Ni la variante africana S47 ni la variante P72 de TP53 se asocian con un riesgo reducido de malaria febril en un estudio de cohorte de Malí

Fondo. Se ha demostrado que TP53 desempeña un papel en los procesos inflamatorios, incluida la malaria. Anteriormente descubrimos que p53 atenúa la inflamación inducida por parásitos y predice la protección clínica contra la infección por Plasmodium falciparum en niños de Malí. Aquí, investigamos si los polimorfismos de los codones 47 y 72 de p53 están asociados con un riesgo diferencial de infección por P. falciparum y malaria no complicada en un estudio de cohorte prospectivo de inmunidad a la malaria.

Métodos. Los polimorfismos de los codones 47 y 72 de p53 se determinaron mediante la secuenciación del exón 4 de TP53 en 631 niños y adultos de Malí inscritos en el estudio de cohorte de Kalifabougou. Los efectos de estos polimorfismos sobre el riesgo prospectivo de malaria febril, parasitemia incidente y tiempo hasta la fiebre después de la parasitemia incidente durante 6 meses de transmisión intensa de malaria se evaluaron utilizando modelos de riesgos proporcionales de Cox.

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Resultados. Los factores de confusión del riesgo de malaria, incluida la edad y la hemoglobina S o C, fueron similares entre individuos con o sin polimorfismos p53 S47 y R72. En relación con sus respectivas variantes comunes, ni S47 ni R72 se asociaron con diferencias en el riesgo prospectivo de malaria febril, parasitemia incidente o malaria febril después de parasitemia.

Conclusiones. Estos hallazgos indican que los polimorfismos de los codones 47 y 72 de p53 no están asociados con la protección contra la parasitemia incidente por P. falciparum o la malaria febril no complicada.

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Palabras clave. malaria; P47S; polimorfismos de p53; P72R; estudio de cohorte prospectivo.

El agente de malaria clínicamente más significativo en África, Plasmodium falciparum, ha infectado a humanos durante casi 10,000 años [1]. Durante este tiempo, la alta tasa de mortalidad por malaria falciparum grave ha impuesto una fuerte presión selectiva sobre el genoma humano [2]. Como tales, los polimorfismos específicos de los eritrocitos que de otro modo podrían ser perjudiciales para el huésped (p. ej., la mutación de la hemoglobina falciforme [HbS] responsable de la enfermedad de células falciformes) se han mantenido en poblaciones endémicas de malaria, ya que estas mutaciones confieren resistencia a la malaria al hacer que los eritrocitos sean menos hospitalarios para el huésped. el parásito invasor [3-5]. Los estudios de asociación de todo el genoma han identificado polimorfismos adicionales no relacionados con la función de los eritrocitos como protectores contra la malaria grave, pero hasta el 89% de la susceptibilidad a la malaria grave aún no se ha atribuido a loci genómicos específicos [6–9]. Además, ha faltado evidencia de polimorfismos de eritrocitos del huésped que puedan proteger contra la malaria no complicada (no grave). Estudios anteriores han implicado al supresor de tumores p53 en el control de la infección por malaria. Se ha demostrado que el aumento de p53 del huésped reduce la carga de Plasmodium en etapa hepática en ratones [10]. Nuestro grupo mostró previamente una mayor expresión de los genes diana TP53 y p53 en la sangre de niños malienses no infectados que luego presentarían parasitemia asintomática por P. falciparum en comparación con aquellos que luego presentaron malaria febril [11]. Estas observaciones han llevado a la pregunta de si los polimorfismos de TP53 podrían explicar estas diferencias en el fenotipo clínico. TP53 es el gen mutado con mayor frecuencia en los cánceres humanos, y la mayoría de las mutaciones sin sentido ocurren en puntos calientes dentro del dominio rico en prolina (aminoácidos 55-100) o en el dominio de unión al ADN (aminoácidos 102-192) [12, 13]. La mutación natural más común ocurre en el codón 72 (rs1042522), y surge de un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) en el exón 4 [14, 15]. Un residuo de prolina en esta posición (P72), considerada la forma ancestral, se encuentra preferentemente en individuos de ascendencia africana, mientras que un residuo de arginina (R72) ocurre más comúnmente en estadounidenses y europeos blancos no hispanos, con una frecuencia que aumenta linealmente con la latitud. 16, 17]. Aunque una sustitución de prolina por arginina produce cambios estructurales y funcionales significativos [18], se cree que ambos residuos funcionan lo suficiente como para proteger contra los diferentes cánceres que los individuos pueden encontrar en sus respectivas latitudes (revisado en [13]). En particular, la variante R72 se asocia con temperaturas frías y baja intensidad UV [19], pero los estudios que evalúan la asociación de los polimorfismos del codón 72 con el cáncer de piel han arrojado resultados inconsistentes [20-23]. A pesar de la mayor frecuencia de P72 entre los africanos en comparación con los europeos [17], otros han propuesto que la variante R72 puede proteger contra la infección por malaria en humanos [24], basándose en la evidencia de que R72 tiene un mayor potencial apoptótico en relación con P72 [ 25] y que la apoptosis es un mecanismo por el cual el huésped elimina los hepatocitos parasitados en el hígado [10]. El segundo SNP que codifica p53 más frecuente también se produce en el exón 4 y se localiza dentro de la región que codifica el dominio de transactivación N-terminal en el codón 47 (rs1800371) [26], donde la prolina más común (P47) puede reemplazarse por serina (S47). ) [27]. En contraste con el polimorfismo muy común en el codón 72, la variante S47 es relativamente rara en humanos, con una frecuencia alélica del 2% al 4% en las poblaciones africanas [26, 27]. Como S47 aún no se ha detectado en estadounidenses de origen no africano [28], este polimorfismo se ha denominado en la literatura variante centrada en África. La variante S47 puede conferir resistencia a la muerte celular programada dependiente del hierro (ferroptosis), lo que conduce a un mayor riesgo de cánceres espontáneos [27, 29]. En ratones S47, esta ferroptosis defectuosa puede resultar en acumulación de hierro y respuesta antiinflamatoria al pigmento malárico hemozoína, lo que lleva a la especulación de que la variante S47 puede limitar la inflamación inducida por malaria y así mejorar la supervivencia en individuos que viven en áreas con intensa transmisión de malaria. 30]. Los estudios sobre los polimorfismos de p53 y la susceptibilidad a la malaria en humanos han sido limitados hasta la fecha. Dos estudios han examinado la asociación entre las variantes del codón 72 y el riesgo de malaria en humanos con resultados contradictorios [24, 31]. Sin embargo, hasta donde sabemos, la asociación entre los polimorfismos del codón 47 de p53 y el riesgo de malaria aún no se ha investigado en humanos. En el estudio actual, examinamos si los polimorfismos de los codones 47 y 72 de p53 afectan el riesgo de infección por P. falciparum y malaria clínica en una cohorte prospectiva de niños y adultos de Malí.

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MÉTODOS

Diseño del estudio y participantes

El sitio del estudio y la población del estudio se han descrito en otra parte [32]. Brevemente, el estudio se realizó en la aldea de Kalifabougou, Mali, donde la transmisión de malaria por P. falciparum es intensa y estacional, y ocurre de junio a diciembre [32]. En mayo de 2011, inscribimos a 695 niños y adultos sanos, de edades comprendidas entre 3 meses y 25 años, en un estudio de cohorte observacional longitudinal para investigar la inmunidad a la malaria, en el que se llevó a cabo una vigilancia activa de la malaria cada dos semanas con controles domiciliarios semanales a intervalos y vigilancia pasiva por cuenta propia. -remisión. Los criterios de exclusión en el momento de la inscripción incluyeron el nivel de hemoglobina.<7 g/dL, axillary temperature >37.5°C, acute systemic illness, underlying chronic disease, use of antimalarial or immunosuppressive medications in the past 30 days, and pregnancy. Malaria episodes were defined as parasitemia of >2500 parásitos por microlitro, una temperatura axilar mayor o igual a 37,5 grados dentro de las 24 horas y ninguna otra causa de fiebre discernible mediante examen físico. Los episodios se detectaron de forma prospectiva mediante autorremisión a la clínica del estudio y visitas semanales de vigilancia clínica activa. Todos los individuos con signos y síntomas de malaria y cualquier nivel de parasitemia detectado mediante microscopía fueron tratados de acuerdo con las directrices del Programa Nacional de Control de la Malaria de Malí. Durante las visitas clínicas programadas, se extrajo sangre mediante punción en el dedo cada 2 semanas para frotis de sangre y manchas de sangre seca (DBS) en papel de filtro. Las infecciones asintomáticas por P. falciparum se detectaron mediante examen microscópico de frotis de sangre y análisis de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de las gotas de sangre al final del período de vigilancia. Las primeras infecciones por P. falciparum se detectaron retrospectivamente con PCR de DBS recolectadas longitudinalmente, como se describe en otra parte [32]. Los primeros episodios de malaria se determinaron a partir de los datos de las visitas clínicas. Los valores de hemoglobina, medidos con un analizador HemoCue, se utilizaron para determinar el estado de anemia, según los criterios de la Organización Mundial de la Salud. La tipificación de hemoglobina para HbS se realizó con un sistema de prueba de hemoglobina D-10 (Bio-Rad). En otro lugar se describieron tres clases clínicas con diferentes niveles de inmunidad clínica [11].

Aislamiento y secuenciación de ADN

El ADN genómico se extrajo de muestras de sangre completa mediante 3 métodos: (1) de gránulos de sangre completa (100 μl) utilizando un kit de sangre de ADN QIAamp 96 (Qiagen), según el protocolo del fabricante; (2) de DBS utilizando el QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen), según el protocolo del fabricante; o (3) de DBS utilizando un método de extracción personalizado de alto rendimiento, como se describe en otra parte [33]. Se utilizó ADN genómico purificado para amplificar el exón 4 de TP53 mediante PCR utilizando los siguientes cebadores publicados previamente [34]: 5′-TGAGGACCTGGTCCTCTGAC- 3′ (adelante) y 5′-AGAGGAATCCCAAAGTTC CA-3′ inverso ( contrarrestar). La amplificación por PCR se realizó utilizando el kit HotStarTaq Plus Master Mix (Qiagen) a una temperatura de recocido de 60 grados, según el protocolo recomendado por el fabricante. Los productos de PCR amplificados se purificaron y secuenciaron mediante el método de terminación de cadena en Quintara Biosciences. Los archivos de secuencia recibidos se analizaron utilizando el software Benchling (versión 2022.2.3; https://benchling.com) y se alinearon con la secuencia de referencia TP53 (identificador de gen 7157; Centro Nacional de Información Biotecnológica). Las llamadas de base informadas por el software se compararon manualmente con los cromatogramas. Las secuencias generadas estarán disponibles en GenBank (números de acceso OP593553–OP594185).

Análisis estadístico

Se utilizaron curvas de Kaplan-Meier para estimar las probabilidades respectivas de permanecer libre de (1) malaria clínica, (2) parasitemia por P. falciparum o (3) malaria febril una vez parasitaria. Para el tiempo hasta la malaria febril una vez parasitemica, se utilizó como hora de inicio el momento de la parasitemia incidente, estimado como el punto medio entre el último resultado negativo de la PCR de P. falciparum y el primer resultado positivo de la PCR de P. falciparum. Se utilizaron modelos de riesgos proporcionales de Cox para estimar la estadística de Wald para probar la importancia de las diferencias en el tiempo hasta el primer evento entre las variantes de TP53 en el codón 47 o 72 en análisis univariados o análisis que incluían covariables como se indica en las tablas. Se utilizó la prueba de suma de rangos de Kruskal-Wallis para comparar las diferencias entre grupos para resultados continuos. Para las variables categóricas, las comparaciones de grupos se realizaron mediante pruebas de χ 2. La significación estadística se definió como un 2-valor de P cola<.05. All analyses were performed using R software (version 4.2.0).

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Aprobación ética

El estudio de cohorte Kalifabougou fue aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Medicina, Farmacia y Odontología de la Universidad de Ciencias, Técnica y Tecnología de Bamako y la Junta de Revisión Institucional del Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas de los Institutos Nacionales de Salud. . Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de los participantes adultos y de los padres o tutores de los niños participantes. Este estudio fue aprobado como investigación con sujetos humanos exentos por la Junta de Revisión Institucional de la Universidad de Indiana (protocolo 2005922267).

RESULTADOS

Frecuencia de polimorfismos de TP53 entre los participantes del estudio

De los 695 individuos inicialmente inscritos en la cohorte de Kalifabougou, 631 tenían suficiente ADN genómico para la secuenciación del exón 4 de TP53. Los alineamientos de secuencia revelaron 40 individuos (6,3%) con polimorfismos S47, de los cuales 33 eran heterocigotos y 7 homocigotos (Tabla 1). Se observaron polimorfismos R72 en 327 individuos (51,8%), de los cuales 206 (32,6%) eran heterocigotos y 121 (19,2%) eran homocigotos (Tabla 1). Ni los polimorfismos del codón 47 ni del codón 72 estaban en equilibrio de Hardy-Weinberg (prueba exacta de Haldane, P=6.5 × 10−6 y P=1.0 × 10−12, respectivamente). La distribución de los posibles modificadores del riesgo de malaria (edad, sexo, HbS o hemoglobina, parasitemia existente por P. falciparum y anemia) no difirió significativamente entre los grupos de variantes de TP53 para S47 o R72 (Tabla 1). Los 6 individuos que eran heterocigotos para los alelos S47 y R72 eran hombres y tenían PCR positiva para P. falciparum en el momento de la inscripción (Tabla 1).

No hay asociación de los polimorfismos del codón 47 y del codón 72 de TP53 con un riesgo reducido de episodios clínicos de malaria o incidentes de P. falciparumparasitemia

Se realizaron análisis de tiempo hasta el evento para examinar la asociación entre las variantes S47 y P72 y el riesgo de malaria febril. El análisis inicial entre P47/P47, P47/S47 y S47/S47 no mostró diferencias significativas en el riesgo de malaria (datos no mostrados), probablemente debido a los pequeños tamaños de muestra para los genotipos heterocigotos P47/S47 y homocigotos S47/S47. Por lo tanto, estos genotipos se colapsaron en un solo estrato. Para el codón 72, los genotipos heterocigotos y homocigotos se mantuvieron como 3 estratos separados. No hubo diferencias significativas en el tiempo hasta el primer episodio clínico de malaria entre los genotipos P47/P47 (mediana [intervalo de confianza del 95 %, 184 [165-210] días) y la variante S47 (151 [133-210] días) o entre P72/P72 (183 [59–210] días) y P72/R72 (210 [160–210] días) o R72/R72 (159 [142–210] días) en cualquiera de los análisis univariados (Figura 1A y 1B ) o los análisis ajustados que incluyeron edad, sexo, parasitemia inicial, anemia y presencia de HbS como covariables (Tabla complementaria 1). Los individuos que eran P47/S47 y P72/R72 demostraron un riesgo similar de malaria clínica que los individuos homocigotos P47/P47 y P72/P72 (Figura 1 complementaria). Se ha demostrado que el aumento de p53 reduce la carga de Plasmodium en etapa hepática en modelos de ratón [10]. Por lo tanto, determinamos si los polimorfismos de TP53 se asociaban con un riesgo diferencial de infecciones incidentes por P. falciparum según lo determinado mediante vigilancia por PCR activa e intensiva en individuos que comenzaron el estudio con resultados negativos para P. falciparum mediante PCR (n=330). No detectamos una diferencia significativa en el tiempo hasta la primera infección por P. falciparum detectable por PCR entre P47/P47 (mediana [intervalo de confianza del 95%], 85 [81–91] días) y la variante S47 (85 [58–124] días) o entre los genotipos P72/P72 (88 [80–95] días) y P72/R72 (81 [72–91] días) o R72/R72 (91 [80–116] días) en cualquiera de los análisis univariados ( Figura 1C y 1D) o análisis ajustados que incluyeron covariables relevantes (Tabla complementaria 2).

No hay asociación de los polimorfismos de TP53 con la protección contra la malaria febril después de un incidente de parasitemia por P. falciparum o diferencias en la expresión genética

Nuestro grupo identificó previamente un subconjunto de niños dentro de la cohorte de Kalifabougou que estaban afebriles en el momento del incidente, parasitemia por P. falciparum confirmada por PCR [11]. Estos niños fueron clasificados como "fiebre retardada" o "inmunes" dependiendo de si habían progresado a fiebre después de 2 a 14 días o permanecieron asintomáticos durante el resto de la temporada de malaria, respectivamente. Estos 2 subconjuntos demostraron una mayor expresión de TP53 y genes diana TP53 en la línea de base previa a la infección en relación con los niños que estaban febriles en el momento de la parasitemia incidente por P. falciparum ("fiebre temprana") [11]. Para determinar si los polimorfismos de TP53 se asociaron con fiebre retardada o fenotipos inmunes, examinamos la distribución de los polimorfismos S47 y R72 en estos subconjuntos, pero no observamos diferencias significativas entre los 3 fenotipos clínicos (Tabla 2). El reexamen de la expresión de TP53 en los transcriptomas de RNA-seq obtenidos en la línea de base sana de cada niño (n=80) [11] por los polimorfismos de los codones 47 y 72 no reveló diferencias entre los polimorfismos comunes y sus respectivas variantes (Figura 2). Para determinar si las variantes S47 o P72 están asociadas con la protección contra la fiebre palúdica una vez parasitemica en la cohorte principal, determinamos el riesgo de malaria febril, utilizando el momento de la primera parasitemia como momento de inicio. Aquí, incluimos a todos los individuos que comenzaron el estudio con P. falciparum negativo por PCR y posteriormente tuvieron parasitemia por P. falciparum confirmada por PCR (n=292). No se observaron diferencias significativas en el tiempo hasta la primera fiebre una vez parasitaria en los subgrupos con polimorfismos S47 o P72 en relación con sus respectivos genotipos comunes mediante análisis univariados (Figuras 3A y 3B). Aunque hubo una tendencia hacia un mayor riesgo de malaria febril una vez parasitaria para S47 en comparación con P47/P47 (Figura 3A), esta diferencia se volvió estadísticamente más insignificante cuando se ajustó por covariables relevantes como la edad y la HbS (Tabla complementaria 3).

DISCUSIÓN

A diferencia de la malaria grave, los polimorfismos genéticos del huésped que se asocian con la resistencia a la malaria no complicada han involucrado principalmente variantes genéticas de eritrocitos [2, 5]. Mientras que varios genes no eritrocitarios se han asociado con la protección contra la malaria grave [6, 7, 9], sólo un puñado de genes implicados en la respuesta inflamatoria, a saber, NOS2 y TNF, se han asociado específicamente con un riesgo diferencial de malaria leve o no complicada. [2, 35–38]. El factor de transcripción p53 mantiene la homeostasis celular en respuesta a señales de estrés mediante la regulación de una amplia gama de objetivos posteriores, incluidas las vías inflamatorias, que en conjunto suprimen los procesos oncogénicos [39]. El potencial oncogénico de la inflamación crónica está bien establecido [40], y cada vez hay más pruebas de que p53 puede modular la inflamación del huésped en el contexto de los patógenos [41, 42]. En apoyo de esto, nuestro grupo observó previamente que el aumento de la expresión de TP53 y sus objetivos posteriores se asoció con la protección contra la fiebre durante la parasitemia incidente por P. falciparum, lo que sugiere que p53 podría inicialmente amortiguar la respuesta febril durante la infección por malaria [11]. En un estudio anterior, ratones con la variante p53 S47 mostraron una respuesta antiinflamatoria al pigmento malárico hemozoína, lo que sugiere que polimorfismos específicos de p53 podrían limitar la inflamación durante las infecciones por malaria en humanos [30]. En el contexto del desafío inflamatorio con lipopolisacárido, los ratones con el polimorfismo p53 R72 demostraron una mayor supervivencia en relación con los ratones P72, lo que implica que la variante R72 puede proteger contra respuestas patológicas a bacterias gramnegativas [43]. Aquí, evaluamos si los polimorfismos del codón 47 o 72 afectan el riesgo de malaria por P. falciparum en una cohorte longitudinal prospectiva y demostramos que ninguno de estos polimorfismos se asocia con un riesgo diferencial de parasitemia incidente o malaria febril incidente. Además, ninguno de estos polimorfismos de TP53 estuvo sobrerrepresentado entre el subconjunto de niños que estaban protegidos de la fiebre palúdica y que demostraron una mayor expresión de TP53 y sus objetivos en la línea de base previa a la infección en el estudio anterior de nuestro grupo [11]. Nuestros hallazgos son consistentes con estudios transversales de mujeres primíparas de Ghana (n=314) y niños ruandeses (n=545), que no mostraron asociación entre el polimorfismo R72 y la prevalencia de la infección por P. falciparum o la intensidad del parásito. [31]. La única otra investigación publicada sobre los polimorfismos de p53 en la malaria fue un estudio de recién nacidos en Cerdeña, que encontró una mayor frecuencia del genotipo homocigoto R72, presuntamente protector contra la malaria, en un área con previamente una mayor endemicidad de malaria (n=46) en relación con un área con previamente menor endemicidad de malaria (n=47) [24]. Con base en la premisa de que la variante R72 de p53 tiene un mayor potencial apoptótico [25] y, por lo tanto, puede prevenir la infección en etapa hepática mediante la apoptosis de hepatocitos parasitados [10], los autores sugirieron que la endemicidad de la malaria puede haber seleccionado positivamente el polimorfismo R72 [24 ]. Sin embargo, esta hipótesis no está respaldada por nuestros datos que no muestran diferencias en el tiempo hasta la parasitemia confirmada por PCR entre los genotipos del codón 72. Además, un polimorfismo R72 protector contra la malaria no podría explicar por qué el alelo P72 es más prevalente en africanos que en europeos [17], una observación que implicaría que P72 es el alelo seleccionado para mantenerse en poblaciones endémicas de malaria según el " hipótesis de la malaria" [8]. Puede ser que la actividad funcional conferida por R72 no sea relevante para el riesgo de malaria febril. Como se indicó anteriormente, aunque la variante R72 puede proteger a los ratones contra la exposición a lipopolisacáridos [43], también se ha demostrado que provoca inflamación en el contexto de una dieta rica en grasas [44] o cáncer de mama [45] en estudios con ratones. Por lo tanto, la forma en que el polimorfismo R72 afecta la respuesta inflamatoria puede depender tanto del tipo como de la agudeza de la perturbación.

Tabla 1. Posibles factores de confusión entre el riesgo de malaria y los genotipos TP53

Figure 1. p53 Codon 47 and 72 polymorphisms and malaria risk in the Kalifabougou cohort during the 2011 malaria season. Kaplan-Meier curves of time to first febrile malaria episode (defined as >2500 parasites per microliter by blood smear and axillary temperature >37,5 grados) (A, B) y tiempo hasta la primera reacción en cadena de la polimerasa (PCR): parasitemia por Plasmodium falciparum confirmada (C, D), estratificada por los genotipos variantes de p53 indicados. Para C y D, el análisis incluyó solo a individuos que comenzaron la temporada de malaria con resultados negativos para P. falciparum mediante PCR. La significancia se determinó mediante riesgos proporcionales de Cox, utilizando el estadístico de prueba de Wald. Las tablas muestran el número de personas en riesgo en los días indicados desde la inscripción. Abreviatura: HR, índice de riesgo.

Cuadro 2. Distribución de los genotipos TP53 entre niños con susceptibilidad diferencial al paludismo febril después de una parasitemia inicial por Plasmodium falciparum

Figura 2. Expresión de TP53 mediante polimorfismos del codón 47 y 72. Expresión de TP53 mediante los polimorfismos indicados del codón 47 (A) y 72 (B) de p53 en muestras de sangre completa de 80 niños malienses en su estado basal sano y no infectado en mayo de 2011, antes de la temporada de malaria [11]. La significancia se determinó mediante la prueba de Wilcoxon (A) o el análisis de varianza (B). La expresión genética se informa como log2 recuentos por millón (CPM).

La falta de asociación entre las variantes del codón 47 o del codón 72 y la protección contra la malaria también podría explicarse por su falta de efecto sobre la expresión de p53, como se evidencia en nuestros datos (Figura 2) y estudios previos [27, 46]. Un hallazgo principal del estudio anterior de nuestro grupo fue que la expresión de p53 y sus objetivos posteriores aumentaron en niños que estaban protegidos de la fiebre temprana durante la parasitemia incidente [11], lo que sugiere que la inducción de la expresión de p53 puede ser necesaria para controlar la inflamación. Aunque la variante S47 disminuye la capacidad de inducir apoptosis en relación con P47, la expresión de la proteína p53 dentro de la célula aún se mantiene en niveles similares [27]. Esto, combinado con la observación de que ninguno de los niños del grupo "inmune" más protegido albergaba la variante S47, sugiere que la reducción de la apoptosis a través de este polimorfismo es poco probable que sea el mecanismo por el cual p53 afecta la fiebre palúdica. De manera similar, el polimorfismo R72 es funcionalmente significativo pero no necesariamente da como resultado un aumento de la expresión de p53 [25, 46]. Las fuerzas selectivas pueden aumentar la frecuencia de los alelos favorecidos con el tiempo. El alelo S47 estuvo presente en el 6,3% de los participantes evaluados, siendo el 1,1% homocigotos, lo que da una frecuencia alélica del 3,7%, lo que es consistente con el 2%-4% reportado previamente para los africanos del África subsahariana [28]. Por el contrario, el alelo R72 estuvo presente en el 51,8% de los participantes (19,2% homocigotos), lo que da una frecuencia alélica del 35,5% en esta población. El predominio del alelo P72 en la cohorte de Malí es consistente con el aumento de la frecuencia de este alelo en latitudes más cercanas al ecuador, un hallazgo que se ha atribuido a la selección natural [17].

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Es tentador especular por qué el alelo S47 se mantiene en una tasa tan baja entre los africanos. Dado que S47 tiene un potencial apoptótico disminuido en relación con P47 [27], la baja frecuencia del alelo S47 podría explicarse por el costo de aptitud incurrido por su mantenimiento debido a desventajas selectivas no relacionadas con la inflamación patológica durante la malaria, como el mayor riesgo de cáncer de mama premenopáusico. [47]. Sin embargo, la variante S47, al limitar la respuesta inflamatoria inducida por la hemozoína [30], aún podría proteger contra la malaria más grave. Debido a que el estudio actual evaluó sólo la malaria no complicada por P. falciparum, no abordó si alguno de estos polimorfismos se asociaba con una reducción en el riesgo de malaria grave. Vale la pena señalar la asociación modestamente significativa entre la doble heterocigosidad (P47/S47 y P72/R72) y la parasitemia asintomática por P. falciparum en la inscripción de mayo (Tabla 1). En áreas de malaria estacional intensa, la infección crónica asintomática por P. falciparum al final de la estación seca refleja una mayor inmunidad acumulada contra la malaria [48]. Debido a que estos seis individuos doblemente heterocigotos tienen una edad media más alta en relación con los otros grupos, la sobrerrepresentación de parasitemia asintomática dentro de este genotipo puede ser simplemente una función casual de la exposición pasada a la malaria en lugar de una consecuencia de los polimorfismos de p53. Se necesitarían estudios de cohorte adicionales de los polimorfismos de p53 de los codones 47 y 72 y del riesgo de malaria para confirmar la importancia del genotipo doble heterocigoto. Se deben tener en cuenta más limitaciones de este estudio. Aunque nuestro estudio es uno de los estudios más amplios sobre los polimorfismos de p53 y el riesgo de malaria hasta la fecha, sólo 7 de los 631 participantes eran homocigotos para S47, lo que limita nuestro poder para detectar una asociación. Además, evaluamos solo los polimorfismos de p53 dentro del exón 4 y, por lo tanto, es posible que hayamos pasado por alto el impacto de otras mutaciones potencialmente relevantes, incluidas las mutaciones 3KR (K117R + K161R + K162R) que involucran los sitios de acetilación de p53 [49]. Es de destacar que evaluamos el codón 117, que se encuentra en el exón 4, y encontramos que solo había lisina presente. Tampoco evaluamos polimorfismos en regiones no codificantes de TP53 o en reguladores de p53 que pueden afectar a p53 a nivel de proteína, como MDM2 [28, 50]. Los enfoques de secuenciación de próxima generación que evalúen de manera integral los polimorfismos en las regiones no traducidas 5 'y 3', así como todas las regiones codificantes para los reguladores TP53 y p53, podrían abordar estas limitaciones. Finalmente, no determinamos si los genotipos de p53 diferían en su expresión de p53 a nivel celular, lo que puede haber proporcionado información importante sobre si el polimorfismo de los codones 47 y 72 podría afectar las vías reguladas por p53-. En resumen, el estudio actual proporciona evidencia de que ni el codón 47 ni el codón 72 de p53 protegen contra la malaria, medido por el tiempo hasta la parasitemia por P. falciparum y la malaria febril no complicada. Dadas las frecuencias más bajas del alelo S47 en esta población, se necesitarían estudios más amplios para confirmar la falta de asociación de la variante S47 con el riesgo de malaria.

Figura 3. Polimorfismos de los codones 47 y 72 de p53 y riesgo de malaria febril después de una parasitemia incidente. Gráficos de Kaplan-Meier del tiempo hasta la primera malaria febril utilizando la primera infección en etapa sanguínea por Plasmodium falciparum confirmada por reacción en cadena de la polimerasa como el tiempo de inicio estratificado por los polimorfismos variantes del codón 47 (A) o del codón 72 (B) de p53. La significancia se determinó mediante los riesgos proporcionales de Cox utilizando la estadística de la prueba de Wald. Las tablas muestran el número de personas en riesgo en el momento indicado desde la inscripción. Abreviatura: HR, índice de riesgo.

Dato suplementario

Los materiales complementarios están disponibles en The Journal of Infectious Diseases en línea. Los materiales publicados, que consisten en datos proporcionados por los autores para beneficiar al lector, no están editados y son responsabilidad exclusiva de los autores, por lo que las preguntas o comentarios deben dirigirse al autor correspondiente.

Notas

Expresiones de gratitud. Nos gustaría agradecer a los participantes del estudio y al personal de apoyo a la investigación en Kalifabougou y Bamako, Mali. También agradecemos a Shanping Li, Emily LaVerriere y Daniel E. Neafsey por proporcionar material genómico y orientación técnica.

Contribuciones de autor. PDC y TMT concibieron el proyecto. SD, KK, AO, BT, PDC y TMT diseñaron el estudio de cohorte original y SD, KK, AO y BT lo implementaron. ELG realizó los experimentos. JB, AU, ELG y TMT realizaron el análisis de datos. PDC aportó recursos adicionales. JB, PDC y TMT escribieron el manuscrito. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito.

Descargo de responsabilidad. El contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no necesariamente representa las opiniones oficiales de los Institutos Nacionales de Salud.

Soporte financiero. Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas (NIAID) y los Institutos Nacionales de Salud (otorga R01AI158719 y K08AI125682 a TMT). El estudio de cohorte de Kalifabougou cuenta con el apoyo de la División de Investigación Intramuros del NIAID.

Posibles conflictos de intereses. Todos los autores: No se han reportado conflictos. Todos los autores han enviado el Formulario ICMJE para la divulgación de posibles conflictos de intereses. Se han divulgado los conflictos que los editores consideran relevantes para el contenido del manuscrito.

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