El ADN metiloma y el transcriptoma identificaron genes y vías clave implicados en la formación de la cáscara de huevo moteada en gallinas ponedoras ancianas
Dec 21, 2023
Abstracto
Fondo
La calidad de la cáscara de los huevos de las aves de corral está estrechamente relacionada con la rentabilidad de la producción de huevos. Las motas de la cáscara del huevo reflejan un rasgo de calidad importante que influye en la apariencia del huevo y en la preferencia del cliente. Sin embargo, el mecanismo de formación de motas sigue siendo poco conocido. En este estudio, comparamos sistemáticamente los índices inmunes y antioxidantes del suero de gallinas que ponen huevos moteados y normales. Se utilizaron análisis de transcriptoma y metiloma para dilucidar el mecanismo de formación de motas en la cáscara del huevo.
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Resultados
Los resultados mostraron que se identificaron siete genes expresados diferencialmente (DEG) entre los grupos normal y moteado. El análisis de enriquecimiento del conjunto de genes (GSEA) reveló que los genes expresados se enriquecieron principalmente en la vía de señalización del calcio, la adhesión focal y la vía de señalización MAPK. Además, se detectaron 282 genes metilados diferencialmente (DMG), de los cuales 15 genes estaban asociados con el envejecimiento, incluidos ARNTL, CAV1 y GCLC. El análisis de la vía mostró que los DMG estaban asociados con la inmunidad mediada por células T, la respuesta al estrés oxidativo y la respuesta celular al estímulo de daño del ADN. El análisis integrador de los datos de transcriptoma y metilación del ADN identificó a BFSP2 como el único gen superpuesto, que se expresaba en niveles bajos y estaba hipometilado en el grupo moteado.
Conclusiones
En general, estos resultados indican que los genes y vías relacionados con el envejecimiento y el sistema inmunológico desempeñan un papel crucial en la formación de cáscaras de huevo moteadas, proporcionando información útil para mejorar la calidad de la cáscara de huevo.
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Palabras clave
Gallinas ponedoras, Huevos moteados, Transcriptoma, Metilación del ADN, Inmunidad
Fondo
Los huevos de ave son una de las fuentes de proteínas más importantes y su costo relativamente bajo los hace populares entre los consumidores. Durante las últimas cuatro décadas, la producción de huevos ha mejorado considerablemente debido al desarrollo de razas de huevos especializadas y a la selección genética, con el objetivo de "alimentar a las gallinas ponedoras durante 100 semanas para producir 500 huevos" [ 1, 2]. Sin embargo, lograr este objetivo se ha visto limitado por la disminución gradual de la calidad y la fisiología de la cáscara del huevo asociada con el envejecimiento de las gallinas, lo que resulta en un aumento del peso de la cáscara, un color más claro y cáscaras moteadas [3]. La mancha marrón rojiza, un rasgo importante de la calidad de la cáscara del huevo, a menudo aparece en el extremo romo de la cáscara marrón, lo que afecta considerablemente la apariencia del huevo y la preferencia del cliente. El grado de moteado de la cáscara del huevo se evalúa mediante un método de puntuación. Las motas se pueden calificar según la intensidad del pigmento, la distribución y el tamaño de las motas [4]. Además, la heredabilidad de las cáscaras de huevo moteadas oscila entre 0,15 y 0,2, lo que indica una determinación genética [5]. Además, un estudio previo indicó que las gallinas de edad avanzada tienen una mayor tasa de cáscaras de huevo moteadas que las gallinas más jóvenes, alcanzando el 20% después de las 60 semanas de edad [6]. La glándula de la cáscara del huevo es un órgano de formación de huevos que desempeña un papel fundamental en la estructura de la cáscara y la formación del color. Durante la formación del huevo, la yema viaja a través del infundíbulo, magnum e istmo y llega a la glándula de la cáscara del huevo, que secreta una gran cantidad de calcio, pigmento, cutícula y otras sustancias, formando una estructura completa de la cáscara del huevo y una cutícula externa [7–9 ]. Cualquier modificación o daño a la glándula de la cáscara del huevo afecta la formación y pigmentación de la estructura de la cáscara del huevo [10-12]. La metilación del ADN es una de las primeras vías de modificación conocidas e implica la transferencia de grupos metilo al quinto sitio de carbono de la citosina para formar 5-metilcitosina [13]. La metilación del ADN juega un papel importante en el proceso de envejecimiento de los animales, regulando la expresión genética relacionada con la edad y las etiologías de enfermedades neurológicas, inmunológicas y metabólicas [14-17]. Además, la metilación del ADN combinada con factores ambientales puede causar diferentes fenotipos durante el envejecimiento [18]. Varios fenotipos complejos del ganado se han relacionado con la metilación del ADN [19, 20]. Recientemente, la secuenciación de ARN (RNA-seq) ha sido útil para revelar los genes y las vías subyacentes a los rasgos a nivel transcripcional [21-24], como el desarrollo del músculo embrionario, la eficiencia alimenticia y el tamaño de la camada. Nuestro estudio anterior demostró que, aunque la aparición de cáscaras de huevo moteadas no afecta el rendimiento de las gallinas ponedoras (datos no publicados), las moteadas pueden afectar la apariencia de los huevos y reducir considerablemente su valor económico. Además, los mecanismos moleculares de la formación de huevos moteados no se conocen bien. Por lo tanto, este estudio tuvo como objetivo dilucidar el mecanismo de formación de la cáscara de huevo moteada utilizando técnicas transcriptómicas y de metilación del ADN. Dado que las cáscaras de huevo moteadas son hereditarias y están relacionadas con la edad, utilizamos una combinación de análisis transcriptómicos y de metilación del ADN para explorar los genes y vías clave involucrados en la formación de la cáscara de huevo moteada. Se anticipa que los hallazgos de este estudio mejorarán la comprensión del mecanismo molecular de la formación de rasgos en la cáscara del huevo, lo que sería útil para la cría de animales.
Fig. 1 Huevos normales y moteados de gallinas ponedoras ancianas. A Huevo normal, B Huevo moteado
Tabla 1 Parámetros bioquímicos séricos de los grupos normal y moteado.
Resultados
Parámetros bioquímicos séricos.
A typical egg and speckled egg are shown in Fig. 1. Serum antioxidant and immune indices were measured to determine the physiological status of the laying hens. Serum biochemical parameters are listed in Table 1. Serum levels of immunoglobulin G (IgG) and immunoglobulin A (IgA) are common indicators of humoral immune function. Birds in the normal group had a higher (p = 0.028) IgA content than those in the speckle group. Superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), total antioxidant capacity (T-AOC), glutathione (GSH), and glutathione peroxidase (GSH-PX) are important antioxidant enzymes in the body. MDA is one of the products formed by the reaction of lipids with oxygen radicals, and its content represents the degree of lipid peroxidation. These indices are important in evaluating the oxidative stress process. However, there were no differences (p >0.05) en parámetros antioxidantes entre los grupos normal y moteado.
Perfil transcriptoma de la glándula de la cáscara del huevo.
Se construyeron seis bibliotecas de ADNc a partir de los grupos moteado y normal. Tras el control de calidad, se obtuvieron un total de 615.170.158 lecturas sin procesar y 604.275.600 lecturas limpias (98,22% de las lecturas sin procesar). Después de la alineación con el software HISAT2, la tasa de mapeo fue del 90,75 al 93,18% y la tasa de mapeo única en todas las muestras fue superior al 73,47% (Tabla complementaria S3). Los niveles de expresión genética se ilustran mediante un mapa de calor de conglomerados y un análisis de componentes principales (PCA). No hubo diferencias significativas en los perfiles de expresión génica de las muestras de los grupos moteado y normal, ya que las muestras no formaron grupos distintos (Fig. 2A, B). Se identificaron un total de siete genes expresados diferencialmente (DEG) entre los grupos normal y moteado (p<0.05, |log2 Fold Change|>1), incluidos dos genes regulados positivamente y cinco genes regulados negativamente (Tabla 2). El análisis de enriquecimiento del conjunto de genes (GSEA) mostró que cuatro vías se enriquecieron significativamente con los genes expresados (Tabla complementaria S4). Las puntuaciones de enriquecimiento normalizado (NES) negativas indicaron niveles de expresión más bajos para algunas vías en el grupo normal en comparación con las del grupo moteado, siendo la vía de señalización del calcio, la interacción ligando-receptor neuroactivo, la adhesión focal y la vía de señalización MAPK las vías con mayor expresión más baja (Fig. 2C). Los DEG de los árboles (BFSP2, IQSEC, TMOD4) identificados por RNA-seq se verificaron mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR). Una expresión similar de los tres genes fue evidente usando RNA-Seq y qRT-PCR, y el coeficiente de determinación (R2) alcanzó 0.93 (Fig. 2D), lo que indica que los datos de RNA-seq eran confiables.
Tabla 2 Genes expresados diferencialmente (DEG) entre las gallinas que pusieron huevos moteados y normales
Fig. 2 El perfil transcriptoma de la glándula de la cáscara del huevo. A Mapa de calor de los niveles de expresión génica, B Análisis de componentes principales de todos los genes utilizando valores de expresión normalizados de DEseq2, C Tres conjuntos de genes representativos de los resultados del análisis de enriquecimiento del conjunto de genes, D Los resultados de la verificación de qPCR de genes expresados diferencialmente
Perfil de metilación del ADN de la glándula de la cáscara del huevo.
A total of 564,415,302 and 581,414,308 clean reads were obtained from the speckle and normal groups, respectively, after quality control (Supplementary Table S5), of which 73–78% were uniquely mapped to the converted chicken reference genome (GRCg6a). The cytosine (C) methylation rate of the six eggshell gland samples was approximately 3.4%, and the cytosine site methylation of CpG ranged from 55.5–to 63.9% in the two groups. The cytosine site methylation of CHH and CHG (H represents A, C, or T) was detected at a low proportion (0.3–0.4%) (Supplementary Table S5). Pearson correlation analysis of the CpG bases suggested that all samples were highly correlated (r>{{0}}.89) (Fig. 3A). PCA mostró que las muestras de los dos grupos no eran significativamente diferentes, ya que no formaban grupos separados (Fig. 3B). No hubo diferencias significativas en los niveles de metilación de CG, CHG y CHH entre los dos grupos (Fig. 3C). Sin embargo, el grupo moteado mostró un nivel de metilación de CG más alto que el grupo normal. Las regiones de repetición y exón exhibieron los niveles de metilación de CG más altos, mientras que la región 5 'UTR tuvo los niveles de metilación de CG más bajos (Fig. 3D). Se identificaron un total de 2788 regiones metiladas diferencialmente (DMR) entre los grupos normal y moteado. Los DMR se ubicaron principalmente en los intrones (47,45%), seguidos de la región intergénica (36,05%), exón (8,29%), promotor (5,95%), 3′-UTR (1,18%) y 5′-UTR ( 0,97%) regiones (Fig. 4). Además, se identificaron 282 genes metilados diferencialmente (DMG), incluidos 172 genes hipermetilados y 74 genes hipometilados en la región promotora. Además, se encontraron 36 DMG en el cuerpo del gen, incluidos 30 genes hipermetilados y seis genes hipometilados. Convertimos DMG en sus ortólogos humanos y obtuvimos 158 símbolos genéticos que se cargaron en Metascape para anotaciones funcionales, ontología genética (GO) y análisis de vías. Los genes se enriquecieron en 176 procesos biológicos GO, incluida la regulación de la respuesta celular al estímulo del factor de crecimiento y la inmunidad mediada por células T, la respuesta al estrés oxidativo y la respuesta celular al estímulo del daño del ADN.
Fig. 3 Los niveles generales de metilación en las gallinas ponedoras de huevos moteados y normales. Un análisis de correlación de los niveles de metilación entre muestras de los dos grupos. B Análisis de componentes principales del nivel de metilación de todas las muestras. C Histograma del nivel de metilación del sitio de citosina en los dos grupos. D Gráfico de líneas de los niveles de metilación de diferentes regiones genómicas. Las regiones genómicas de cada gen se dividieron en 20 contenedores; Luego se promedió el nivel de metilación del sitio de citosina de las regiones funcionales correspondientes de todos los genes.
Fig. 4 Histograma de anotación de regiones metiladas diferencialmente (DMR) en regiones funcionales genómicas
Fig. 5 Términos A GO de DMG. B La relación entre la expresión genética y los niveles de metilación del ADN en el grupo moteado. C La relación entre la expresión genética y los niveles de metilación del ADN en el grupo normal. D Diagrama de Venn de genes superpuestos entre DEG y DMG
El análisis de las vías mostró que los genes estaban enriquecidos en 19 vías de la Enciclopedia de Genes y Genomas de Kyoto (KEGG), incluida la degradación del ARN, la regulación de los mediadores inflamatorios de los canales TRP y la vía de señalización del TNF. Además, se detectaron 25 conjuntos de genes, incluida la señalización por Rho GTPasas, el ciclo RHO GTPasa y el ciclo CDC42 GTPasa. Los 20 grupos de ontologías enriquecidos principales se muestran en la Fig. 5A. Entre los 158 genes humanos homólogos, 15 estaban relacionados con el envejecimiento o la longevidad (Tabla complementaria S6). Se realizó un análisis integrativo de la secuenciación de bisulfito del genoma completo (WGBS) y los datos de RNA-seq para determinar la relación entre la metilación del ADN y los niveles de expresión génica (Fig. 5B y C). Hubo una correlación negativa entre la metilación del ADN y los niveles de expresión génica aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción (TSS) y aguas abajo del sitio de terminación de la transcripción (TTS); sin embargo, no hubo correlación entre la metilación del ADN y los niveles de expresión genética en el cuerpo del gen. El diagrama de Venn mostró que BFSP2 era el único gen superpuesto entre DMG y DEG (Fig. 5D).
Discusión
Estudios realizados durante varios años han demostrado que la formación de motas en las cáscaras de los huevos es hereditaria, y las gallinas ponedoras de edad avanzada producen una mayor tasa de cáscaras de huevos moteadas que las gallinas más jóvenes [6]. El envejecimiento de las gallinas ponedoras suele ir acompañado de inflamación crónica y estrés oxidativo [25, 26]. Los parámetros sanguíneos de los animales reflejan su estado fisiológico y nutricional. SOD, GSH-PX, GSH, CAT y T-AOC son componentes del sistema de defensa antioxidante. Los resultados del presente estudio indican que no hubo diferencias significativas en la capacidad antioxidante de las gallinas envejecidas entre los grupos moteados y normales, lo cual es contrario a los hallazgos de Moreno y Osorno [27]. Moreno informó que las aves que ponen huevos con cáscaras moteadas pueden sufrir estrés fisiológico debido a la función prooxidante del principal componente moteado y tienen una mayor tolerancia al estrés oxidativo [28]. Las diferencias en los resultados podrían atribuirse a las diferentes especies utilizadas en los estudios.
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Las inmunoglobulinas son proteínas implicadas en procesos antiinflamatorios y desempeñan funciones reguladoras en reacciones inflamatorias [29]. Un estudio anterior demostró que las aves de herrerillo común que ponen huevos moteados exhiben niveles bajos de inmunoglobulinas totales [30]. De manera similar, los resultados del presente estudio mostraron que las aves del grupo moteado tenían niveles séricos de IgA sustancialmente más bajos en comparación con las del grupo normal, lo que indica que las gallinas del grupo moteado pueden tener una menor capacidad antiinflamatoria, lo cual es consistente con la hallazgos de Martínez y Merino [30]. La IgA, como uno de los indicadores importantes en la evaluación de la función inmune humoral de las aves de corral, tiene funciones antivirales, antibacterianas y antitoxinas [31]. Los estudios han demostrado que la suplementación dietética con glucano de levadura puede aumentar el contenido sérico de IgA. El mayor contenido de IgA puede aumentar la capacidad de un individuo para mantener la homeostasis inmune, lo que genera posibles beneficios para la salud [32]. Los estudios también han demostrado que a medida que las gallinas ponedoras envejecen, su resistencia a los patógenos externos disminuye [33]. Cuando los patógenos ingresan al cuerpo de gallinas ponedoras ancianas, el sistema de defensa de la mucosa de los tejidos del oviducto puede dañarse debido a la disminución concomitante de la inmunidad [34]. Sin embargo, un nivel más alto de IgA puede aumentar la capacidad del cuerpo para mantener la homeostasis inmune, previniendo la invasión de patógenos en el tejido submucoso del oviducto, manteniendo así una buena calidad de la cáscara del huevo. Además, el análisis de RNA-seq identificó siete DEG entre los grupos moteado y normal, incluidos IQSEC3, BFSP2, TMOD4, LOC112530987, GABRA2, TRIQK y un pseudogén. IQSEC3, un miembro de la familia de factores de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) ARF resistente a brefeldina A [35, 36], promueve el desarrollo de sinapsis inhibidoras mediante la unión con gefirina [37]. IQSEC3 es funcionalmente importante para mantener la actividad de la red in vivo. La caída de IQSEC3 en la circunvolución dentada del hipocampo en roedores disminuye la densidad de las sinapsis GABAérgicas y aumenta la susceptibilidad a convulsiones graves [38]. Sin embargo, no existen estudios sobre la función de IQSEC3 en aves de corral.
El ácido gamma-aminobutírico (GABA) es el principal neurotransmisor inhibidor en el sistema nervioso central de los vertebrados [39] y puede cambiar la estructura del receptor y la permeabilidad iónica del receptor correspondiente [40]. El GABA puede actuar directamente sobre las células del músculo liso tubular a través de GABAA-R o GABAB-R, que se encuentran en la pared de las trompas de Falopio y participan regulando la contractilidad tubular en conejos [39], humanos [41] y ratas [42]. Los estudios han demostrado que GABRA1 juega un papel importante en la producción de huevos. Los niveles elevados de expresión de GABRA1 pueden inhibir la proliferación de las células de la granulosa, mejorar la apoptosis celular e inhibir la síntesis y secreción de progesterona, lo que resulta en una reducción de la producción de óvulos [43-45]. El ritmo de puesta de huevos de las gallinas ponedoras es un proceso neuromodulador [46, 47]. Con base en estos resultados, especulamos que existe una relación sutil entre la formación de motas en la cáscara del huevo y el sistema nervioso, aunque el vínculo preciso requiere más investigación.
TMOD4, un miembro de una familia de proteínas que cubren los extremos puntiagudos de los filamentos de actina [48], se expresa en el músculo esquelético y el corazón [49, 50]. Los estudios han informado que TMOD4 está presente en el cristalino, los eritrocitos y las fibras del músculo esquelético de contracción rápida de pollos adultos [51]. Se ha descubierto que TMOD4 participa en el ensamblaje de miofibrillas, la contracción y la diferenciación muscular [52-54]. La contracción del músculo oviducto hace que el óvulo gire en el útero, lo que permite que el pigmento se deposite uniformemente en la superficie de la cáscara del huevo. Especulamos que la formación de huevos moteados puede estar relacionada con la contracción del músculo del oviducto, pero se necesita más investigación. Se utilizó GSEA para analizar la función biológica de todos los genes expresados para evitar la pérdida de algunos conjuntos de genes interesantes mediante la estrategia de corte libre. Los genes expresados se enriquecieron principalmente en la vía de señalización del calcio, la adhesión focal, la vía de señalización MAPK y la interacción ligando neuroactivo-receptor. Se ha informado que en el proceso de mineralización de la cáscara del huevo, genes relacionados con la vía de señalización del calcio participan en la absorción de iones de calcio y carbonato de la sangre y son transportados al líquido uterino a través de las células epiteliales del oviducto para participar en la cáscara del huevo. mineralización [46, 55]. Cuando los iones de calcio y carbonato continúan mineralizándose en la cáscara del huevo, el huevo gira continuamente en el útero y el pigmento de la cáscara, la protoporfirina-IX, puede depositarse uniformemente en la superficie de la cáscara del huevo [56]. Especulamos que la diferencia en el suministro de iones de carbonato y calcio entre los dos grupos podría haber llevado a la distribución desigual del pigmento en el proceso de deposición en la superficie de la cáscara del huevo, causando motas en la cáscara del huevo.
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Las adherencias focales son estructuras macromoleculares que forman conexiones mecánicas entre el citoesqueleto de actina intracelular y los componentes de la matriz extracelular [57]. Se ha demostrado que las adherencias focales desempeñan un papel vital en el mantenimiento de la morfología y función del oviducto en las ranas marrones chinas [58], mientras que las adherencias focales también han estado implicadas en el mecanismo de las diferencias en la producción de huevos en las gallinas Jinghai Yellow y Nandan-Yao. pollos domésticos [59, 60]. En el estudio actual, las adherencias focales estuvieron involucradas en la formación de motas de la cáscara del huevo, pero el mecanismo de participación específico aún requiere más investigación. La vía MAPK tiene tres miembros destacados: la proteína quinasa activada por mitógenos p38 (p38 MAPK), la quinasa N-terminal Jun (JNK) y la quinasa de respuesta extracelular (ERK), que en conjunto regulan el crecimiento, la diferenciación, la apoptosis, la inflamación y otros factores. importantes respuestas fisiológicas [61]. Se ha demostrado que la vía ERK 1/2 MAPK desempeña un papel importante en el crecimiento, desarrollo y diferenciación del oviducto y el útero [62]. Wang y cols. utilizaron vanadio para inducir el crecimiento de las células epiteliales del oviducto y descubrieron que los miembros de la familia MAPK se activaban, lo que provocaba estrés oxidativo del oviducto, reducción de la actividad celular y apoptosis celular [63]. En el estudio actual, encontramos que la vía de señal MAPK en el grupo moteado estaba sustancialmente enriquecida y, por lo tanto, especulamos que las gallinas que pusieron huevos moteados podrían haber experimentado algo de estrés, con algún impacto en el oviducto. Las interacciones ligando neuroactivo-receptor están relacionadas con la síntesis de hormonas esteroides en las gónadas. Desempeñan un papel esencial en la regulación de la producción de huevos y la función ovárica en las aves de corral [59, 64]. El gen expresado diferencialmente, GABRA2, también pertenece a la vía de interacción ligando neuroactivo-receptor. Dado que las manchas en la cáscara del huevo aparecen como resultado de la producción de huevos, y la producción de huevos es un proceso rítmico, el enriquecimiento sustancial de las interacciones ligando neuroactivo-receptor en el grupo moteado nos lleva a especular que puede haber diferencias en el rendimiento de la producción de huevos entre las gallinas que ponen huevos moteados. y gallinas que ponen huevos normales, pero esto requiere mayor exploración.
Los factores ambientales pueden afectar la expresión genética mediante modificaciones epigenéticas. La combinación de modificaciones genéticas y epigenéticas podría ser útil para explicar el mecanismo de formación de rasgos complejos [19, 65]. La relación entre la metilación del ADN en todo el genoma y la expresión génica se ha estudiado durante años [66, 67]. Generalmente, la metilación del ADN reprime la expresión genética [68]. Los resultados del presente estudio son consistentes con hallazgos anteriores en que los niveles altos de expresión genética se asocian con una baja metilación del ADN en la región promotora [67, 68]. Sin embargo, no se observó ninguna tendencia obvia en la región del cuerpo del gen, lo que puede deberse a que los patrones de expresión genética también están regulados por otros factores [69, 70]. El análisis de enriquecimiento funcional reveló que los DMG se enriquecieron principalmente en inmunidad mediada por células T, respuesta al estrés oxidativo y respuesta celular a estímulos de daño al ADN, y la mayoría de las vías están asociadas con el envejecimiento [71-73]. También se han identificado otros genes relacionados con el envejecimiento, incluidos GCLC [74], CAV1 [75] y LYN [76]. Una combinación de datos de transcriptoma y metilación del ADN mostró que BFSP2 era el único gen superpuesto y se expresaba significativamente tanto en la metilación del ADN como en los niveles transcriptómicos. BFSP2 estaba hipometilado y sus niveles de expresión eran bajos en el grupo moteado, lo que sugiere que la expresión génica está regulada por otros factores de transcripción además de la modificación de la metilación. Además, BFSP2 ha sido identificado como un gen candidato en cataratas congénitas autosómicas dominantes [77] y enfermedad de cataratas progresiva [78]. Aunque se ha demostrado que BFSP2 está relacionado con el desarrollo ocular en pollos [79], los estudios sobre otras funciones en pollos son limitados. Por lo tanto, se necesitan más estudios para dilucidar su papel en la formación de la cáscara de huevo moteada.
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Conclusiones
En conclusión, los índices inmunológicos séricos indican que el contenido de IgA en el grupo moteado fue sustancialmente menor que el del grupo normal, y especulamos que una función inmune disminuida está estrechamente relacionada con la formación de moteados en la cáscara del huevo. El análisis del transcriptoma detectó siete DEG entre los grupos moteado y normal, de los cuales IQSEC3, GABRA2 y BFSP2 se identificaron como genes potencialmente importantes asociados con la formación de huevos moteados. El análisis de metilación del ADN identificó DMG asociados con la inmunidad mediada por células T, la respuesta al estrés oxidativo y la respuesta celular al estímulo de daño del ADN. De los 282 DMG identificados, 15 estaban asociados con el envejecimiento. El análisis integrador del transcriptoma y la metilación del ADN reveló que el único gen superpuesto era el BFSP2, que apenas se ha estudiado en pollos. Los datos presentados aquí sugieren que las vías inmunes y de envejecimiento de las gallinas ponedoras pueden contribuir a la formación de la cáscara del huevo moteada, mejorando nuestra comprensión del mecanismo de generación de las motas de la cáscara del huevo.
Referencias
1. Bain MM, Nys Y, Dunn IC. Aumento de la persistencia en la puesta y estabilización de la calidad del huevo en ciclos de puesta más largos. ¿Cuáles son los retos? Hno. Poult Sci. 2016;57(3):330–8.
2. Pottgüter R. Alimentación de gallinas ponedoras hasta las 100 semanas de edad. Lohmann Inf. 2016;50:18–21.
3. Molnar A, Maertens L, Ampe B, Buyse J, Kempen I, Zoons J, Delezie E. Cambios en las características de calidad del huevo durante la última fase de producción: ¿existe potencial para un ciclo de puesta extendido? Hno. Poult Sci. 2016;57(6):842–7.
4. Gosler AG, Higham JP, James Reynolds S. ¿Por qué los huevos de las aves están moteados? Ecología Lett. 2005;8(10):1105–13.
5. Arango J, Settar P, Arthur J, O'Sullivan N. Relación entre el color de la cáscara y la incidencia de motas en las líneas de huevos marrones. En: Proc XIIª Conferencia Avícola Europea: 2006. 2006. p. 10–4.
6. Cheng X, Fan C, Ning Z. Calidad de los huevos de pecas y sus factores que influyen. Ciencia avícola china. 2019;41(19):6–9 (en chino).
7. Hincke MT, Nys Y, Gautron J, Mann K, Rodríguez-Navarro AB, McKee MD. La cáscara del huevo: estructura, composición y mineralización. Front Biosci (Ed. histórica). 2012;17(4):1266–80.
8. Samiullah S, Roberts JR, Chousalkar K. Color de la cáscara del huevo en gallinas ponedoras de huevos marrones: una revisión. Ciencia de Poult. 2015;94(10):2566–75.
9. Wilson PW, Suther CS, Bain MM, Icken W, Jones A, Quinlan-Pluck F, Olori V, Gautron J, Dunn IC. Comprender la formación de la cutícula del huevo de aves en el oviducto: un estudio de su origen y deposición. Reproducción biológica. 2017;97(1):39–49.
10 Zhu M, Li H, Miao L, Li L, Dong X, Zou X. El cloruro de cadmio en la dieta perjudica la biomineralización de la cáscara al alterar el metabolismo de la glándula de la cáscara del huevo en las gallinas ponedoras. J Anim Ciencia. 2020;98(2):skaa025.
11. Qi X, Tan D, Wu C, Tang C, Li T, Han X, Wang J, Liu C, Li R, Wang J. Deterioro de la calidad de la cáscara del huevo en gallinas ponedoras infectadas experimentalmente con el virus de la influenza aviar H9N2. Res. veterinaria. 2016;47:35.
12. Wang J, Yuan Z, Zhang K, Ding X, Bai S, Zeng Q, Peng H, Celi P. Epigalocatequina-3-despigmentación de la cáscara de huevo inducida por vanadio protegida con galato mediante P38MAPK-Nrf2/HO-1 Vía de señalización en gallinas ponedoras. Ciencia de Poult. 2018;97(9):3109–18.
13. Avery OT, Macleod CM, McCarty M. Estudios sobre la naturaleza química de la sustancia que induce la transformación de tipos de neumococo: inducción de transformación por una fracción de ácido desoxirribonucleico aislada de neumococo tipo Iii. J Exp Med. 1944;79(2):137–58.
14. Kochmanski J, Marchlewicz EH, Cavalcante RG, Sartor MA, Dolinoy DC. Metilación e hidroximetilación del ADN de todo el epigenoma relacionada con la edad en sangre de ratón longitudinal. Epigenética. 2018;13(7):779–92.
15. Zhang X, Hu M, Lyu X, Li C, Thannickal VJ, Sanders YY. La metilación del ADN reguló la expresión genética en la fibrosis de órganos. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2017;1863(9):2389–97.
16. Ehrlich M. Hipermetilación del ADN en enfermedades: mecanismos y relevancia clínica. Epigenética. 2019;14(12):1141–63.
17. Ling C, Ronn T. Epigenética en la obesidad humana y la diabetes tipo 2. Metabolismo celular. 2019;29(5):1028–44.
18. Kaminen-Ahola N, Ahola A, Maga M, Mallett KA, Fahey P, Cox TC, Whitelaw E, Chong S. El consumo materno de etanol altera el epigenotipo y el fenotipo de la descendencia en un modelo de ratón. PLoS Genet. 2010;6(1):e1000811.
19 Tan X, Liu R, Xing S, Zhang Y, Li Q, Zheng M, Zhao G, Wen J. Detección de genes clave y marcadores epigenéticos en todo el genoma para el hígado graso de pollo. Int J Mol Ciencia. 2020;21(5):1800.
20. Hwang JH, An SM, Kwon S, Park DH, Kim TW, Kang DG, Yu GE, Kim IS, Park HC, Ha J, et al. Patrones de metilación del ADN y expresión genética asociados con el tamaño de la camada en la placenta de cerdos de Berkshire. Más uno. 2017;12(9):e0184539.
21. Yu C, Qiu M, Zhang Z, Song X, Du H, Peng H, Li Q, Yang L, Xiong X, Xia B, et al. La secuenciación del transcriptoma revela genes implicados en el estrés oxidativo provocado por el cadmio en el corazón de pollo. Ciencia de Poult. 2021;100(3):100932. 22. Boo SY, Tan SW, Alitheen NB, Ho CL, Omar AR, Yeap SK. Análisis del transcriptoma de células asesinas naturales de linfocitos intraepiteliales de pollo infectadas con el virus de la bursitis infecciosa muy virulento. Representante de ciencia ficción 2020;10(1):18348.
23. Ren L, Liu A, Wang Q, Wang H, Dong D, Liu L. Análisis del transcriptoma del desarrollo del músculo embrionario en Chengkou Mountain Chicken. Genómica BMC. 2021;22(1):431.
24. Yang C, Han L, Li P, Ding Y, Zhu Y, Huang Z, Dan X, Shi Y, Kang X. Caracterización y análisis del transcriptoma duodenal de ganado vacuno chino con eficiencia alimentaria divergente utilizando RNA-Seq. Genet delantero. 2021;12:741878.
25. Wang J, Jia R, Gong H, Celi P, Zhuo Y, Ding X, Bai S, Zeng Q, Yin H, Xu S, et al. El efecto del estrés oxidativo en el ovario de gallina: participación de las intervenciones de microbiota y melatonina. Antioxidantes (Basilea). 2021;10(9):1422.
26. Attia YA, Al-Harthi MA, Abo El-Maaty HM. Niveles de calcio y colecalciferol en gallinas ponedoras de fase tardía: efectos sobre los rasgos productivos, la calidad del huevo, la bioquímica sanguínea y las respuestas inmunes. Ciencia veterinaria delantera. 2020;7:389.
27. Moreno J, Osorno JL. Color del huevo de aves y selección sexual: ¿la pigmentación de la cáscara del huevo refleja la condición femenina y la calidad genética? Ecología Lett. 2003;6(9):803–6.
28. Afonso S, Vanore G, Batlle A. Protoporfirina IX y estrés oxidativo. Res. de radicales libres. 1999;31(3):161–70.
29. Schwartz-Albiez R, Monteiro RC, Rodríguez M, Binder CJ, Shoenfeld Y. Anticuerpos naturales, inmunoglobulina intravenosa y su papel en la autoinmunidad, el cáncer y la inflamación. Clin Exp Inmunol. 2009;158(Suplemento 1):43–50.
30. Martínez-de la Puente J, Merino S, Moreno J, Tomás G, Morales J, Lobato E, García-Fraile S, Martínez J. ¿Las manchas y el color de la cáscara del huevo son indicadores de salud y condición en los herrerillos azules Cyanistes caeruleus? J.Avian Biol. 2007;38(3):377–84.
31. Fagarasan S, Honjo T. Síntesis de IgA intestinal: regulación de las defensas corporales de primera línea. Nat Rev Inmunol. 2003;3(1):63–72.
32. Zhen W, Shao Y, Wu Y, Li L, Pham VH, Abbas W, Wan Z, Guo Y, Wang Z. La suplementación con betaglucanos de levadura dietética mejora el color de la cáscara del huevo y la incubabilidad de los huevos fértiles, además de mejorar las funciones inmunes en las reproductoras. las gallinas ponedoras. Int J Biol Macromol. 2020;159:607–21.
33. Elhamouly M, Nii T, Isobe N, Yoshimura Y. Modulación relacionada con la edad del sistema de defensa inmune innata de la mucosa ístmica y uterina en gallinas ponedoras. Ciencia de Poult. 2019;98(7):3022–8.
34. Li J, Qin Q, Li YX, Leng XF, Wu YJ. La exposición al fosfato de tri-orto-cresil conduce a una baja producción de huevos y a una mala calidad de la cáscara al alterar el desarrollo folicular y la función de las glándulas de la cáscara en las gallinas ponedoras. Ecotoxicol Medio Ambiente Saf. 2021;225:112771.
35. Fukaya M, Kamata A, Hara Y, Tamaki H, Katsumata O, Ito N, Takeda S, Hata Y, Suzuki T, Watanabe M, et al. SynArfGEF es un factor de intercambio de nucleótidos de guanina para Arf6 y se localiza preferentemente en las especializaciones postsinápticas de las sinapsis inhibidoras. J Neuroquímica. 2011;116(6):1122–37.
36. Mm JW. Funciones sinápticas de la familia IQSEC de factores de intercambio de nucleótidos de guanina del factor de ribosilación ADP. Neurociencia Res. 2017;116:54–9.
37. Um JW, Choi G, Park D, Kim D, Jeon S, Kang H, Mori T, Papadopoulos T, Yoo T, Lee Y, et al. IQ Motif y la proteína 3 que contiene el dominio SEC7 (IQSEC3) interactúan con la gefirina para promover la formación de sinapsis inhibidora. J Biol Chem. 2016;291(19):10119–30.
38. Kim S, Kim H, Park D, Kim J, Hong J, Kim JS, Jung H, Kim D, Cheong E, Ko J, et al. La pérdida de IQSEC3 altera el mantenimiento de la sinapsis GABAérgica y disminuye la expresión de somatostatina en el hipocampo. Representante celular 2020;30(6):1995-2005 e1995.
39. Erdö SL, Riesz M, Kárpáti E, Szporny L. Estimulación mediada por el receptor GABAB de la contractilidad del oviducto aislado de conejo. Eur J Farmacol. 1984;99(4):333–6. 40. Roth FC, Draguhn A. Metabolismo y transporte de GABA: efectos sobre la eficacia sináptica. Plast neuronal. 2012;2012:805830.
41. Erdő SL, László Á, Szporny L, Zsolnai B. Alta densidad de sitios de unión de GABA específicos en la trompa de Falopio humana. Neurosci Lett. 1983;42(2):155–60.
42. Erdo SL, Rosdy B, Szporny L. Concentraciones de GABA más altas en las trompas de Falopio que en el cerebro de la rata. J Neuroquímica. 1982;38(4):1174–6.
43. Sun X, Chen X, Zhao J, Ma C, Yan C, Liswaniso S, Xu R, Qin N. El análisis comparativo del transcriptoma de los folículos ováricos revela los genes clave y las vías de señalización implicadas en la producción de huevos de gallina. Genómica BMC. 2021;22(1):899.
44. Chen X, Sun X, Chimbaka IM, Qin N, Xu X, Liswaniso S, Xu R, González JM. El análisis del transcriptoma de los folículos ováricos revela posibles genes fundamentales asociados con mayores y menores tasas de producción de huevos de gallina. Genet delantero. 2021;12:622751.
45. Luan X, Liu D, Cao Z, Luo L, Liu M, Gao M, Zhang X. El perfil del transcriptoma identifica genes expresados diferencialmente en los ovarios de ganso Huoyan entre el período de puesta y el período de cese. Más uno. 2014;9(11):e113211.
46. Cui Z, Zhang Z, Amevor FK, Du X, Li L, Tian Y, Kang X, Shu G, Zhu Q, Wang Y, et al. El miR-449c-5p circadiano regula el transporte uterino de Ca(2+) durante la calcificación de la cáscara del huevo en pollos. Genómica BMC. 2021;22(1):764.
47. Mishra SK, Chen B, Zhu Q, Xu Z, Ning C, Yin H, Wang Y, Zhao X, Fan X, Yang M, et al. El análisis del transcriptoma revela genes expresados diferencialmente asociados con altas tasas de producción de huevos en el eje hipotalámico-hipófisis-ovárico del pollo. Representante científico 2020;10(1):5976.
48. Cox PR, Siddique T, Zoghbi HY. Organización genómica de las tropomodulinas 2 y 4 y empalme intergénico e intraexónico inusual de YL-1 y tropomodulina 4. BMC Genomics. 2001;2:7.
49. Cox PR, Zoghbi HY. Secuenciación, análisis de expresión y mapeo de tres genes de tropomodulina humana únicos y sus ortólogos de ratón. Genómica. 2000;63(1):97–107.
50. Yamashiro S, Gokhin DS, Kimura S, Nowak RB, Fowler VM. Tropomodulinas: proteínas protectoras de extremos puntiagudos que regulan la arquitectura de los filamentos de actina en diversos tipos de células. Citoesqueleto (Hoboken). 2012;69(6):337–70.
51. Almenar-Queralt A, Lee A, Conley CA, Ribas de Pouplana L, Fowler VM. Identificación de una nueva isoforma de tropomodulina, la tropomodulina esquelética, que recubre los extremos puntiagudos del filamento de actina en el músculo esquelético rápido. J Biol Chem. 1999;274(40):28466–75.
52. Ren T, Li Z, Zhou Y, Liu X, Han R, Wang Y, Yan F, Sun G, Li H, Kang X. Secuenciación y caracterización de lncRNA en el músculo de la pechuga de pollos Gushi y Arbor Acres. Genoma. 2018;61(5):337–47.
53. Xu L, Zhao F, Ren H, Li L, Lu J, Liu J, Zhang S, Liu GE, Song J, Zhang L, et al. Análisis de coexpresión de genes relacionados con el peso fetal en el músculo esquelético ovino durante las etapas media y tardía del desarrollo fetal. Int J Biol Sci. 2014;10(9):1039–50.
54. Wu Y, Wang Y, Yin D, Mahmood T, Yuan J. El análisis del transcriptoma revela una comprensión molecular de la nicotinamida y el butirato de sodio sobre la calidad de la carne de pollos de engorde con alta densidad de población. Genómica BMC. 2020;21(1):412.
55. Zhang F, Yin ZT, Zhang JF, Zhu F, Hincke M, Yang N, Hou ZC. Integración de datos de transcriptoma, proteoma y QTL para descubrir genes funcionalmente importantes para la formación de albúmina y cáscara de huevo de pato. Genómica. 2020;112(5):3687–95.
56. Nys Y, Gautron J, García-Ruiz JM, Hincke MT. Mineralización de la cáscara de huevo aviar: caracterización bioquímica y funcional de las proteínas de la matriz. CR Palevol. 2004;3(6–7):549–62.
57. Chen CS, Alonso JL, Ostuni E, Whitesides GM, Ingber DE. La forma de la celda proporciona un control global del ensamblaje de adhesión focal. Biochem Biophys Res Commun. 2003;307(2):355–61.
58 Su H, Zhang H, Wei X, Pan D, Jing L, Zhao D, Zhao Y, Qi B. Análisis proteómico comparativo del oviducto de Rana chensinensis. Moléculas. 2018;23(6):1384.
59. Zhang T, Chen L, Han K, Zhang X, Zhang G, Dai G, Wang J, Xie K. Análisis del transcriptoma del ovario en Jinghai Yellow Chicken, que produce óvulos relativamente mayores y menores. Animación y reproducción científica. 2019;208:106114.
60. Sun T, Xiao C, Deng J, Yang Z, Zou L, Du W, Li S, Huo X, Zeng L, Yang X. El análisis del transcriptoma revela genes y vías clave asociados con la producción de huevos en pollos domésticos Nandan-Yao. Comp Biochem Physiol Parte D Genómica Proteómica. 2021;40:100889.
61. Peter AT, Dhanasekaran N. Apoptosis de las células de la granulosa: una revisión sobre el papel de los módulos de señalización MAPK. Reproducción de animación doméstica. 2003;38(3):209–13.
62. Jeong W, Kim J, Ahn SE, Lee SI, Bazer FW, Han JY, Song G. AHCYL1 está mediado por la señalización de células ERK1/2 MAPK inducida por estrógeno y la regulación de microARN para efectuar aspectos funcionales del oviducto aviar. Más uno. 2012;7(11):e49204.
63. Wang J, Huang X, Zhang K, Mao X, Ding X, Zeng Q, Bai S, Xuan Y, Peng H. Los efectos oxidativos y apoptóticos del vanadato están mediados por la vía MAPK-Nrf2 en las células epiteliales de la capa magnum del oviducto. Metalómica. 2017;9(11):1562–75.
64. Tao Z, Song W, Zhu C, Xu W, Liu H, Zhang S, Huifang L. Análisis transcriptómico comparativo de ovarios de pato con alta y baja producción de óvulos. Ciencia de Poult. 2017;96(12):4378–88.
65. Shioda K, Odajima J, Kobayashi M, Kobayashi M, Cordazzo B, Isselbacher KJ, Shioda T. Preservación transcriptómica y epigenética de la identidad sexual genética en gónadas embrionarias de pollo macho feminizadas con estrógenos. Endocrinología. 2021;162(1):bqaa208.
66. Huang YZ, Sun JJ, Zhang LZ, Li CJ, Womack JE, Li ZJ, Lan XY, Lei CZ, Zhang CL, Zhao X, et al. Perfiles de metilación del ADN de todo el genoma y sus relaciones con el ARNm y el transcriptoma de microARN en tejido muscular bovino (Bos taurina). Representante de ciencia ficción 2014;4:6546.
67. Tan X, Liu R, Zhang Y, Wang X, Wang J, Wang H, Zhao G, Zheng M, Wen J. Análisis integrado del metiloma y transcriptoma de pollos con síndrome hemorrágico del hígado graso. Genómica BMC. 2021;22(1):8.
68. Fu Y, Li J, Tang Q, Zou C, Shen L, Jin L, Li C, Fang C, Liu R, Li M, et al. Análisis integrado de metiloma, transcriptoma y miARNoma de tres razas de cerdos. Epigenómica. 2018;10(5):597–612.
69. Lawrence M, Daujat S, Schneider R. Pensamiento lateral: cómo las modificaciones de las histonas regulan la expresión genética. Tendencias Genet. 2016;32(1):42–56.
70. Zhao BS, Roundtree IA, He C. Regulación genética postranscripcional mediante modificaciones del ARNm. Nat Rev Mol Cell Biol. 2017;18(1):31–42.
71. Chakravarti B, Abraham GN. Envejecimiento e inmunidad mediada por células T. Desarrollo de envejecimiento mecánico. 1999;108(3):183–206.
72. Camougrand N, Rigoulet M. Envejecimiento y estrés oxidativo: estudios de algunos genes implicados tanto en el envejecimiento como en respuesta al estrés oxidativo. Respir Physiol. 2001;128(3):393–401.
73. Ribezzo F, Shiloh Y, Schumacher B. Respuestas sistémicas al daño del ADN en el envejecimiento y las enfermedades. Semin Cáncer Biol. 2016;37–38:26–35.
74. Orr WC, Radyuk SN, Prabhudesai L, Toroser D, Benes JJ, Luchak JM, Mockett RJ, Rebrin I, Hubbard JG, Sohal RS. La sobreexpresión de glutamato-cisteína ligasa prolonga la vida útil en Drosophila melanogaster. J Biol Chem. 2005;280(45):37331–8.
75. Park DS, Cohen AW, Frank PG, Razani B, Lee H, Williams TM, Chandra M, Shirani J, De Souza AP, Tang B, et al. Los ratones caveolin-1 null (-/-) muestran reducciones dramáticas en su esperanza de vida. Bioquímica. 2003;42(51):15124–31.
76. Park JW, Ji YI, Choi YH, Kang MY, Jung E, Cho SY, Cho HY, Kang BK, Joung YS, Kim DH, et al. Los polimorfismos de genes candidatos para la diabetes mellitus, las enfermedades cardiovasculares y el cáncer están asociados con la longevidad en los coreanos. Exp. Mol Med. 2009;41(11):772–81.
77. Jakobs PM, Hess JF, FitzGerald PG, Kramer P, Weleber RG, Litt M. Catarata congénita autosómica dominante asociada con una mutación por deleción en el gen de la proteína de filamento de cuentas humana BFSP2. Soy J Hum Genet. 2000;66(4):1432–6.
78. Conley YP, Erturk D, Keverline A, Mah TS, Keravala A, Barnes LR, Bruchis A, Hess JF, FitzGerald PG, Weeks DE, et al. Un locus de cataratas progresivas de inicio juvenil en el cromosoma 3q21-q22 está asociado con una mutación sin sentido en la proteína estructural flament perlada-2. Soy J Hum Genet. 2000;66(4):1426–31.
79. Kumar P, Kasiviswanathan D, Sundaresan L, Kathirvel P, Veeriah V, Dutta P, Sankaranarayanan K, Gupta R, Chatterjee S. Recolección de pistas del análisis del transcriptoma de todo el genoma para explorar anomalías mediadas por la talidomida en el desarrollo ocular del embrión de pollo: nítrico El óxido rectifica las anomalías mediadas por la talidomida haciendo retroceder el sistema al patrón de transcriptoma normal. Bioquimia. 2016;121:253–67.
80. Chen S, Zhou Y, Chen Y, Gu J. fastp: un preprocesador FASTQ todo en uno ultrarrápido. Bioinformática. 2018;34(17):i884–90.
81. Kim D, Paggi JM, Park C, Bennett C, Salzberg SL. Alineación del genoma basada en gráficos y genotipado con HISAT2 y genotipo HISAT. Nat Biotecnología. 2019;37(8):907–15.
82. Li H, Handsaker B, Wysoker A, Fennell T, Ruan J, Homer N, Marth G, Abecasis G, Durbin R, Genome Project Data Processing S. El formato de mapa/alineación de secuencia y SAMtools. Bioinformática. 2009;25(16):2078–9.
83. Liao Y, Smyth GK, Shi W. featureCounts: un programa eficiente de propósito general para asignar lecturas de secuencias a características genómicas. Bioinformática. 2014;30(7):923–30.
84. Love MI, Huber W, Anders S. Estimación moderada del cambio de pliegue y la dispersión para datos de RNA-seq con DESeq2. Genoma Biol. 2014;15(12):550.
85. Subramanian A, Tamayo P, Mootha VK, Mukherjee S, Ebert BL, Gillette MA, Paulovich A, Pomeroy SL, Golub TR, Lander ES, et al. Análisis de enriquecimiento de conjuntos de genes: un enfoque basado en el conocimiento para interpretar perfiles de expresión de todo el genoma. Proc Natl Acad Sci EE.UU. A. 2005;102(43):15545–50.
86. Krueger F, Andrews SR. Bismark: un alineador flexible y un llamador de metilación para aplicaciones Bisulfte-Seq. Bioinformática. 2011;27(11):1571–2.
87. Jones PA. Funciones de la metilación del ADN: islas, sitios de inicio, cuerpos genéticos y más. Nat Rev Genet. 2012;13(7):484–92.
88. Akalin A, Kormaksson M, Li S, Garrett-Bakelman FE, Figueroa ME, Melnick A, Mason CE. methylKit: un paquete R integral para el análisis de procesos de metilación del ADN en todo el genoma. Genoma Biol. 2012;13(10):R87.
89. Zhou Y, Zhou B, Pache L, Chang M, Khodabakhshi AH, Tanaseichuk O, Benner C, Chanda SK. Metascape proporciona un recurso orientado a biólogos para el análisis de conjuntos de datos a nivel de sistemas. Comuna Nacional. 2019;10(1):1523.