoria periféricas y aumentar los niveles de células T vírgenes. Además, la suplementación con ECD aumentó el espacio de apoptosis para nuevos linfocitos vírgenes. También se inhibió la necrosis en los linfocitos periféricos, que es inducida principalmente por el estrés oxidativo en animales seniles.
Existe amplia evidencia que indica que el envejecimiento en un organismo no solo se caracteriza por una inmunodeficiencia sino también por un aumento de la inflamación crónica[27]. El estado proinflamatorio se manifiesta más claramente en un aumento de IL-1 en la circulación junto con una mayor frecuencia de enfermedades inflamatorias crónicas asociadas con el envejecimiento, como la enfermedad de Alzheimer, las enfermedades de Parkinson y la aterosclerosis. Una de las citocinesis inflamatorias más destacadas es la IL-6 y su concentración plasmática aumenta con el envejecimiento y las enfermedades relacionadas con la edad [18,28,29], y los estudios epidemiológicos sugieren que la IL-6 es un buen biomarcador de la longevidad ya que está estrechamente relacionado con la mortalidad en cohortes de pacientes de edad avanzada [30,31]. De acuerdo con esto, una serie de intervenciones terapéuticas que disminuyen la concentración de IL-6 pueden
Figura 6: Los efectos de la suplementación dietética ECD sobre el antígeno de células madre-1 (Sca-1) en los linfocitos de sangre periférica de ratones SAM-P8. Los ratones SAM-P8 macho y SAM-RI de control de ocho meses de edad se dividieron en 5 grupos. Los 3 grupos de tratamiento de animales SAM-P8 fueron alimentados durante cuatro semanas con dietas suplementadas con dosis baja (100 mg/kg), media 500 mg/kg) y alta 250 mg/kg) de ECD y los dos grupos de animales de control fueron alimentados con el misma dieta sin suplementos. Después de ayunar durante 12 horas, se recolectó sangre periférica de animales anestesiados y se sometió a análisis FACS tal como se describe en la Sección 5. (a) Gráficos FACS representativos de los diferentes grupos de ratones generados al seleccionar el antígeno de células madre-1 (Sca{{ 20}})células positivas.(b) Histograma que muestra el porcentaje de antígeno de células madre-1 (Sca-1)células positivas en sangre periférica de los diferentes grupos de animales. Las barras representan la SD de la carne (en cada grupo,{ {23}}).w*<0.01 sam-p8="" versus="" sam-r1;**=""><0.01 each="" treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
Figura 7: Los efectos de la suplementación dietética de ECD sobre la apoptosis y la necrosis de linfocitos en ratones SAM-P8 de edad avanzada. Los ratones SAM-P8 macho y SAM-RI de control de ocho meses de edad se dividieron en 5 grupos. Los 3 grupos de tratamiento de animales SAM-P8 fueron alimentados durante cuatro semanas con dietas suplementadas con dosis bajas (100 mg/kg), medias (500 mg/kg) y altas (2500 mg/kg) de ECD y los dos grupos de animales de control fueron alimentados con la misma dieta sin suplementos. Después de ayunar durante 12 horas, se recolectó sangre periférica de animales anestesiados y se sometió a análisis FACS, todo como se describe en la Sección 5. (a) Gráficos FACS representativos de los diferentes grupos de ratones generados al seleccionar linfocitos de sangre teñidos doblemente con Anexina V-FITC /PI. (b) Histograma que muestra el porcentaje de linfocitos apoptóticos (células positivas para Anexina V-FITC) en sangre periférica de los diferentes grupos de animales. (c) Histograma que muestra el porcentaje de linfocitos necróticos (células positivas para PI) en sangre periférica de los diferentes grupos de animales. Las barras representan la medida SD (en cada grupo,=10)."<0.05 sam-p8=""><0.05each treated="" groupversussam-p8group(by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
Figura 8: Efectos de la suplementación dietética de ECD sobre el nivel de citoquina L6 proinflamatoria en suero de ratones SAM-P8. Los ratones machos SAM-P8 y SAM-RI de control de ocho meses de edad se dividieron en 5 grupos. Los 3 grupos de tratamiento de animales SAM-P8 se alimentaron durante cuatro semanas con dietas kg) y dosis altas (2500 mg/kg) de ECD, y los dos grupos de animales de control se alimentaron con la misma dieta sin suplementación. Después de ayunar durante 12 horas, se recogieron los plasmas y se determinaron las citocinas plasmáticas en los diferentes grupos de animales mediante inmunoensayo de matriz de perlas citométricas, todo como se describe en la Sección 5. (a) Gráficos EACS representativos de los diferentes grupos de ratones generados por gatingonIL-6 matriz de perlas citométricas. (b) Histograma que muestra las concentraciones de citoquina IL6 en plasma de los diferentes grupos de animales. Las barras representan la media ± DE (en cada grupo,=10).<0.001each treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
aliviar las enfermedades relacionadas con la edad [18]. En este contexto, fue significativo que en este estudio la suplementación dietética con ECD fuera capaz de reducir las concentraciones periféricas de IL-6, con la implicación de que este efecto puede contribuir a los mecanismos subyacentes de reducción de la frecuencia de enfermedades relacionadas con la edad que se han obtenido a través del uso a largo plazo de ECD en la práctica clínica.
Junto con los cambios en la respuesta inmunitaria adaptativa que se producen con la edad, también hay cambios importantes en la inmunidad innata a medida que envejece el organismo. Entre estos, los cambios en las células asesinas naturales [18], la primera línea de componentes celulares que proporciona la lisis citotóxica directa de las células tumorales y las células infectadas por virus, han sido extensos ya que las personas mayores muestran una mayor susceptibilidad tanto al desarrollo de tumores como a las infecciones por virus [32 ]. Este estudio indicó que CD3 más Ly49 más células NK estaban presentes en niveles significativamente más bajos en ratones seniles SAM-P8 en comparación con los animales de control SAM-R1, lo que puede ser otro factor subyacente que explica la mayor susceptibilidad de los ratones ancianos al cáncer y la infección por virus. Por lo tanto, el aumento en el nivel de células NK observado en este estudio después de la suplementación dietética con ECD podría ser beneficioso para los organismos de edad avanzada en términos de mayor resistencia al desarrollo de tumores y la infección por virus. Sin embargo, se requieren más estudios para aclarar el papel del efecto de ECD en las células NK en organismos envejecidos.
En conclusión, este estudio ha demostrado que el tratamiento de la subcepa de ratón propensa a la senescencia acelerada, SAM-P8, con ECD puede inducir una reversión significativa de las alteraciones de la inmunosenescencia relacionadas con la edad. Se redujeron las deficiencias en las poblaciones de células T ingenuas y células NK tanto periféricas como del bazo, mientras que también se redujeron los niveles de células de memoria redundantes. Además, la suplementación dietética con ECD pudo suprimir tanto la necrosis en los linfocitos periféricos como los niveles de la citoquina proinflamatoria, IL-6. Finalmente, además de provocar cambios en el sistema inmunológico senil, la suplementación dietética ECD prolongó significativamente la vida útil del micrófono senileSAM-P8.
Referencias
[1] Y.Jiang y PF.Tu, "Análisis de constituyentes químicosCistancheespecies, "Journal of Chromatography A, vol.1216, no. 11, pp.1970-1979,2009.
[2] Q. Xiong K. Hase Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba y SKadota. "Actividad hepatoprotectora de los feniletanoides deCistanche desertica," PlartaMedica,vol.64,no.2,pp.120-125,1998.
[3] “Inmunología y envejecimiento en Europa. Actas de la 2ª Conferencia sobre Biología Básica e Impacto Clínico de la Inmunosenescencia Marzo 22-26, 2001, Córdoba, España, “Gerontología Experimental, vol.37, no.{{5} }, págs.183-473, 2002.
[4] G.-D. Xuan y C.-Q. Liu, "Investigación sobre elefecto de los glucósidos feniletanoides (PEG) de la Cistanche deserticolaenantienvejecimientoen ratones envejecidos inducidos por D-galactosa", Journal of Chinese Medicinal Materials, vol31, no 9, pp. 1385-1388, 2008.
[5] D.Aw, ABSilva y DBPalmer, "Desafíos emergentes de la inmunosenescencia para una población que envejece", Immwmology, vol.120, no.4, pp.435-446,2007.
