Contacto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correo electrónico:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 Hospital 98 del Ejército Popular de Liberación de China, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Universidad de Medicina Tradicional China de Zhejiang, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Hospital de ortopedia de medicina tradicional china de Fuyang, ciudad de Hangzhou, provincia de Zhejiang, Hangzhou 311400, Zhejiang, China

Resumen

Objetivo: Observar el efecto deCistancheextracto de aguasobre la curación deosteoporóticofracturas en ratas y explorar su mecanismo. Métodos: Las ratas hembra SD de grado SPF se dividieron aleatoriamente en un grupo de control, un grupo modelo y un grupo de tratamiento, y se modelaron de acuerdo con métodos relacionados. 24 horas después del modelado de la fractura, el grupo de control y el grupo modelo recibieron sonda de solución salina normal, y el grupo de tratamiento recibió sonda deCistancheextracto de agua una vez al día. Después de 2 y 6 semanas de intervención, se extrajo sangre de la aorta abdominal para detectar interleucinas. Niveles de TP (IL-1 B) y factor de crecimiento transformante-B l (TGF-8 1), recolectar muestras de fractura al mismo tiempo, realizar una exploración Micro-CT después de la fijación, medir R0 Fracción de volumen óseo del callo (BV/TV) y otros parámetros relacionados Después de la descalcificación, deshidratación e incrustación, se convirtió en bloques de cera para su uso. Resultados: 6 semanas después de establecer el modelo de osteoporosis, la densidad mineral ósea de las ratas del grupo modelo y del grupo de tratamiento fue menor que la del grupo control (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanchepuede promover la curación deosteoporóticofracturas, y su mecanismo puede estar relacionado con su inhibición deosteoporóticofracturas Después del suero de rata IL-1 B y promover la secreción de TGF-8 1, que puede mejorar la osteoporosis y promover la curación de fracturas.

Palabras clave: fractura osteoporótica, Cistanche, cicatrización de fracturas, rata

La osteoporosis es una enfermedad en la que disminuye la densidad ósea, se destruye la estructura fina del tejido óseo y aumenta la fragilidad del hueso. Los pacientes pueden causar fracturas bajo una ligera fuerza externa en la vida diaria. Es una enfermedad clínica común y una enfermedad que ocurre con frecuencia. Además, este tipo de fractura es en su mayoría pacientes de edad avanzada, a menudo asociado con otras enfermedades, y la mayoría de las fracturas son conminutas, con poca estabilidad y, a veces, se produce una curación lenta o sin consolidación de la fractura, y existe una alta tasa de discapacidad y letalidad. En la actualidad su tratamiento es principalmente a través de cirugía, restauración manual y tratamiento anti-osteoporosis. Hay una falta de medicamentos de tratamiento dirigidos para pacientes conosteoporóticofracturas La medicina tradicional china tiene una larga historia en el tratamiento de la osteoporosis y tiene un efecto positivo. Se ha demostrado que muchas medicinas tradicionales chinas mejoran los huesos. La pobreza también puede promover la curación de fracturas. Rongrong se usa comúnmente como un medicamento representativo para nutrir el yang del riñón y tiene el efecto de nutrir el hígado y el riñón. La medicina tradicional china cree que el riñón gobierna el hueso, y el tratamiento de las fracturas también es inseparable del riñón y la esencia. La farmacología moderna ha descubierto que la ceniza de la carne también tiene cierto efecto estrogénico. Este estudio tiene la intención de utilizar la medición de la densidad ósea, Micro-CT y la interleucina sérica -13 (IL-10), la observación del nivel del factor de crecimiento transformante-P KTGF-P 1) y el extracto acuoso de la pasta de hernia de carne en el curación deosteoporóticofracturas en ratas

Cistanche

1Materiales y métodos

1.1 Animales de experimentación y equipo de reactivos: 52 ratas SD hembra SPF que pesan 210~250g se crían en el Centro de Experimentación Animal de la Universidad de Medicina Tradicional China de Zhejiang. Yodo complejo, Hangzhou Lonzo Medical Disinfectant Co., Ltd., número de lote 20160720; penicilina, North China Pharmaceutical Co., Ltd., número de lote F3117217; kit IL-18 (número de lote: 20160715), kit TGF-8 1 (número de lote: 20160722); Escáner de densidad ósea de rayos X de energía dual, 0STE0C0RE2; Micro-CT, Skyscan1176O

1.2 Extracción deCistancheextracto de agua: empapar el suelocistanche(Fábrica farmacéutica de medicina tradicional china de la Universidad de Zhejiang) 1 0 veces agua ultrapura durante 0,5 horas, decocción de sartén durante 1,5 horas, repita la extracción 2 veces y el vaporizador giratorio de líquido medicinal mixto se concentra a una concentración de 1,5 g /ml y guárdelo en un refrigerador a 4 grados para su uso posterior.

1.3 Preparación del modelado: Los puntos son los siguientes.

1.3. 1 Modelo de osteoporosis: las ratas se criaron de forma adaptativa durante 1 semana antes del modelo y se dividieron aleatoriamente en grupo de control, grupo modelo y grupo de tratamiento, con 16 ratas, 18 ratas y 18 ratas respectivamente, y cada grupo se basó en el punto temporal de 2 semanas y 6 semanas. Cada uno se dividió en dos grupos. Tanto el grupo de tratamiento como el grupo modelo se anestesiaron con pentobarbital sódico al 1 por ciento (0,4 ml/100 g), se anestesió, desinfectó, cubrió y cortó la piel. Se extirparon los ovarios bilaterales de la rata. El grupo de control solo tenía una incisión. No haga

Extirpación de los ovarios

1.3. 2 Modelo de fractura: 6 semanas después de preparar el modelo de osteoporosis, se preparará el modelo de fractura. Después de anestesiar a las ratas de cada grupo, se mide la densidad mineral ósea del fémur medio. , Incisión, haga un modelo de fractura transversa del fémur medio, fíjelo con alambre de Kirschner de 1 mm, esterilice y suture la piel de la incisión

1.4 Intervención farmacológica: se realizó la detección de rayos X del fémur después del modelado, se eliminaron las ratas que fallaron en la preparación del modelo y se inyectaron 80000 unidades de penicilina por vía intramuscular después del modelado para prevenir la infección. 24 horas después de la operación, el grupo de tratamiento recibió extracto acuoso de pasta de hernia de carne (concentración 1,5 g/ml, 1 g/kg, una vez al día). El grupo de control y el grupo modelo recibieron el mismo volumen de solución salina normal.

1.5 Recolección de muestras: Se recolectaron muestras de ratas 2 y 6 semanas después de la intervención. Después de la anestesia con pentobarbital sódico al 1 por ciento, se recogieron 5-10ml de sangre de la aorta abdominal para preparar el suero y se almacenaron en un refrigerador -20B. repuesto. Luego se sacrificaron las ratas y se recogieron las muestras de fracturas femorales y se colocaron en formaldehído neutro al 10 por ciento durante 72 horas.

1.6 Indicadores de prueba: Los puntos son los siguientes.

1.6. 1 Densidad mineral ósea: todas las ratas después del modelo de osteoporosis fueron anestesiadas antes del modelo de fractura y luego se midió la densidad mineral ósea del fémur medio. Los tres grupos de ratas recibieron muestras después de 2 y 6 semanas de intervención, y las muestras se fijaron durante 72 horas y luego se volvió a medir la densidad ósea.

1.6. 2 Micro-CT: la exploración Micro-CT se realiza después de fijar la muestra durante 72 horas, con 200 imágenes por encima y por debajo del extremo de la fractura como la región de interés (R01), ángulo de exploración de 360 ​​grados, actual 555uA, voltaje 42kV, filtro Al 0. 2mm, resolución 8.73um, después de completar la reconstrucción de la imagen tridimensional y el análisis del callo. Los parámetros de detección son los siguientes: fracción de volumen óseo BV/TV, factor de modelo trabecular óseo (Tb. Pf); índice del modelo estructural (SMI), etc."

1.6.3 Determinación de IL-1P y TGF-P1 en suero: descongelar el suero de rata del refrigerador a -20 grados y realizar la detección paso a paso de acuerdo con la IL-13 e instrucciones del kit TGF" 1.

1.7 Métodos estadísticos: utilice el software de análisis estadístico SPSS.19 para el procesamiento. Los datos experimentales se expresan en términos de media ± desviación estándar (G±s) y la densidad mineral ósea de los tres grupos de ratas. Parámetros de Micro-CT JL-1 P JGF- P 1 los niveles se promedian mediante un análisis de varianza unidireccional y se utilizan comparaciones por pares entre grupos. Inspección, el nivel de inspección es P<0.>

2 resultados

2.1 Densidad ósea de los tres grupos: ver Tabla 1.

Tabla 1 Resultados de la densidad mineral ósea en el fémur medio de cada grupo de ratas (x±s, g/cm²)

Nota: En comparación con el grupo de modelos, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Sección transversal bidimensional de Micro-CT: la sección transversal bidimensional sagital selecciona las imágenes del eje longitudinal del fémur en cada punto de tiempo en cada grupo (ver Figura 1), y la sección transversal bidimensional horizontal sección selecciona la imagen número 100 debajo de la línea de fractura para la comparación (Figura 2), se puede ver en la figura que el callo de cada grupo aumentó gradualmente con el tiempo, pero fue plástico en diferentes grados 6 semanas después de la fractura; al mismo tiempo, se puede ver que el callo en el grupo de control era grande, y la corteza del callo era gruesa y se arrastraba a través de la línea de fractura después de 6 semanas, mientras que el callo en el grupo modelo Había menos hueso en el callo en 2 semanas, y la corteza del callo estaba suelta después de 6 semanas. Aunque el volumen del callo en el grupo de tratamiento no era grande a las 2 semanas, la masa ósea en el callo era mayor que la del grupo modelo. El callo estaba mejor formado después de 6 semanas. Y la línea de fractura no es obvia.

Grupo de control Grupo modelo Grupo de tratamiento

Figura 1 La sección transversal sagital del fémur medio de cada grupo

Figura 2 Sección horizontal del fémur medio de cada grupo

2.3 Reconstrucción tridimensional por Micro-CT: la reconstrucción tridimensional del callo en el extremo fracturado del fémur se muestra en la Figura 3. Puede verse en la Figura 3 que el callo se formó a lo largo del periostio en ambos extremos de la fractura línea 2 semanas después de la fractura en cada grupo, las hebras de la fractura en cada grupo aún estaban claras, especialmente en el grupo modelo y el grupo de tratamiento, mientras que el callo en el grupo de control era grueso y grueso, principalmente con placas 6 semanas después de la fractura . Predominaron los huesos trabeculares y la línea de fractura desapareció, mientras que el grupo modelo tenía huesos sueltos y la línea de fractura era difusa, pero el grupo de tratamiento tenía más hueso calloso, hueso trabecular regular y grueso, y la línea de fractura no era obvia.

Figura 3 Reconstrucción tridimensional del callo R0I en el extremo fracturado

2.4 Parámetros de Micro-CT: utilice software para analizar el callo en el extremo fracturado. Consulte la Tabla 2 para conocer los parámetros relacionados.

Tabla 2 Comparación de parámetros Micro-CT de cada grupo (x±s)

Grupo de control Grupo modelo Grupo de tratamiento

Nota: En comparación con el grupo de modelos, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Nivel sérico de IL-1 P .TGF-P 1: consulte la Tabla 3.

Tabla 3 Comparación de niveles de IL-1 P JGF-0 1 en cada grupo G±s, n=8)

Nota: En comparación con el grupo de modelos, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

En los últimos años, las medicinas tradicionales chinas Yinyangdian, Drynaria fortuna y sus compuestos (píldoras de Qing, píldoras de Liuwei Dihuang, etc.) han demostrado en la práctica clínica que mejoran significativamente la osteoporosis. Este tipo de medicina china y sus compuestos se utilizan principalmente para nutrir el hígado y los riñones. Esto es consistente con el principio de nutrir el riñón y renovar los músculos en las etapas media y tardía de la fractura. "Diez días. La pasta de miembros carnosos se publicó por primera vez en "Shen Nong's Materia Medica". , De naturaleza cálida, tiene las funciones de nutrir el riñón y fortalecer el yang, reponer la esencia y la médula, nutrir la sangre e hidratar la sequedad, y agradable color y prolongando la vida

En este estudio, la densidad mineral ósea del grupo de tratamiento fue mayor que la del grupo modelo después de 2 y 6 semanas de intervención (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">osteoporóticocuración de fracturas. Refleja directamente el contenido óseo del callo. Esto muestra que Rouganrong puede tener el efecto de promover la osteogénesis. El análisis puede ser eficaz en la pasta de hernia de carne. Los ingredientes tienen el efecto de regular al alza la BMP2, y la BMP2 es uno de los miembros de la familia TGF-8. Y este resultado también es confirmado por otros parámetros de la exploración Micro-CT (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tuberculosis. Sp y SMI reflejan las propiedades biomecánicas del callo, y los valores en el grupo de tratamiento son significativamente mejores que el grupo modelo, esto también sugiere que Roudongrong tiene el efecto de mejorar la pérdida ósea, promover la osteogénesis y acelerar la curación de fracturas.

En términos de niveles séricos de IL-1B y JGF-P 1, después de 2 semanas y 6 semanas de intervención, se encontró que el nivel de IL-1P del grupo de tratamiento era más bajo que los otros dos grupos a las 2 semanas y a las 6 semanas. Aunque el nivel de IL-1 B del grupo de tratamiento fue más alto que el del grupo de control, aún fue significativamente más bajo que el del grupo modelo (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">Cistanchepuedenmejorar la pérdida ósea, promover la osteogénesis y acelerar la curación de fracturas. Puede reducir el nivel de IL-13 enosteoporóticofracturar ratas e inhibir la fractura. Se logra la actividad de las células óseas; además, también puede estar relacionado con el hecho de queCistanchepuede aumentar el nivel de TGF-B 1 en ratas fracturadas, promover la diferenciación osteogénica y la maduración y formación de callos.

En resumen, con base en el análisis de la densidad mineral ósea, los parámetros de escaneo Micro-CT y los niveles séricos de IL-1 P, TGF"1, se encontró que el extracto acuoso deCistanchepuedenmejorar la pérdida óseaypromover la curación de las fracturas osteoporóticas. El mecanismo puede estar relacionado con esto. Puede inhibir la secreción de suero ILT 8 y promover la secreción de TGF-B 1 en ratas despuésosteoporóticofracturas, mejorando así la osteoporosis y favoreciendo la curación de las fracturas.

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