Efecto nefroprotector de Asparagus Africanus Lam. Extracto de raíz contra la nefrotoxicidad inducida por gentamicina en ratones albinos suizos

Abstracto

el riñón es el órgano más vulnerable a fármacos nefrotóxicos como la gentamicina. La nefrotoxicidad es un deterioro rápido de la función renal debido a varios factores. La gentamicina causa nefrotoxicidad, que se manifestó por un aumento de los biomarcadores renales séricos. Asparagus africanus es una de las plantas etnomedicinales utilizadas como medicina tradicional para el tratamiento de diversas dolencias, incluida la enfermedad renal en la sociedad etíope.elPor lo tanto, este estudio tiene como objetivo evaluar el efecto nefroprotector del extracto de raíz de A. africanus sobre la nefrotoxicidad inducida por gentamicina. Utilizando técnicas de maceración, se extrajeron 100 g de polvo vegetal seco en 1 L de etanol. El tamizaje fisicoquímico de los extractos vegetales reveló la presencia de flavonoides, fenoles, taninos, saponinas y esteroides.elLa actividad nefroprotectora del extracto crudo de A. africanus se evaluó en ratones albinos suizos macho.elEl extracto etanólico crudo a dosis de 200 y 400 mg/kg mostró fuertes efectos nefroprotectores al restaurar biomarcadores como la creatinina, el ácido úrico y el nitrógeno ureico en sangre, que fueron dañados por la gentamicina (p < 0.05) en una dosis -manera dependiente.elLos ratones tratados con dosis más altas (400 mg/kg) tuvieron un efecto nefroprotector comparable al del grupo de control positivo (200 mg/kg de silimarina; p > 0,05).elLa histopatología del grupo control mostró glomérulos normales, parénquima normal, contorneado distal y sin daño tubular.elEl grupo inducido por tóxicos mostró daño a los glomérulos e infiltración inflamatoria.elPor lo tanto, el extracto de raíz de A. africanus tiene una actividad nefroprotectora al retardar la toxicidad de la gentamicina en ratones albinos suizos macho.

Haga clic aquí para saber cuáles son los efectos de Cistanche y Cistanche suplemento

Introducción

La lesión renal aguda es un síndrome caracterizado por la rápida pérdida de la función excretora renal [1]. La insuficiencia renal aguda se refiere a la pérdida repentina y generalmente reversible de la función renal, que se desarrolla en días o semanas [2]. Entre las causas de insuficiencia renal aguda, la necrosis tubular aguda, que ocurre debido a isquemia o nefrotoxinas como la gentamicina (aminoglucósido), es la más común y representa el 85 por ciento de las incidencias [3]. Se ha informado nefrotoxicidad en 1.7 por ciento a 58 por ciento de los pacientes que reciben terapia con aminoglucósidos [2, 3]. La gentamicina es un antibiótico eficaz que se ha utilizado en todo el mundo durante muchos años. Si bien la OMS la considera un medicamento esencial, la gentamicina también puede causar daño renal grave [1, 2]. Las vías recomendadas de administración de gentamicina son intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o tópica, ya que no se absorbe lo suficiente en el tracto intestinal [4, 5]. Sin embargo, el uso clínico potencial de la gentamicina es limitado debido a la toxicidad inducida por la gentamicina [4].

La gentamicina puede causar lesiones tisulares como nefrotoxicidad, ototoxicidad [3, 4] y toxicidad hepática [5], posiblemente a través de la generación de radicales libres de oxígeno. La nefrotoxicidad de la gentamicina surge debido a su acumulación en las células epiteliales tubulares de la corteza renal [6]. Aunque la patogenia de la lesión renal aguda inducida por gentamicina ha sido objeto de un gran número de estudios, los mecanismos subyacentes aún no se han esclarecido por completo [7]. Estudios recientes sugieren que la nefrotoxicidad por gentamicina es un proceso complejo y multifacético en el que la gentamicina desencadena respuestas celulares que involucran múltiples vías que culminan en daño renal y necrosis [8]. Se han intentado varios agentes y estrategias para mejorar la nefrotoxicidad de la gentamicina [7, 8], centrándose principalmente en el uso de diversos agentes antioxidantes, incluidos extractos de plantas medicinales con propiedades antioxidantes [9].elEsta actividad biológica puede atribuirse a sus constituyentes obtenidos de plantas, principalmente compuestos fenólicos como los flavonoides. Los flavonoides son antioxidantes bien conocidos que poseen actividad secuestrante de radicales libres y quelante de metales [10]. Aproximadamente el 20 por ciento de todas las plantas descubiertas en el planeta se han sometido a pruebas farmacológicas o biológicas, y una proporción significativa de nuevos antibióticos se derivan de fuentes naturales o semisintéticas [11].elEstá fascinado que los investigadores busquen fuentes alternativas de productos naturales con un amplio espectro de actividades biológicas [12].

extracto de cistanche

Asparagus africanus, llamado localmente "Saritti" en (Afaan Oromo) y "Kestencha" en (Amárico), pertenece a la familia Asparagaceae y es un arbusto medicinal valorado por sus propiedades medicinales. Se distribuye ampliamente por toda África, incluida Etiopía, y partes de Europa, Asia y Australia. A. africanus, con el nombre común de "espárrago africano", es un arbusto perenne con tallos de hasta 6 m de altura, que crece entre 700 y 3800 m sobre el nivel del mar [13]. Sin embargo, está ampliamente distribuido y crece convenientemente más alto, hasta 6 m en un rango de altitud de 1450 a 2900 m [14]. A. africanus se conoce como medicina popular en Etiopía y se usa tradicionalmente para el tratamiento de la enfermedad renal en forma de jugo, té o sopa [15]. Varios estudios también mostraron que el extracto de la planta A. africanus tiene diferentes actividades biológicas, como antibacteriana, impotencia sexual, gonorrea y sífilis [16]; hepatoprotector [17]; y propiedades repelentes de insecticidas y antipalúdicos [18]. Además de esto, A. africanus se utiliza para actividades farmacológicas como antidiabético [16, 19, 20], antiprotozoario [21], antiinflamatorio y analgésico [22], antifertilidad [19], anti -Actividad microbiana [23] y antioxidante [24].elEl género Asparagus contiene varios fitoquímicos como taninos, alcaloides, terpenoides, esteroides y flavonoides que pueden causar una acción fisiológica definida en el cuerpo humano [25]. Los componentes químicos del extracto de la planta A. africanus revelaron la presencia de varios componentes bioactivos, como flavonoides, taninos, esteroides, terpenoides y saponina contenidos en A. africanus Lam. saponina esteroide, son los principales componentes activos del género Asparagus [26]. En este estudio se evaluó la actividad nefroprotectora del extracto etanólico de raíz de A. africanus en dos dosis separadas (200 y 400 mg/kg). Además de eso, el extracto de la planta se comparó con gentamicina (100 mg/kg) y silimarina (200 mg/kg) como controles negativo y positivo, respectivamente.

pastillas de cistanche

La hipótesis del estudio

1. Hipótesis nula.

El extracto etanólico de raíz de A. africanus no tiene un efecto nefroprotector significativo sobre la nefrotoxicidad inducida por gentamicina en ratones albinos suizos.

2. Hipótesis alternativa.

El extracto de raíz etanólica de A. africanus tiene un efecto nefroprotector significativo sobre la nefrotoxicidad inducida por gentamicina en ratones albinos suizos.

Discusión y conclusión

1. Discusión.

GM es conocido como un inductor de insuficiencia renal aguda, que ocurre en alrededor del 10 al 30 por ciento de los pacientes [40].elEl presente estudio mostró que los grupos inducidos por GM elevan la creatinina sérica, el nitrógeno ureico en sangre y el ácido úrico en comparación con el grupo de control normal (p < 0.05). estos indican que los ratones inducen toxicidad y disfunción renal de alto nivel.elLos hallazgos del nuevo estudio coincidieron con el informe del estudio anterior de [3, 4], y se afirmó que la inyección de GM en ratas durante 14 días de tratamiento causa cambios anormales en el tejido renal, como una célula reducida en los glomérulos, pérdida de constituyentes tubulares celulares, congestión vascular que causa atrofia de las células epiteliales y distorsiones.

Cistanche en polvo

En este estudio, la disminución de la creatinina sérica, BUN y ácido úrico en los grupos inducidos con 200 y 400 mg/kg en comparación con GM (p < 0,05) indica el efecto protector del extracto vegetal. además, puede deberse al metabolito secundario bioactivo, como flavonoides, taninos y fenol presentes en el extracto de la planta.elEl resultado es consistente con el informe del estudio anterior de [37, 41] que afirmó que los polifenoles y los flavonoides reducen la nefrotoxicidad de los transgénicos a través de un aumento en la actividad enzimática antioxidante, una disminución en la peroxidación lipídica, la eliminación de radicales libres y la mejora de la arquitectura del tejido. del riñónelLos niveles de creatinina sérica y urea en sangre de 400 mg/kg de extracto vegetal disminuyeron significativamente en comparación con 200 mg/kg (p < 0,05). plus indica el efecto dependiente de la dosis del extracto de la planta y aumenta la concentración del metabolito bioactivo en la dosis más alta. Durante la disfunción renal, el aclaramiento renal de creatinina (un desecho no proteico del metabolismo del fosfato de creatinina) se reduce debido a la reducción de la filtración glomerular [42]. No solo la creatinina, sino también el ácido úrico sérico y el BUN estaban elevados debido al mal funcionamiento de los riñones [43].

En este estudio, la elevación de la creatinina sérica, BUN y ácido úrico fue inducida por GM y disminuida por el extracto de A. africanus. Este efecto puede estar asociado con la actividad antioxidante y las propiedades fitoquímicas y estabilizadoras de membrana de los extractos de plantas. Un estudio similar informó que el extracto de la planta A. africanus tiene una mayor actividad hepatoprotectora y nefroprotectora debido a los fitoquímicos presentes en el extracto de la planta [35]. Del mismo género, las hojas de A. albus L. y el extracto de raíz de A. racemosus mejoraron la estructura de las células hepáticas, confirmando el efecto hepatoprotector debido a su actividad antioxidante y captadora de radicales libres debido a su alto contenido de polifenoles, flavonoides y tanino condensado [ 44, 45]. En general, la administración de 200 y 400 mg/kg tuvo un efecto beneficioso sobre el riñón tratado con GM. Además, se evidenció por una disminución significativa de la creatinina sérica, BUN y ácido úrico en el grupo tratado con A. africanus en comparación con el grupo inducido con GM.

Cápsulas de Cistanche

2. Conclusión.

El extracto etanólico de raíz de A. africanus a una dosis de 400 mg/kg tiene una actividad nefroprotectora comparable a la del control positivo silimarina, lo que se confirma mediante el examen histopatológico del riñón y sus biomarcadores séricos. En general, los ratones tratados con extracto etanólico de A. africanus poseen una potencial actividad protectora frente a la nefrotoxicidad inducida por gentamicina. Se debe al metabolito secundario presente en el extracto de la planta. Sin embargo, se requieren más investigaciones sobre enzimas antioxidantes o marcadores de peroxidación lipídica en tejidos renales o suero con varios extractos solventes de plantas.

Referencias

[1] V. Erseçkin, H. Mert, K. ˙Irak, S. Yildirim y N. Mert, "Efecto nefroprotector del ácido ferúlico sobre la nefrotoxicidad inducida por gentamicina en ratas hembra", Toxicología química y de fármacos, vol. 45, núm. 2, págs. 663–669, 2020.

[2] A. Stephen Akinrinde, O. Oduwole, F. Joseph Akinrinmade y F. Bolawaye Bolaji-Alabi, "Efecto nefroprotector del extracto de metanol de las hojas de Moringa oleifera en la lesión renal aguda inducida por isquemia-reperfusión en ratas", African Health Ciencias, vol. 20, núm. 3, págs. 1382–1396, 2020.

[3] PG Pai, S. Chamari Nawarathna, A. Kulkarni, et al., "Efecto nefroprotector del ácido ursólico en un modelo murino de daño renal inducido por gentamicina", ISRN Pharmacology, vol. 2012, págs. 1 a 6, artículo ID 410902, 2012.

[4] T. Jeyanthi y P. Subramanian, "Efecto nefroprotector de Withania somnifera: un estudio dependiente de la dosis", Insuficiencia renal, vol. 31, núm. 9, págs. 814–821, 2009.

[5] AA Noorani, KA Gupta, K. Bhadada y MK Kale, "Efecto protector del extracto metanólico de hojas de Caesalpinia bonduc (L.) sobre la hepatotoxicidad y la nefrotoxicidad inducidas por gentamicina en ratas", Revista iraní de farmacología y ? terapéutica, vol. 10, núm. 1, págs. 21 a 25, 2011.

[6] A. Usubu y K. Kılınc, "El efecto protector de la taurina contra el tubular agudo inducido por gentamicina", Nephrology Dialysis Transplantation, vol. 15, núm. 8, págs. 1175–1182, 2000.

[7] P. Samreen, S. Muhammad, K. Haroon, M. Shahid y U. Irfan, "Efecto nefroprotector de berberis baluchistanica contra la nefrotoxicidad inducida por gentamicina en conejos", Bangladesh Journal of Pharmacology, vol. 13, págs. 222–230, 2018.

[8] Y. Quirós, L. Vicente-Vicente, AI Morales, JM López-Novoa y FJ López-Hernández, "Una visión integradora de los mecanismos subyacentes a la citotoxicidad tubular renal de la gentamicina", Ciencias toxicológicas, vol. 119, núm. 2, págs. 245 y 256, 2011.

[9] F. Akhtar, M. Azhar, M. Aslam y K. Javed, "Efecto nefroprotector del polvo de isla (Withania somnifera dunal) sobre la lesión renal inducida por cisplatino en ratas", Journal of Drug Delivery y ? terapéutica, vol. 10, núm. 6-s, págs. 22 a 25, 2020.

[10] S.-J. Wu y L.-T. Ng, "Actividades antioxidantes y de eliminación de radicales libres del melón amargo silvestre (Momordica charantia Linn. var. Abreviate ser.) en Taiwán", Food Science and Technology, vol. 41, núm. 2, págs. 323–330, 2008.

[11] M. Uddin, MA Ghufran, M. Idrees, et al., "Actividad antibacteriana del extracto metanólico de raíz de Asparagus racemosus", Journal of Public Health and Biological Sciences, vol. 1, no. 2, págs. 32 a 35, 2012.

[12] S. Scandorieiro, LC de Camargo, CAC Lancheros et al., "Efecto sinérgico y aditivo del aceite esencial de orégano y nanopartículas biológicas de plata contra cepas bacterianas multirresistentes", Frontiers in Microbiology, vol. 7, núm. 5, págs. 1 a 14, 2016.

[13] D. Nureye, S. Assefa, T. Nedi y E. Engidawork, "Actividad antipalúdica in vivo del extracto de corteza de raíz metanólica al 80 % y fracciones solventes de gardenia ternifolia Schumacher. & then. (Rubiaceae) contra Plasmodium berghei , "Medicina alternativa y complementaria basada en la evidencia, vol. 2018, n. 12, 10 páginas, artículo ID 9217835, 2018.

[14] AE Al-Snafi, "más la importancia farmacológica de Asparagus officinalis: una revisión", Journal of Pharmaceutical Biology, vol. 5, núm. 2, págs. 93 a 98, 2015.

[15] Y. Javadzadeh y S. Hamedeyaz, "Sistemas flotantes de administración de fármacos para la erradicación de helicobacter pylori en el tratamiento de la enfermedad de úlcera péptica", Trends in Helicobacter Pylori Infection, vol. 13, págs. 304–319, 2014.

[16] C. Getnet, "Estudio etnobotánico de las plantas utilizadas en la medicina tradicional y como alimentos silvestres en y alrededor de los bosques remanentes de taragedam y amba en limbo kemkem woreda, zona sur de Gonder, región de Amhara", Etiopía, vol. 1, no. 1, págs. 1 a 93, 2011.

[17] ME Terlizzi, G. Gribaudo y ME Maffei, "Infecciones por Escherichia coli uropatógena (UPEC): factores de virulencia, respuestas de la vejiga, antibióticos y estrategias antimicrobianas no antibióticas" Frontiers in Microbiology. vol. 8, págs. 15 a 66, 2017.

[18] A. Mesfin, M. Giday, A. Animut y T. Teklehaymanot, "Estudio etnobotánico de plantas antipalúdicas en el distrito de guijarros, región somalí, Etiopía, y evaluación in vivo de las seleccionadas contra Plasmodium berghei", Revista de etnofarmacología , vol. 139, núm. 1, págs. 221–227, 2012.

[19] G. Tafesse, Y. Mekonnen y E. Makonnen, "Efecto antifertilidad de extractos acuosos y de etanol de las hojas y raíces de Asparagus africanus en ratas", Journal of African Health Sciences, vol. 6, núm. 2, págs. 81 a 85, 2006.

[20] SA Nabi, RB Kasetti, S. Sirasanagandla, TK Tilak, MVJ Kumar y CA Rao, "Actividad antidiabética y antihiperlipidémica del extracto acuoso de raíz de piper longum en ratas diabéticas inducidas por STZ", BMC Complementary and Alternative Medicine, vol. 13, núm. 1, págs. 37–39, 2013.

[21] HA Oketch-Rabah, SF Dossaji, SB Christensen, et al., "Compuestos antiprotozoarios de Asparagus africanus", Journal of Natural Products, vol. 60, núm. 10, págs. 1017–1022, 1997.

[22] H. Hassan, A. Ahmadu y A. Hassan, "Actividades analgésicas y antiinflamatorias del extracto de raíz de Asparagus africanus", African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines, vol. 5, núm. 1, págs. 27 a 31, 2008.

[23] B. Madikizela, AR Ndhlala, JF Finnie y JV Staden, "Actividad antimicrobiana in vitro de extractos de plantas utilizadas tradicionalmente en Sudáfrica para tratar la tuberculosis y síntomas relacionados", Medicina alternativa y complementaria basada en la evidencia, vol. 2013, artículo ID 840719, 9 páginas, 2013.

[24] OD Okolie, I. Manduna y S. Mashele, "Análisis fitoquímico de los extractos de raíz de A. africanus", Una disertación, vol. 7, núm. 1, págs. 351–354, 2019.

[25] SM Khapli, LS Mangashetti, SD Yogesha y MR Wani, "IL-3 actúa directamente sobre los precursores de osteoclastos e inhibe irreversiblemente el activador del receptor de la diferenciación de osteoclastos inducida por el ligando NF-κB al desviar las células al linaje de macrófagos, Revista de Inmunología, vol. 171, núm. 1, págs. 142 y 151, 2003.

[26] G. Joshi, M. Rawat, V. Bisht, J. Negi y P. Singh, "Constituyentes químicos de los espárragos", Pharmacognosy Reviews, vol. 4, núm. 8, págs. 215–220, 2010.

[27] MM Hasan, A. Hossain, A. Shamim y MM Rahman, "Evaluación fitoquímica y farmacológica del extracto etanólico de hojas de Lepisanthes rubiginosa L.", BMC Complementary and Alternative Medicine, vol. 17, núm. 1, pág. 496, 2017.

[28] M. Benkova, O. Soukup y J. Marek, "Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana: métodos y dispositivos utilizados actualmente y el futuro próximo en la práctica clínica", Journal of Applied Microbiology, vol. 129, núm. 4, págs. 806–822, 2020.

[29] UM Rao, M. Abdurrazak y KS Mohd, "Evaluación fitoquímica, flavonoides totales y ensayos de contenido fenólico de varios extractos solventes de tépalo de Musa paradisiaca", Malaysian Journal of Analytical Science, vol. 20, núm. 5, págs. 1181–1190, 2016.

[30] FT Zohra, "Extracción de metabolitos secundarios, detección fitoquímica y análisis de la actividad antibacteriana en stevia rebaudiana", tesis doctoral, Universidad BRAC, Dhaka, Bangladesh, 2015.

[31] J. Charan y N. Kantharia, "¿Cómo calcular el tamaño de la muestra en estudios con animales?" Revista de Farmacología y Farmacoterapéutica, vol. 4, núm. 4, págs. 303–306, 2013.

[32] J. Charan y T. Biswas, "¿Cómo calcular el tamaño de la muestra para diferentes diseños de estudio en investigación médica?" Revista india de medicina psicológica, vol. 35, núm. 2, págs. 121 a 126, 2013.

[33] B. Leta, C. Kenenisa, T. Wondimnew y T. Sime, "Evaluación de los efectos renoprotectores de nuestros granos de café verde cultivados localmente contra la nefrotoxicidad inducida por cisplatino en ratones albinos suizos", International Journal of Nephrology, vol. 2021, n. 1, 8 páginas, artículo ID 2805068, 2021.

[34] V. Ehsani, M. Amirteimoury, Z. Taghipour, et al., "Efecto protector del extracto hidroalcohólico de pistacia vera contra la nefrotoxicidad inducida por gentamicina en ratas", Insuficiencia renal, vol. 39, núm. 1, págs. 519–525, 2017.

[35] A. El-Ishaq, MA Alshawsh, KS Mun y Z. Chik, "Efectos bioquímicos y toxicológicos del extracto metanólico de Asparagus africanus Lam en ratas Sprague-Dawley", PeerJ, vol. 8, núm. 9, artículo ID e9138, 2020.

[36] BR Abhirama, R. Shanmuga Sundaram y A. Raju, "Mejora del daño renal inducido por gentamicina en ratas mediante extracto de etanol de toda la planta sensible a Biophytum (linn.) DC", International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, vol. 10, núm. 5, pág. 130, 2018.

[37] A. Jamshidzadeh, R. Heidari, S. Mohammadi-Samani et al., "Una comparación entre el perfil nefrotóxico de la gentamicina y las nanopartículas de gentamicina en ratones", Journal of Biochemical and Molecular Toxicology, vol. 29, núm. 2, págs. 57 a 62, 2015.

[38] E. Al-Sayed, MM Abdel-Daim, OE Kilany, M. Karonen y J. Sinkkonen, "Función protectora de los polifenoles de Bauhinia hookeria contra la hepatotoxicidad y la nefrotoxicidad inducidas por tetracloruro de carbono en ratones", Insuficiencia renal, vol. . 37, núm. 7, págs. 1198–1207, 2015.

[39] AD Dubiwak, TW Damtew, MW Senbetu, et al., "Efecto hepatoprotector del extracto de cormo de ensete ventricosum (bien) Cheesman contra la hepatotoxicidad inducida por isoniazida y rifampicina en ratones albinos suizos", Journal of Toxicology, vol. 2021, artículo ID 4760455, 8 páginas, 2021.

[40] TS Hoke, IS Douglas, CL Klein, et al., "La insuficiencia renal aguda después de la nefrectomía bilateral se asocia con lesión pulmonar mediada por citoquinas", Journal of the American Society of Nephrology, vol. 18, núm. 1, págs. 155–164, 2007.

[41] K. Jaikumkao, A. Pongchaidecha, LO más ongnak, et al. "La mejora de la inflamación renal, el estrés del retículo endoplásmico y la apoptosis son la base del efecto protector de dosis bajas de atorvastatina en la nefrotoxicidad inducida por gentamicina", PLoS One, vol. 11, núm. 10, artículo ID e0164528, 2016.

[42] VL Rao, D. Micic, KE Kim, et al., "Evaluación y manejo de atención primaria de problemas gastroenterológicos en mujeres", Clínicas de Obstetricia y Ginecología de América del Norte, vol. 43, núm. 2, págs. 347–366, 2016.

[43] MA Nassan, MM Soliman, A. Aldhahrani, F. Althobaiti y AQ Alkhedaide, "Impactos mejorados del extracto de raíz de Glycyrrhiza glabra contra la nefrotoxicidad inducida por gentamicina en ratones", Food Sciences and Nutrition, vol. 9, núm. 7, págs. 3405–3413, 2021.

[44] RS Wissem y A. Wannes, "Efectos antioxidantes y hepatoprotectores de la hoja de Asparagus albus en ratas con lesiones hepáticas inducidas por tetracloruro de carbono", Journal of Food Biochemistry, vol. 12, núm. 433, págs. 1 a 11, 2017.

[45] S. Gopalakrishnan y T. Kalaiarasi, "Actividad hepatoprotectora de los frutos de Cucumis sativus (L.) contra la toxicidad inducida por paracetamol en ratas albinas", Revista internacional de farmacia y ciencias farmacéuticas, vol. 20, núm. 2, págs. 229–234, 2013

Welela Meka Kedir, 1 Abebe Dukassa Dubiwak, 2 y Ebsa Tofik Ahmed 3

1 Departamento de Química, Facultad de Ciencias Naturales y Computacionales, Universidad de Mettu, Mettu, Etiopía

2 División de Bioquímica Médica, Departamento de Ciencias Biomédicas, Instituto de Ciencias de la Salud, Universidad de Jimma, Jimma, Etiopía

3 Departamento de Biología, Facultad de Ciencias Naturales y Computacionales, Universidad de Mettu, Mettu, Etiopía