Perfusión renal normotérmica ex vivo prolongada: el impacto de la composición del perfundido

edmund.chen@wecistanche.com

Resumen

Máquina de perfusión normotérmica (NMP) del donanteriñones brinda la oportunidad de mejorar la conservación del injerto y la evaluación objetiva de órganos ex vivo antes del trasplante. Actualmente, existe una multitud de soluciones de perfusión para NMP renal. Este estudio tuvo como objetivo evaluar cuatro soluciones de perfusión diferentes una al lado de la otra y determinar la influencia de diferentes composiciones de perfusión en la medidarenalparámetros de perfusión. Porcinoriñonesy la sangre se obtuvieron de un matadero.Riñonesse sometió a NMP a 37˚C durante 7 horas, con 4 soluciones de perfusión diferentes (n=5 por grupo). El grupo 1 consistió en glóbulos rojos (RBC) y una solución de perfusión basada en el Medio E de Williams. El grupo 2 consistió en RBC, albúmina y una composición equilibrada de electrolitos. El grupo 3 contenía glóbulos rojos y un medio basado en una solución de NMP clínica británica. El grupo 4 contenía glóbulos rojos y un medio utilizado en experimentos de perfusión de 24- horas. Los patrones de flujo de NMP para las soluciones 1 y 2 fueron similares, las soluciones 3 y 4 mostraron velocidades de flujo más bajas pero más estables. Las sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico fueron significativamente más altas en las soluciones 1 y 4 en comparación con los otros grupos. Los niveles del marcador de lesiones N-acetil- -D glucosaminidasa fueron significativamente más bajos en la solución 2 en comparación con las soluciones 3 y 4. Este estudio ilustra que la composición del perfundido durante la NMP afecta significativamente la perfusión medida y los parámetros de lesión y, por lo tanto, afecta la interpretación de posibles marcadores de viabilidad. Se requiere más investigación para investigar las influencias individuales de los principales componentes del perfundido para determinar las condiciones más óptimas durante la NMP y, finalmente, desarrollar criterios universales de evaluación de órganos.

Palabras clave:función renal; riñón; lesión renal; riñones perfundidos; túbulos renales

CITANCHE MEJORARÁ LA FUNCIÓN RENAL/RENAL

Introducción

En todo el mundo, el donante estándarriñónEl método de conservación es el almacenamiento en frío estático (SCS). Sin embargo, en los Países Bajos, la máquina de perfusión hipotérmica (HMP, por sus siglas en inglés) se usa clínicamente para preservar todos los donantes fallecidos.riñonesHMP mostró una disminución en la función retrasada del injerto y una mejoría 1- y 3-añorenalsupervivencia del injerto en comparación con la preservación SCS [1,2]. Para minimizar la brecha sustancial entre la oferta y la demanda de donantesriñones,donante cadavérico subóptimoriñonesse utilizan cada vez más. Debido al mayor uso de estos donantes de calidad inferior a la óptimariñones,es de suma importancia establecer aún más estrategias optimizadas para una evaluación previa al trasplante robusta y objetiva, así como para la conservación. El uso de la máquina de perfusión normotérmica (NMP) para estos donantes fallecidosriñonesse está considerando cada vez más. Los estudios preclínicos han demostrado que la NMP puede conducir a un mejor resultado del trasplante en comparación con SCS solo [3]. Como donación tras muerte cardiaca y donante con criterios ampliadosriñonesson menos tolerantes al almacenamiento hipotérmico en comparación con los órganos derivados de los procedimientos de donantes de criterios estándar, los órganos de donantes de calidad marginal podrían beneficiarse de la preservación de NMP [4,5]. Actualmente, sólo una clínicarenalEl ensayo de NMP se está llevando a cabo en el Reino Unido, con un período de perfusión previo al trasplante relativamente corto de 1 hora [6]. Sin embargo, para una valoración adecuada de los órganos y una reanimación, es posible que se necesiten tiempos de NMP más prolongados [7]. Este método brinda la oportunidad de realizar diagnósticos de órganos previos al trasplante, mejorar la conservación e intervenciones ex vivo antes del trasplante para mejorar la salud posterior al trasplante.función renal. Hoy en día, muchos centros de trasplante han comenzado a invertir en esta prometedora estrategia de perfusión normotérmica ex vivo. Entre estos centros existe una amplia variedad de soluciones de perfusión de NMP. La gran heterogeneidad en la composición podría impedir el objetivo final de definir criterios de evaluación de NMP uniformes y sólidos. Esta heterogeneidad se debe en parte a la limitada comprensión actual de cuál debería ser la formulación exacta de una solución de NMP. Lo más probable es que una solución de perfusión normotérmica tenga que contener un transportador de oxígeno, un coloide y una composición electrolítica equilibrada [8]. La composición también dependerá de la duración de la NMP, ya que los períodos de perfusión más prolongados requerirán composiciones de perfusión optimizadas para mantener un entorno casi fisiológico estable durante toda la perfusión. Este estudio evaluó cuatro soluciones de perfusión normotérmicas diferentes, tres soluciones existentes de uso común a las que no se les hicieron modificaciones y una solución de nuevo diseño. Realizamos NMP prolongado (7 h) en un porcinoriñónmodelo de donación. Nuestro objetivo fue analizar en qué medida las diferentes composiciones de perfusión en su conjunto afectan el equilibrio de electrolitos,función renal, y marcadores de lesión medidos durante NMP.

materiales y métodos

Recuperación de sangre y riñonesporcino viableriñonesde cerdos domésticos de raza local (cerda; tipo Topigs 20) y la sangre se obtuvo de un matadero local (Kroon Vlees, Groningen, Países Bajos). Los cerdos fueron aturdidos con una descarga eléctrica bitemporal y posteriormente desangrados de acuerdo con los procedimientos normales del matadero. Se recogió sangre autóloga y se añadió heparina (5000 unidades internacionales por ml (UI), LEO1 pharma, Ballerup, Dinamarca) para evitar la coagulación de la sangre.Riñonesse recuperaron rápidamente después de la muerte circulatoria del cerdo, lo que resultó en aproximadamente 20 minutos de isquemia caliente (WI) antes de la conservación en frío. Después del período WI,riñonesse enjuagaron y enfriaron con 180 ml de cloruro de sodio (NaCl) (0,9 %) (Baxter BV, Utrecht, Países Bajos) a 4 °C, lo que marcó el inicio de la isquemia fría (CI).Riñonesfueron disecados libres de exceso de tejido adiposo y los vasos sanguíneos fueron expuestos. Próximo,riñonesestaban conectados a unRiñónDispositivo Assist Transport HMP (Organ Assist, Groningen, Países Bajos). Esta máquina HMP conservariñonescon solución de perfusión mecánica UW fría (0–4˚C) (solución Belzer UW-MP, Bridge to Life Ltd, Columbia, SC) durante 2 a 4 horas usando HMP pulsátil oxigenada a una presión arterial media de 25 mmHg . La sangre autóloga heparinizada se empobreció en leucocitos utilizando un filtro de leucocitos (BioR 02 más BS PF, Fresenius Kabi, Zeist, Países Bajos), se centrifugó y, posteriormente, se eliminó el plasma sobrenadante.

Soluciones de perfusiónSe definieron cuatro grupos experimentales (n=5 por grupo), con una solución de NMP diferente en cada grupo. Antes deriñónrecuperación, se determinó la solución de perfusión que se usaría durante el experimento. Las cuatro soluciones de perfusión contenían glóbulos rojos porcinos autólogos (RBC), pero la composición de cada medio NMP era diferente (Tabla 1). En nuestro laboratorio se ha adquirido una amplia experiencia con la perfusión de porcinoriñonese hígados de roedores utilizando Williams' Medium E (WME) (Life Technologies Ltd, Bleiswijk, Países Bajos) [9–11]. Este perfundido no contiene un vasodilatador y decidimos no hacer

modificaciones a la solución inicial. La solución de perfusión del grupo 2 fue desarrollada por nuestro grupo para contener electrolitos en concentraciones fisiológicas y ejercer una presión coloidosmótica fisiológica sobre la membrana glomerular. El perfundido del grupo 3 era una solución de NMP británica sin coloides utilizada clínicamente, que actualmente se utiliza en un ensayo controlado aleatorizado que compara 1h NMP con SCS de donante humano fallecidoriñonesen el Reino Unido [12]. En cuanto al grupo 4, esta solución se utilizó con éxito en un estudio de autotrasplante porcino en Aarhus, Dinamarca [13]. Se basa en el perfundido diseñado por Weissenbacher et al., quienes perfundieron desechos humanosriñonesdurante 24 horas [7]. Además de los constituyentes mencionados anteriormente, el perfundido del grupo 1 se complementó con glucosa cuando la concentración cayó por debajo de 4 mmol/l. La orina producida fue

reemplazado cada hora con WME. En el grupo 2, una bomba de infusión de jeringa infundió nutrición parenteral total (SmofKabiven) (Fresenius Kabi Nederland BV, Zeist, Países Bajos) a una velocidad de 0,5 ml/mano de insulina (10{{1{ {12}}}}0 UI, también Novo Nordisk A/S) a razón de 0,005 ml/h. Después de cada hora, la producción de orina se recirculaba en el grupo 2 para mantener un equilibrio electrolítico estable. En el tercer grupo, se mezclaron 170 ml de glóbulos rojos puros con 120 ml de solución salina, adenina, glucosa y manitol (SAG-M), lo que llevó a un hematocrito de 0,5 a 0,65 l/l, para imitar la composición de una unidad típica de uso clínico de glóbulos rojos (que se utiliza en el perfundido de NMP clínico británico). Durante estos experimentos, se usaron tres bombas de infusión de jeringa para infundir Flolan (GlaxoSmithKline BV, Zeist, Países Bajos) a una velocidad de 5 ml/h, glucosa al 5 por ciento (Baxter BV, Utrecht, Países Bajos) a una velocidad de 4 ml/h. h y una mezcla de 150 ml de Synthamin-17 10 por ciento (Baxter Healthcare Ltd., Norfolk, Reino Unido), 6 ml de bicarbonato de sodio (NaHCO 3 ) al 8,4 por ciento (B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Alemania) , 30 UI de insulina (1000 UI, Novo Nordisk A/S, Bagsværd, Dinamarca) y Cernevit (Baxter BV, Utrecht, Países Bajos) a razón de 20 ml/h, según el protocolo del estudio clínico actual en el Reino Unido. La producción de orina se reemplazó cada hora por Ringers lactato (también Baxter BV). Durante la NMP del cuarto grupo, una bomba de infusión de jeringa infundió verapamilo (2,5 mg/ml, también Sandoz BV) disuelto en solución salina a una velocidad de 0,3 ml/h. La producción de orina también se recirculaba en este grupo después de cada hora para mantener un equilibrio electrolítico estable. Los volúmenes de muestra en cada grupo se corrigieron con diferentes componentes. El volumen en el grupo 1 se reemplazó con WME, en el grupo 2 con medio de perfusión, en el grupo 3 con Ringers lactato y en el grupo 4 con Sterofundin1 (también B. Braun).

configuración de NMPLa configuración de perfusión fue idéntica a la descrita previamente por nuestro grupo [14]. losriñonesfueron perfundidos en forma pulsátil asinusoide, con una frecuencia de 60 pulsos por minuto, en un conjunto, sin regulación de retroalimentación, presión de 110/70 mmHg y oxigenados con 95 por ciento de oxígeno/5 por ciento de dióxido de carbono (carbógeno) durante todos los experimentos. Este nivel de oxígeno suprafisiológico es un procedimiento estándar en los cuatro protocolos existentes. La perfusión se controló mediante una interfaz electrónica y un software de control hechos a medida (Software LabView, National Instruments Netherlands BV, Woerden, Países Bajos). En la figura 1 se muestra una figura esquemática del circuito de perfusión normotérmico.

Análisis de orina y perfusiónCada hora se tomaron muestras de perfusión arterial y orina. En los grupos 2 y 4, en los que se recirculaba la orina, se tomaban muestras de perfusión antes de la recirculación de la orina. Las muestras de gases en sangre arterial del perfundido se analizaron después de 0, 240 y 420 minutos de NMP. Los parámetros de perfusión se documentaron cada media hora. Las concentraciones de lactato deshidrogenasa (LDH) y aspartato aminotransferasa (ASAT), sodio, potasio, glucosa y creatinina se midieron con ensayos clínicos estándar en el perfundido. Para determinarfunción renal. Las ecuaciones se pueden encontrar en el Apéndice S1. Tanto la N-acetil- -D glucosaminidasa (NAG) (también Sigma-Aldrich), como marcador derenaldisfunción/lesión tubular y sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) (peroxidación de lípidos-malondialdehído (MDA)) Kit de ensayo, Sigma-Aldrich BV, Zwijndrecht, Países Bajos), para cuantificar el estrés oxidativo, se midieron en el perfundido.

HistologíaBiopsia con aguja de la parte superiorcorteza renalfue tomada antes del inicio de NMP. Al final de cada experimento, se recolectaron muestras de tejido quirúrgico de la corteza superior. Estas biopsias fueron

análisis estadísticoEl análisis de datos se realizó con GraphPad Prism versión 8.3.1 (GraphPad software Inc., La Jolla, CA, EE. UU.). Para todas las variables continuas medidas longitudinalmente, como ASAT y LDH, se calculó el área bajo la curva (AUC). Se utilizó un ANOVA unidireccional con comparaciones múltiples para comparar los valores de AUC entre grupos si los datos estaban distribuidos normalmente (prueba de Shapiro Wilk) y tenían homogeneidad de varianzas (probado mediante una prueba de Bartlett). Si los datos fallaban en estas suposiciones, se utilizó la prueba de Kruskal-Wallis con la prueba de comparaciones múltiples de Dunn. Se consideró que los valores p bilaterales de 0.05 o menos indicaban significación estadística.

Resultados

Parámetros de perfusiónEn la Tabla 2, los datos (media, mínimo y máximo) sobre isquemia caliente y fría, duración y peso de HMP antes del inicio y después de NMP, así como peso delta (diferencia en peso en t=420 versus t {{2 }}) son presentados. El peso delta fue significativamente mayor en el grupo 1 en comparación con el grupo 2 (p=0.041). No hubo otras diferencias significativas entre los valores de todos los grupos experimentales. Durante PNMrenalel flujo arterial aumentó durante los primeros 60 minutos de reperfusión en los grupos 1 y 2. Después de 60 minutos, las tasas de flujo normalmente comenzaron a disminuir. Las perfusiones en el grupo 3 y 4 comenzaron con valores de flujo más bajos pero mostraron un flujo más constante en todo el NMP. Los valores finales después de 7 horas de NMP fueron de aproximadamente 75 ml/min/100 g en todos los grupos (Fig. 2).

Análisis de orina y perfusiónLos datos individuales sobre los parámetros funcionales y de lesión a lo largo de la perfusión se pueden encontrar en la Tabla 3.Función renal.El grupo 3 mostró los niveles más altos de producción de orina (Fig. 3). La diuresis acumulada en el grupo 3 fue significativamente mayor en comparación con el grupo 1 (p=0.003), el grupo 2 (p < 0.001)="" y="" el="" grupo="" 4="" (p="0.008)." algunos="" de="">riñonesen el grupo 2 no produjo orina en t=180 y t=300, lo que llevó a niveles promedio más bajos de producción de orina acumulada en t=360 y t=420. Los niveles de sodio y potasio difirieron considerablemente entre los grupos (Fig. 4). Los niveles en t=0 indican los valores iniciales iniciales en la perfusión. Especialmente el grupo 3 mostró altamente

Durante la perfusión, el pH en el grupo 3 disminuyó sin estabilizarse, mientras que los otros grupos alcanzaron un nivel más equilibrado de aproximadamente 7,4 después de 7 horas de NMP (Fig. 5). El aclaramiento de creatinina fue bajo en todos los grupos (Fig. 6A y 6B). Sin embargo, fue significativamente mayor que en el grupo 3 en comparación con el grupo 2 (p=0.039). La excreción fraccional de creatinina por 100 g (Fig. 6C y 6D) fue significativamente mayor en el grupo 3 en comparación con el grupo 1 (p=0.026), el grupo 2 (p=0.017) y el grupo 4 ( p= 0.045). FENa plus fue alto en todos los grupos, lo que indica que la función tubular estaba gravemente afectada (Fig. 6E y 6F) en estos pacientes con daño isquémico.riñones. FENa plus en el grupo 3 fue significativamente mayor en comparación con el grupo 2 (p=0.037) y el grupo 4 (p=0.019). Todos los demás grupos no difirieron significativamente.Lesión renal.Se analizaron los niveles de ASAT durante NMP (Fig. 7A y 7B) como marcador de daño celular general. Se determinó el AUC medio para cada grupo. Los niveles en el grupo 4 fueron significativamente más altos en comparación con el grupo 1 (p=0.022) y el grupo 2 (p=0.011). Los niveles de LDH también se midieron en el perfundido como marcador general de lesiones (Fig. 7C y 7D). Se calculó un AUC que mostró los niveles más bajos de LDH en los grupos 1 y 2. El grupo 2 fue significativamente más bajo en comparación con el grupo 4 (p=0.020). El grupo 1 mostró niveles significativamente más bajos en comparación con el grupo 4 (p=0.022). Los niveles de NAG fueron significativamente más altos en el grupo 3 en comparación con el grupo 1 (p=0.043) y el grupo 2 (p=0.006) (Fig. 8A y 8B). TBARS, la concentración de malondialdehído (MDA), se midieron en los cuatro grupos como marcador de peroxidación lipídica (Fig. 8C y 8D). Los niveles de MDA fueron significativamente más altos en el grupo 1 en comparación con el grupo 2 (p=0.003) y el grupo 3 (p < 0.001).="" el="" grupo="" 2="" mostró="" niveles="" de="" mda="" significativamente="" más="" bajos="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" 4="" (p="0.006)." el="" grupo="" 3="" mostró="" niveles="" significativamente="" más="" bajos="" en="" comparación="" con="" el="" grupo="" 4=""><>

Histología

Los diagramas de puntos en la Fig. 9 muestranrenalpuntuaciones de daño tubular/ATN, dilatación tubular y dilatación glomerular antes del inicio de NMP (t {{0}}) y después de 7 horas de NMP (t=420). Los valores iniciales de necrosis histológica y dilatación tubular fueron comparables entre los grupos, con solo diferencias marginales en las puntuaciones finales. La dilatación glomerular en t=420 fue notablemente menor en el grupo 2 en comparación con los otros 3 grupos. Las cifras histológicas por grupo se pueden encontrar en la inducción de pliegues de Bax y Bcl-2 de la figura S1, indicadores de la expresión de genes pro y antiapoptóticos, respectivamente, ambos mostraron un cambio en los niveles de NMP de punto final en comparación con los niveles en t=0 (figura 10). La expresión del gen Delta Bax (diferencia entre t=0 y t=420) se calculó en todos los grupos y fue significativamente mayor en el grupo 1 en comparación con el grupo 2 (p=0.046), grupo 3 (p < 0,001)="" y="" grupo="" 4="" (p="0,003)." la="" expresión="" de="" bcl-2="" disminuyó="" en="" todos="" los="" grupos="" después="" de="" 7="" horas="" de="" perfusión="" sin="" diferencias="" significativas="" entre="" los="">

Discusión

interés general enrenalLas técnicas normotérmicas de perfusión mecánica ex vivo están aumentando, pero la evidencia clínica sigue siendo limitada con solo un ensayo clínico de NMP en curso. Se han realizado extensos estudios preclínicos para investigar el potencial de la NMP. Una plétora de diferentesrenalLos perfundidos normotérmicos existen entre diferentes grupos de investigación. Sin embargo, la pregunta de hasta qué punto la composición del perfundido impactafunción renaly cómo afecta la interpretación de los posibles marcadores de viabilidad permanece. Por lo tanto, este estudio evaluó la influencia de cuatro diferentes soluciones de perfusión ex-vivo normotérmicas una al lado de la otra enfunción renalylesión renaldurante NMP prolongado utilizando un porcinoriñóndonación después del modelo de muerte circulatoria.

evaluar aisladofunción renalantes del trasplante. Hosgood y sus colegas proporcionaron la primera evidencia clínica de la viabilidad de la evaluación de viabilidad previa al trasplante duranterenalNMP. Su solución de perfusión es actualmente la más utilizada durante NMP y se desarrolló inicialmente para evaluarfunción renalantes del trasplante en un lapso de tiempo de 1 a 2 horas [16].Riñonesperfundidos con esta solución suelen mostrar una alta producción de orina [17]. De hecho, la mayor producción de orina se observó en el grupo 3, que se basa en este perfundido clínico del Reino Unido, lo que lleva a una excreción urinaria más que completa del volumen circulante del perfundido en este grupo durante 7 horas de NMP. La pérdida continua de volumen de líquido de perfusión circulante tuvo que compensarse con la adición intermitente de volúmenes similares de lactato de Ringer, conforme al protocolo clínico para esta solución de perfusión. En nuestro estudio, esto resultó en alteraciones considerables de la composición electrolítica y el pH, ya que la orina no se recirculaba. Esta alta producción urinaria probablemente se puede atribuir a la ausencia de un coloide solo en esta solución de perfusión. Las soluciones de perfusión de los otros tres grupos contenían una cantidad considerable de albúmina. En el espacio intravascular, la albúmina es el principal componente que mantiene una presión coloidosmótica normal [18]. El equilibrio entre la presión hidrostática y la presión osmótica coloidal da como resultado una tasa de ultrafiltración fisiológica sobre la membrana glomerular [19]. Kaths et al. mostró que la producción de orina durante NMP no se correlacionó con la función posterior al trasplante. Ellos plantearon la hipótesis de que la producción de orina está influenciada en gran medida por la composición del perfundido, en particular, la presión oncótica y la osmolaridad, lo cual está en línea con nuestros resultados [20].

LA CITANCHE MEJORARÁ LA INSUFICIENCIA RENAL/RENAL

El principal órgano responsable de la regulación de electrolitos es elriñónpero hay pruebas de que elriñónen sí también se beneficia de un equilibrio en electrolitos. Se ha establecido que un desequilibrio en el potasio y, específicamente, la hipopotasemia, puede conducir a una variedad de cambios enfunción renalincluyendo alteración del transporte tubular, alteración de la capacidad de concentración urinaria, alteración de la reabsorción de sodio y acidosis intracelular [21–23]. Para tener en cuenta la pérdida urinaria inevitable de electrolitos perfundidos importantes, Weissenbacher et al. propusieron el uso de la recirculación de la orina durante la NMP. Demostraron que facilita el mantenimiento adecuado del volumen de perfusión y la homeostasis en humanos desechadosriñones, incluso después de 24 horas de NMP [7]. La concentración de albúmina medida en el perfundido disminuyó con el tiempo durante la perfusión. Lo más probable es que esta disminución se deba a la adherencia de la albúmina al tubo de plástico del circuito de perfusión y solo una pequeña cantidad puede atribuirse a la pérdida en la orina producida, lo que también se observa en otros estudios de NMP [24]. Esta pérdida urinaria de albúmina puede explicarse por el daño inducido por la isquemia caliente en las células endoteliales con una interrupción de los diafragmas del filtro que produce proteinuria, lo que está en línea con nuestros niveles observados de albuminuria durante la NMP [25].

No podemos explicar completamente el mecanismo de las diferencias entre grupos que observamos enriñónganancia de peso durante NMP. El examen histológico no fue determinante sobre posibles áreas de formación de edema. Se necesita más investigación para aclarar los mecanismos potencialmente multifactoriales del aumento de peso en relación con la solución de perfusión utilizada. Se midieron varios parámetros de perfusión, donderenalEl flujo mostró las diferencias más llamativas.Renalel flujo en los grupos 3 y 4 mantuvo los niveles más estables a lo largo del período de NMP de 7- horas. Las soluciones de estos grupos se complementaron con un vasodilatador, mientras que las soluciones de los dos primeros grupos no. Los vasodilatadores endógenos promueven la relajación del músculo liso vascular y, por lo tanto, regulan el flujo sanguíneo regional [26]. Como los grupos 1 y 2 no se complementaron con un vasodilatador, los vasoespasmos podrían haber resultado en una reducciónrenalflujo arterial Además, existe evidencia de que el flujo medular y cortical se puede regular individualmente [27,28]. Los datos preliminares no publicados de nuestro grupo, basados ​​en mediciones de flujo de resonancia magnética funcional (ASL) precisas y cuantitativas durante NMP, respaldan firmemente este mecanismo. En esos experimentos,renalel flujo durante la primera hora de NMP es principalmente medular, que cambia a flujo cortical después de más de una hora de perfusión. Esta redistribución regional del flujo podría explicar el pico observado en las perfusiones de los grupos 1 y 2, posiblemente debido al cortocircuito medular durante la primera hora. La adición de un vasodilatador al comienzo de la NMP podría mejorar una microperfusión predominantemente cortical inmediatamente al comienzo de la NMP, lo que daría como resultado un flujo más estable como se observó en los grupos 3 y 4. Por lo tanto, si un patrón de flujo estable y un flujo predominantemente cortical posiblemente más fisiológico se desea perfusión durante la NMP, puede ser aconsejable añadir un vasodilatador a la solución de perfusión. Alternativamente, el lavado repetido de los glóbulos rojos antes de la perfusión podría reducirrenalvasoconstricción al disminuir la actividad vasoconstrictora de los glóbulos rojos [29].

Función del riñóndurante NMP se vio notablemente afectada en todos los porcinosriñones, posiblemente debido al daño isquémico caliente inicial y la falta de mecanismos reguladores humorales fisiológicos, como los impulsados ​​por la hormona antidiurética y la aldosterona. El aclaramiento de creatinina fue bajo y se observaron valores altos de FENa plus en todos los grupos. El aumento repentino de FENa plus después de 3 horas de NMP en el grupo 2 podría haber sido el resultado de la ausencia de producción de orina en variosriñonesen t=240 y t=300, mientras que al final de la perfusiónriñonesempezó a producir orina de nuevo. Los valores elevados de FENa plus son presumiblemente el resultado de la necrosis tubular, como también se ha informado en estudios previos [30,31]. Además, el aclaramiento de creatinina in vivo y los niveles de FENa plus están influenciados en gran medida por la regulación humoral. Como regulación humoral

faltaron durante los experimentos de NMP, la eliminación fisiológica de creatinina y los niveles de FENa plus no son de esperar en nuestra configuración de NMP.

Para cuantificar el daño arenalSe midieron los niveles de células, ASAT y LDH. Los niveles más altos se observaron en los grupos 3 y 4, lo que sugiere que la mayoría de las lesiones ocurrieron en estos dos grupos. Kaths et al. mostró que el aumento de los niveles de ASAT durante NMP se correlaciona con el postrasplantefunción renaly, por lo tanto, ASAT podría ser un importante biomarcador de evaluación de viabilidad de órganos [20]. La influencia de diferentes composiciones de perfusión en los niveles de ASAT medidos enfatiza la importancia de armonizar los protocolos de NMP entre los centros de trasplante, para permitir una interpretación consistente de los datos de NMP a nivel mundial. Los niveles de NAG, un marcador de integridad tubular alterada y daño tubular [32,33], fueron más altos en el grupo 3, lo que indica que la mayoría de las lesiones tubulares ocurrieron en este grupo. Se midieron los niveles de TBARS para cuantificar el estrés oxidativo durante la perfusión. Los niveles más altos se observaron en los grupos 1 y 4, lo que sugiere queriñonesen estos grupos experimentaron el estrés oxidativo más alto, lo que podría haber resultado en un deterioro de la función celular [34]. El cambio en la relación Bax/Bcl-2 después de 7 horas de NMP en comparación con la biopsia antes de la NMP es probablemente el resultado del período isquémico tibio inicial, en lugar de los efectos potencialmente dañinos que ocurren durante la NMP. La lesión isquémica que sigue a la reperfusión consiguiente induce una cascada de apoptosis reguladora, que desempeña un papel clave en el proceso de reparación del túbulo proximal dañado [35]. Aunque se han propuesto muchos marcadores de lesiones normotérmicas, hasta la fecha ninguno ha sido validado en un ensayo clínico bien desarrollado. Un estudio que correlaciona una serie de marcadores de lesión prometedores medidos durante NMP con postrasplantefunción renalse requiere para dilucidar qué biomarcadores potenciales deben incorporarse en los criterios de evaluación de viabilidad normotérmica ex-vivo.

LA CITANCHE MEJORARÁ LA INFECCIÓN RENAL/RENAL

Nuestra configuración de NMP se utilizó junto con un modelo porcino de DCDriñóndonación en que mataderoriñonesfueron utilizados. Una limitación de este estudio es que un procedimiento de matadero se basa en la exanguinación seguida de un paro cardíaco, lo que lo hace ligeramente diferente de un modelo DCD real en el que el paro circulatorio es el resultado de una isquemia y/o insuficiencia cardíaca. Sin embargo, observamos queriñonesen nuestro estudio mostró lesión isquémica similar a la incurrida después de DCD [36, 37]. Por lo tanto, creemos que el actual modelo DCD de matadero ayudará a reducir el uso de animales de laboratorio mientras mantiene la confiabilidad y reproducibilidad esenciales. Aunque nuestros grupos experimentales eran relativamente pequeños, los tamaños de nuestros grupos son comparables a los de otros animales porcinos.riñónestudios de perfusión con máquina [17,38–40]. Los parámetros de perfusión de NMP que registramos en el grupo 3, que se basó en la solución de perfusión clínica británica utilizada por Hosgood et al., no pueden compararse completamente con los resultados informados previamente por el grupo de Leicester/Cambridge [6,12]. En nuestro estudio,riñonesexperimentaron un período mucho más largo de NMP y fueron perfundidos con una presión arterial media más alta. Es más,riñonesperfundido por Hosgood et al. fueron trasplantados después de la perfusión de la máquina. Para una comparación completamente confiable entre las cuatro soluciones de perfusión, un estudio futuro debe incluir el trasplante deriñonesdespués de NMP, ya que esto permitirá un seguimiento real y una evaluación funcional in vivo.

En conclusión, la perfusión de porcinoriñonesresultó factible con las cuatro soluciones probadas. Sin embargo, hubo diferencias sustanciales entre los niveles de electrolitos,función renalparámetros y marcadores de lesión en los cuatro grupos. Estas diferencias, en combinación con la heterogeneidad actual en las soluciones de perfusión aplicadas entre los grupos, impide el desarrollo de criterios estandarizados de evaluación de NMP. Creemos que, tanto en la NMP experimental como en la clínica, es esencial especificar cuidadosamente el propósito exacto y la duración deseada de la NMP, ya que cada uno podría requerir los ajustes necesarios en el protocolo de perfusión y perfusión. Es importante enfatizar que este estudio se centró en los efectos de los perfundidos existentes como un todo en los resultados medidos, en lugar de investigar las funciones de los componentes individuales del perfundido. Se requieren más estudios para dilucidar las influencias individuales y los méritos de cada ingrediente perfundido durante NMP