Transmisión del virus de la peste porcina clásica en lechones que conviven con diversos estados inmunológicos después de una vacuna viva atenuada

Resumen sencillo:

La peste porcina clásica es un patógeno muy peligroso que afecta a los cerdos domésticos. La vacunación con la vacuna viva modificada es fundamental para prevenir y controlar la peste porcina clásica. Sin embargo, muchos factores, como los anticuerpos maternos a través del calostro, podrían interferir con la eficacia de las vacunas vivas, lo que llevaría a una protección incompleta en los rebaños comerciales. En este estudio, investigamos la transmisión del virus de la peste porcina clásica en lechones experimentales con diversos estados inmunitarios posvacunación. Un lechón libre de patógenos específicos infectado con el virus de la peste porcina clásica sirvió como donante viral e invasor primario y cohabitó con lechones con anticuerpos maternos que habían sido vacunados o no. Según los resultados, la mayoría de los lechones con anticuerpos maternos que fueron vacunados estaban completamente protegidos de la transmisión por contacto del donante viral y bloquearon la transmisión viral a terceros (aquellos lechones expuestos secundariamente a través de la convivencia). La inmunidad mediada por células, representada por células secretoras de interferón- -específicas, sirvió como clave para la eliminación y recuperación viral. Por el contrario, los lechones no vacunados con niveles bajos de anticuerpos maternos habían acelerado la infección por el virus de la peste porcina clásica tras la invasión viral. En conclusión, la vacunación aún induce una inmunidad sólida en los rebaños comerciales bajo la interferencia de anticuerpos maternos y puede bloquear la transmisión viral en los rebaños.

planta cistanche que aumenta el sistema inmunológico

Abstracto:

La peste porcina clásica (PPC) es una enfermedad hemorrágica sistémica que afecta a los cerdos domésticos y a los jabalíes. La vacuna viva modificada (MLV) induce una protección rápida y sólida contra la infección por el virus de la peste porcina clásica (CSFV). Los anticuerpos derivados de la madre (MDA) a través del calostro podrían interferir con la eficacia del MLV, lo que provocaría una protección incompleta contra la infección por CSFV en los cerdos. Este estudio investigó la transmisión del CSFV entre lechones experimentales con diversos estados inmunes post-MLV. Diecinueve lechones, 18 con MDA y 1 lechón libre de patógenos específicos infectado con CSFV que sirvió como donante de CSFV, cohabitaron con lechones a los que se les había administrado o no el MLV. Cinco sextas partes de los lechones con MDA a los que se les había administrado una dosis de MLV estaban completamente protegidos de la transmisión por contacto del donante de CSFV y no transmitieron el CSFV a los lechones expuestos secundariamente a través de la convivencia. La inmunidad mediada por células, representada por las células secretoras de interferón- -específicas anti-CSFV, fue clave para la eliminación y recuperación viral. Después de la convivencia con un donante de PPCV, los lechones no vacunados con niveles bajos de MDA presentaron infección por PPCV y transmitieron el virus a otros lechones mediante contacto; aquellos con niveles altos de MDA se recuperaron pero actuaron como portadores asintomáticos. En conclusión, el MLV aún induce una inmunidad sólida en rebaños comerciales bajo la interferencia de MDA y bloquea la transmisión del CSFV dentro de estos rebaños.

Palabras clave:

peste porcina clásica; vacuna viva modificada; anticuerpo de origen materno; transmisión

1. Introducción

La peste porcina clásica (PPC) es una enfermedad hemorrágica transfronteriza, altamente contagiosa, que afecta a cerdos domésticos y jabalíes y está causada por el virus de la peste porcina clásica (PPCV) [1,2]. La PPC es una enfermedad de declaración obligatoria ante la Organización Mundial de Sanidad Animal (WOAH), y la PPC sigue siendo una enfermedad endémica en Asia, América del Sur, América Central y el Caribe. Sólo los países de América del Norte, Oceanía y Europa occidental han erradicado con éxito la peste porcina clásica [3–6].

El CSFV es un virus de ARN monocepa envuelto delpestivirusgénero de la familia Flaviviridae que también comprende el virus de la diarrea viral bovina y el virus de la enfermedad de la frontera [1,2]. El genoma viral contiene aproximadamente 12,3 kb y codifica 3898 aminoácidos de poliproteína, que luego se procesan en cuatro estructurales (C, Erns, E1 y E2) y ocho no estructurales (Npro, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, y NS5B) por proteasas virales y celulares [7]. Según las secuencias E2 o NS5B, el CSFV se clasifica en tres genotipos con tres o cuatro subtipos (1.1, 1.2, 1.3; 2.1, 2.2, 2.3; 3.1, 3.2, 3.3, 3.4) [8]. Dependiendo de la virulencia del virus de la peste porcina clásica y de los factores porcinos, incluida la edad, la raza, el estado de salud y el estado inmunológico, los cerdos infectados por el virus de la peste porcina clásica pueden presentar signos clínicos agudos, subagudos o crónicos [9-11]. Los cerdos infectados con CSFV de alta virulencia presentan fiebre aguda y lesiones hemorrágicas severas y excretan altas cargas virales en sus heces, saliva y secreciones durante sus cortos días de supervivencia. Por el contrario, los cerdos infectados con CSFV de virulencia moderada y baja presentan signos clínicos subagudos y crónicos y lesiones más leves y excretan niveles moderados-bajos de CSFV en sus heces, saliva y secreciones durante sus días de supervivencia relativamente más largos [12,13 ]. En el campo, los cerdos principalmente infectados pueden desempeñar un papel destacado en la transmisión secundaria del virus de la peste porcina clásica a otros cerdos con inmunidad variable al virus de la peste porcina clásica. La transmisibilidad del virus de la peste porcina clásica de virulencia moderada y alta es mayor que la del virus de la peste porcina clásica de baja virulencia [12,13].

La vacunación es crucial para la prevención y el control de la peste porcina clásica en los países endémicos. La vacuna viva modificada (MLV) es una vacuna de alta eficacia, segura y asequible que es la más utilizada entre los rebaños comerciales. El MLV puede inducir rápidamente inmunidad para proporcionar protección parcial 3 días después de la vacunación y protección completa 5 días después de la vacunación [14-16]. Sin embargo, muchos factores, incluido el estado de salud de los cerdos de calidad de la vacuna y el nivel de anticuerpos maternos (MDA), pueden reducir la eficacia del MLV, lo que lleva a una protección incompleta de los cerdos vacunados [14-16]. En rebaños endémicos de PPC, el momento de la vacunación con MLV depende de los niveles de MDA de los cerdos; los niveles altos de MDA interfieren con la eficacia del MLV y los niveles bajos de MDA aumentan el riesgo de infección de los lechones [17,18]. Por lo tanto, las formulaciones de programas de vacunación MLV en rebaños deben basarse en disminuciones en los niveles de MDA. Un programa de vacunación implementado regularmente contra la peste porcina clásica en Taiwán implica vacunar a cerdas preñadas para proporcionar MDA a través de su calostro a los recién nacidos y luego administrar la primera dosis de MLV a los lechones entre las 3 y las 12 semanas de edad. Según la vigilancia en Taiwán, los títulos promedio de anticuerpos neutralizantes (NA) anti-CSFV de MDA en lechones en el momento de su primera vacunación con MLV son superiores a 1:32 [19], lo que podría afectar la eficacia del MLV y dar lugar a varias Estados inmunológicos en rebaños. Este estudio describe un experimento con animales para examinar la capacidad de MLV para proteger a lechones con niveles variables de MDA después de la convivencia con un lechón infectado con CSFV que actuó como donante de CSFV (es decir, el "invasor primario").

2. Materiales y métodos

2.1. Células y virus

Se cultivaron células de riñón porcino libre-1-tipo circovirus porcino-15 (PK-15) en medio esencial mínimo (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, EE. UU.) con suero bovino fetal al 5 %. (FBS) y se incubaron a 37 ◦C en 5% de CO2. Las células PK-15 apoyaron la propagación del CSFV, incluida la cepa vacunal Lapinized Filipinas Coronel (LPC) de genotipo 1.1 y la cepa TD/96 de genotipo 2.1. Los títulos de virus de las cepas LPC y TD/96 fueron 107,71 y 105,87 dosis infecciosa en cultivo de tejidos al 50% (TCID50), respectivamente.

2.2. Diseño experimental

Un total de {{0}}lechones de una semana de edad, compuesto por 1 lechón libre de patógenos específicos (SPF) sin NA anti-PPCV (Grupo 1) y 18 lechones sanos (Grupos 2 a 5) de los animales vacunados con LPC. En el experimento se utilizaron cerdas de un rebaño libre de PPC (Figura 1). Los 18 lechones sanos se dividieron aleatoriamente en cuatro grupos (Grupos 2 a 5); las medias del título de NA anti-LPC (log2) entre los grupos 2 a 5 fueron, respectivamente, 3,7 ± 2,2, 3,7 ± 2,3, 4,3 ± 2,2 y 4,3 ± 1,3 log2 veces y no fueron significativamente diferentes en 0 días post-experimento (DPE). Irónicamente, el lechón SPF (Grupo 1) se inoculó utilizando la cepa 5 × 105 TCID50 TD/96 a los 7 DPE y sirvió como invasor principal o donante de CSFV cuando cohabitaba en la Sala 12 con los Grupos 2 y 3 (Figura 1). Para probar si los MDA redujeron la eficacia del MLV, el grupo 2 (n=6) fue vacunado con una dosis única de vacuna LPC (más de 1 × 104 TCID50/dosis) a 0 DPE. Para probar la capacidad de protección de MDA, el Grupo 3 (el control del Grupo 2; n=3) no fue vacunado con la vacuna LPC y, por lo tanto, estos lechones exhibieron descomposición de MDA después de 7 días después del primer contacto con el invasor primario. El Grupo 1 (invasor primario) cohabitó con los Grupos 2 y 3 durante 10 días (de 7 a 17 DPE). Luego, el Grupo 2 fue transferido a la Sala 2 para servir como invasores secundarios mediante la convivencia con el Grupo 4 (n=6) de 17 a 36 DPE. El grupo 3 fue trasladado a la habitación 4 para convivir con el grupo 5 (n=3). Por tanto, los grupos 4 y 5 eran lechones con 17 días de descomposición de MDA tras el primer contacto con los invasores secundarios. El Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Instituto de Investigación en Salud Animal aprobó este experimento con animales (número de aprobación A09007).

Figura 1. Diseño experimental.

Los animales fueron monitoreados diariamente para detectar signos clínicos y cada parámetro se calificó de 0 a 3, lo que representa normal a grave, según el método de Mittelholzer [19]. Se midió la temperatura rectal y se recogieron muestras de sangre, saliva y heces dos veces por semana hasta los 35 DPE. Las muestras se analizaron para detectar cargas de CSFV y anticuerpos anti-CSFV. Se realizó una necropsia a los 18 DPE para el Grupo 1, a los 36 DPE para los Grupos 2 y 3, y a los 39 DPE para los Grupos 4 y 5. Las muestras ambientales (es decir, hisopos de la cerca, heces en el piso, el comedero, y el bebedero) también fueron analizados para detectar el virus de la peste porcina clásica.

2.3. Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real con transcripción inversa cuantitativa (QRRT-PCR) del VPPC

Los ARN virales de las muestras se extrajeron con el QIAamp® Viral RNA Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Alemania) y se detectaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa cuantitativa (QRRT-PCR) [20]. Se utilizó QRRT-PCR para detectar los distintos genotipos y analizar cuantitativamente las cargas de CSFV de las muestras.

Beneficios de cistanche para hombres: fortalece el sistema inmunológico.

Haga clic aquí para ver los productos Cistanche Enhance Immunity

【Pregunte por más】 Correo electrónico:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. AN anti-PPCV

El calentamiento de los sueros de los lechones a 56 ◦C de complemento inactivado permitió la detección de NA anti-LPC y TD/96. En resumen, se mezclaron muestras de suero diluidas en serie 2- veces, comenzando en 1:4, con volúmenes iguales de 100 TCID50 de la cepa LPC o TD/96. Las mezclas se incubaron a 37 ◦C durante 1 h y posteriormente se transfirieron a células PK-15 en placas de 96-pocillos. Después de una incubación durante 3 días, las células se fijaron y se tiñeron para detectar la presencia del antígeno del CSFV mediante un ensayo de fluorescencia indirecta. El título neutralizante del anticuerpo es el log2 del factor de dilución del anticuerpo (recíproco de la dilución) cuando el 50% de los pocillos están protegidos de la infección.

2.5. Células secretoras de interferón (IFN) específico del CSFV- -

Para evaluar la inmunidad mediada por células (CMI) anti-CSFV de los lechones, se realizó una prueba ex vivo de respuesta al IFN específica del CSFV de las células mononucleares de sangre periférica (PBMC). Las PBMC de la sangre anticoagulada con EDTA se sometieron a centrifugación a 400 × g utilizando Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.). Las PBMC se suspendieron en medio RPMI 1640 (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, EE. UU.) que contenía FBS inactivado por calor al 10 % (vol/vol), 100 unidades/ml de penicilina G, 100 µg/ml de estreptomicina y 0,25 µg/ml. ml de anfotericina B. El número de PBMC secretoras de IFN- -específicas de CSFV se detectó mediante el ensayo ELISPOT enzimático de IFN de un solo color porcino (CTL, Shaker Heights, OH, EE. UU.). En placas de 96-pocillos, se asignaron PBMC a 5 x 106 células/mL a 100 µL por pocillo con anticuerpo de captura de IFN porcino al grupo simulado (inoculado con medio RPMI 1640), al grupo TD/96 (infectado con 0,1 MOI) y el grupo ConA (suplementado con 5 µg/ml de concanavalina A; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.), que sirve como control positivo. Se emplearon estimulaciones dúplex cada vez. Después de 48 h de estimulación, se lavaron los pocillos, se unió el anticuerpo detectado con IFN- - y se sembró el sustrato. Las manchas en cada pocillo se examinaron y analizaron utilizando el analizador CTL.

2.6. Inmunohistoquímica

Los tejidos linfoides se examinaron mediante un ensayo inmunohistoquímico utilizando el sistema de detección Super Sensitive Polymer HRP IHC (BioGenex, La Haya, Países Bajos) y el anticuerpo monoclonal 1C7A1 contra las cepas de CSFV del genotipo 2.1 [21]. El desarrollo de un color marrón indica la presencia de CSFV.

2.7. Estadísticas

Se utilizó un análisis de varianza y la prueba de rangos múltiples de Duncan para determinar las diferencias estadísticamente significativas entre los grupos. El análisis de los datos se realizó mediante SAS (SAS Institute, Cary, NC, EE. UU.). Un valor de p inferior a 0.05 indicó significación estadística.

3. Resultados

3.1. Signos clínicos

Todos los lechones estaban sanos antes del experimento (Tabla 1). El lechón del Grupo 1 fue el donante de CSFV (invasor primario) y fue inoculado con la cepa TD/96. La fiebre y los signos clínicos asociados al CSFV en el Grupo 1 se detectaron a los 12 DPE y 13 DPE, respectivamente, con puntuaciones en continuo aumento de 13 a 18 DPE que alcanzaron un máximo con una puntuación de 20 a los 18 DPE. Para los lechones de los Grupos 2 y 3 que cohabitaron con el donante de CSFV, el Grupo 2, que estaba formado por lechones con MDA que habían sido vacunados con la vacuna LPC, estaban sanos y no mostraron fiebre ni ningún signo clínico asociado con CSFV durante el experimento. . Sin embargo, los del Grupo 3, que comprendía los lechones con MDA que no se habían sometido a la vacunación con LPC, presentaron fiebre a los 23 DPE (16 días después del primer contacto, DP1C), y el número de cerdos febriles aumentó de 23 a 36 DPE. La fiebre se correlacionó con signos clínicos asociados al CSFV que se manifestaron a los 24 DPE (17 DP1C). Aunque un lechón (8138) presentó signos clínicos leves (puntuaciones inferiores a 5), ​​los otros dos lechones se deterioraron clínicamente entre 24 y 36 DPE, con puntuaciones que oscilaron entre 12 y 16. El lechón 8136 del Grupo 3 murió a los 29 DPE. Los lechones del Grupo 4 que estuvieron en contacto (cohabitaron) con los del Grupo 2 también estaban sanos y no presentaron fiebre ni signos clínicos asociados al PPC durante el periodo experimental. Los lechones del Grupo 5 que estuvieron en contacto con los del Grupo 3 presentaron fiebre a los 27 DPE (10 días después del segundo contacto, DP2C) y signos clínicos asociados al CSFV a los 30 DPE (13 DP2C). El número de lechones febriles y las puntuaciones clínicas en el Grupo 5 aumentaron con el tiempo; la puntuación a los 39 DPE fue de 21 ± 1,4, oscilando entre 19 y 22.

Tabla 1. Porcentaje de lechones febriles en cada grupo durante el periodo experimental.

Según los parámetros clínicos, la presencia únicamente de MDA (Grupo 3) no pudo proteger a los lechones de la transmisión por contacto inducida por el invasor primario (Grupo 1). Una dosis única de la vacuna LPC además de las MDA (Grupo 2; es decir, la práctica ampliamente aplicada) ofreció protección contra la transmisión por contacto inducida por el invasor primario (Grupo 1; Tabla 1). La práctica de vacunación ampliamente aplicada también benefició a los lechones invadidos secundariamente (es decir, el Grupo 4, que solo tenía MDA pero no tenía fiebre ni signos clínicos). Clínicamente, la situación en el Grupo 5 (los lechones con transmisión por contacto inducida por los invasores secundarios) recapituló la situación en el Grupo 3 (transmisión por contacto inducida por el invasor primario).

3.2. Viremia por virus de la peste porcina clásica (PPC)

La cepa CSFV TD/96 no se detectó en la sangre de ninguno de los lechones antes del experimento (Figuras 2A y 3A). Después de la inoculación de TD/96, la viremia de TD/96 en el lechón del Grupo 1 se detectó por primera vez a los 10 DPE (3 días después de la inoculación, POI) y se detectó continuamente hasta el 17 DPE. Las cargas de CSFV aumentaron de 101,2 TCID50/ml a los 10 DPE a 106,4 TCID50/ml a los 17 DPE. En el Grupo 2, que comprende los lechones con vacunación LPC que habían cohabitado con el invasor primario, se detectó viremia TD/96 en solo un lechón (8134) entre 21 y 35 DPE. Las cargas de CSFV en la sangre de Piglet 8134 alcanzaron un máximo (104,9 TCID50/ml) a los 24 DPE y posteriormente disminuyeron a 101,7 TCID50/ml a los 35 DPE. En el grupo 3, que comprende los lechones sin vacunación LPC que habían cohabitado con el invasor primario, se detectó por primera vez viremia TD/96 en el 66,7% (2/3) de los lechones a los 21 DPE (14 DP1C), y todos fueron positivos a los 24. DPE. Sin embargo, Piglet 8138 fue negativo para la viremia TD/96 entre 28 y 35 DPI (Figura 2A). En el Grupo 4, formado por los lechones que convivieron con el Grupo 2 en la Sala 2, no se detectó viremia TD/96 durante el período experimental. Todos los lechones del Grupo 5, que comprendía los lechones que habían estado en contacto con el Grupo 3, dieron positivo para la viremia TD/96 entre el 31 y el 35 DPE. Las cargas de CSFV oscilaron entre 105,1 y 106,7 TCID50/ml a los 35 DPE (Figura 3A). En los Grupos 2 y 3, la presencia de MDA retrasó la primera detección de viremia hasta el 10 DP1C (es decir, los lechones permanecieron asintomáticos hasta el 17 DPE; Tabla 1) con el invasor primario, en comparación con el día 3 POI en el Grupo 1 en la fase aguda. fase. La dosis única adicional de la vacuna LPC (Grupo 2) redujo el porcentaje de cerdos virémicos en un 83% (Figura 2A). De manera similar, la dosis única adicional de la vacuna LPC redujo las cargas virales en la sangre de 28 a 35 DPE (Figura 3A). La vacunación LPC del Grupo 2 también benefició a los lechones del Grupo 4 con los que cohabitaron posteriormente (invadidos secundariamente), a pesar de que uno de los lechones del Grupo 2 tuvo viremia transitoria (Figura 2A) y saliva (Figura 2B) y excreción fecal (Figura 2C) de TD. /96. Este cambio en el estado virémico se correlacionó con el determinado sobre la base de los parámetros clínicos (Sección 3.2), aunque la detección de laboratorio fue más sensible.

Figura 2. Número (porcentaje) de lechones positivos para TD/96 detectados mediante QRRT-PCR [20] de (A) sangre, (B) saliva y (C) heces de los lechones en cada grupo durante el periodo experimental. Irónicamente, el lechón del Grupo 1 fue inoculado con TD/96 en el 7 DPE y sirvió como donante de CSFV (es decir, invasor primario) para los Grupos 2 y 3. Los lechones del Grupo 2 que se sometieron a la vacunación con LPC en el 0 DPE y los del Grupo 3 que no se sometió a la vacunación LPC y cohabitó con el lechón del Grupo 1 entre el 7 y el 17 DPE. Los lechones de los Grupos 4 y 5 cohabitaron con los de los Grupos 2 y 3 (es decir, invasores secundarios), respectivamente, entre 17 y 36 DPE.

Figura 3. Las cargas de CSFV están presentes en (A) sangre, (B) saliva y (C) heces de los lechones de cada grupo.

3.3. Eliminación del virus de la peste porcina clásica en la saliva

La cepa CSFV TD/96 no se detectó en la saliva de ninguno de los lechones antes del experimento (Figuras 2B y 3B). La saliva del lechón del Grupo 1 fue positiva por primera vez para TD/96 a los 14 DPE (7 DP1C), que continuó hasta el 17 DPE. Las cargas de CSFV aumentaron de 105,8 TCID50/ml a los 14 DPE a 107,6 TCID50/ml a los 17 DPE. En particular, en los lechones del grupo 2 que habían sido vacunados con LPC y habían convivido con el donante de CSFV, se detectó por primera vez TD/96 en el 66,7% (4/6) de las muestras de saliva a los 14 DPE (7 DP1C), que resultaron negativas. después de eso. Posteriormente, otro lechón (1/6, Lechón 8134 con viremia TD/96; Figura 2A), derramó TD/96 en su saliva entre 21 y 24 DPE a 101,2 y 102,7 TCID50/mL, un nivel más bajo que el de los lechones antes mencionados. . En el grupo 3, con lechones con MDA únicamente y sin vacunación LPC que habían cohabitado con el donante de CSFV, se detectó inicialmente TD/96 en el 66,7 % (2/3) de las muestras de saliva a los 21 DPE, y todas las muestras de saliva fueron positivas al 24 DPE. En el grupo 4, que comprende los lechones que convivieron con los del grupo 2, no se detectó TD/96 en las muestras de saliva durante el experimento, mientras que en el grupo 5, que comprende los lechones que convivieron con los del grupo 3, todas las muestras de saliva fueron positivas para TD/96 de 24 a 35 DPE. Las cargas de CSFV aumentaron con el tiempo y oscilaron entre 105,9 y 107,3 ​​TCID50/mL a los 35 DPE. Un total de cuatro sextas partes de los lechones del grupo 2 (con vacuna LPC de dosis única) tenían saliva positiva para TD/96-a los 14 DPE antes de la viremia. El virus de la peste porcina clásica se detectó antes en los lechones del grupo 2 que habían estado en contacto con el lechón del grupo 1 durante su excreción TD/96. Un lechón (Lechón 8134) del Grupo 2 mostró posteriormente una excreción transitoria entre el 21 y el 24 DPE, lo que probablemente sea representativo de la replicación del CSFV en las glándulas salivales después de la viremia. Según la comparación entre los Grupos 2 y 3, la vacunación con LPC disminuyó la eliminación del virus de la peste porcina clásica.

3.4. Eliminación del virus de la peste porcina clásica en las heces

La cepa CSFV TD/96 no se detectó en las heces de ninguno de los lechones antes del experimento (Figuras 2C y 3C). Las heces del lechón del Grupo 1 fueron positivas para TD/96 primero a los 14 DPE (7 DPIC), lo que continuó hasta el 17 DPE. Las cargas de CSFV aumentaron de 105,1 TCID50/g a los 14 DPE a 108,8 TCID50/mL a los 17 DPE. En el Grupo 2, que comprende los lechones con vacunación LPC que cohabitaron con el donante de CSFV del Grupo 1, solo el Lechón 8134 se excretó transitoriamente a los 24 DPE (17 DPIC), mientras que todos los demás lechones del Grupo 2 fueron negativos. En el Grupo 3, que comprende los lechones sin vacunación LPC que convivieron con el donante de CSFV, dos tercios de los lechones (todos excepto Piglet 8138) fueron positivos entre 21 (14 DP1C) y 35 DPE, tiempo durante el cual las cargas de CSFV aumentaron de 105,1 TCID50/g a los 21 DPE a 107,5 TCID50/mL a los 31 DPE. Sin embargo, las muestras fecales de Piglet 8138 con viremia transitoria de TD/96 no fueron positivas para TD/96. En el Grupo 4, formado por los lechones que convivieron con los del Grupo 2, todas las muestras fecales fueron negativas para TD/96 durante el período experimental. En el Grupo 5, que comprendía los lechones que cohabitaban con el Grupo 3, el número de muestras fecales positivas para TD/96-aumentó con el tiempo de 24 a 35 DPE, y las cargas oscilaron entre 105,7 y 107,2 TCID50/g a los 35 DPE. . En el Grupo 5, la primera detección se produjo a los 24 DPE (7 DP2C), que fue similar a la del Grupo 1 (14 DPE), y el perfil general fue paralelo al de la viremia (Figura 2A), lo que sugiere que el CSFV se replicó localmente después de la viremia. . Como se detalla en las Secciones 3.3 y 3.4, las heces y la saliva fueron los principales vehículos de transmisión por contacto del virus de la peste porcina clásica.

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

3.5. Cargas de CSFV en tejidos obtenidos mediante necropsia

Los tejidos del lechón donante de CSFV del grupo 1 y de los lechones de los grupos 3 y 5 con los que cohabitó fueron positivos para TD/96 (Tabla 2). Las cargas de TD/96 en los tejidos del lechón del Grupo 1 oscilaron entre 103,76 y 109,37 TCID50/g. En el grupo 5, compuesto por los lechones que estuvieron en contacto con los del grupo 3, se detectó TD/96 en todos los lechones y se distribuyó en todos los tejidos, con mayores cargas en los órganos hematolinfoides (amígdalas, ganglios linfáticos y bazo) y en dichos órganos. con un suministro de sangre más abundante (hígado, pulmones, corazón y riñones), como se presenta en la Figura 2A, C. Las cargas más altas de TD/96 se produjeron en los tejidos linfoides (más de 109,0 TCID50/g). Por el contrario, los tejidos no hematolinfoides de los lechones cohabitantes de los Grupos 2 y 4, excepto el Lechón 8134 del Grupo 2, que tenía viremia transitoria de TD/96, fueron positivos a niveles bajos de TD/96 sólo en la sangre, las amígdalas y los ganglios linfáticos inguinales. y ganglios linfáticos submaxilares, con niveles que oscilan entre 101,65 y 103,78 TCID50/g. En el Grupo 3, que comprende los lechones sin vacunación con LPC que habían estado en contacto con el donante de CSFV del Grupo 1, se detectó TD/96 en todos los tejidos de dos de los tres lechones (excepto el Lechón 8138). El lechón 8138 del grupo 3, que tenía viremia transitoria TD/96, tenía TD/96 en amígdalas, ganglios linfáticos submaxilares y ganglios linfáticos bronquiales, aunque las cargas virales fueron inferiores a la media, oscilando entre 103,08 y 104,69 TCID50/mL.

Tabla 2. Cargas de PPCV detectadas en diversos tejidos de los lechones mediante QRRT-PCR de PPCV

3.6. PPCV en el entorno experimental

La cerca, las heces en el piso, el comedero y el bebedero de cada sala experimental se analizaron para detectar TD/96 mediante QRRT-PCR (Tabla 3). TD/96 se detectó a los 14 y 17 DPE en las heces en el piso de la Sala 12, donde el donante de CSFV del Grupo 1 convivía con los lechones de los Grupos 2 y 3. La cerca, el comedero y el bebedero dieron resultados negativos. Las muestras de la Sala 2 en la que cohabitaban los Grupos 2 y 4 fueron todas negativas entre 21 y 35 DPE. TD/96 se detectó por primera vez en las heces en el piso de la Sala 4 (Grupos 3 y 5) a las 24 DPE. Posteriormente, se detectó TD/96 en la cerca, el comedero y el bebedero del Salón 4 entre el 28 y el 35 DPE. Estos resultados indican que las heces (que podrían estar potencialmente presentes en todo tipo de muestras ambientales) y la saliva (que probablemente estaría presente en las muestras de comederos y bebederos) fueron los principales vehículos de transmisión por contacto. La diseminación viral transitoria de los lechones del Grupo 2 (Figuras 2 y 3) no se introdujo en la Sala 2, donde convivieron con los lechones del Grupo 4.

Tabla 3. Cargas de CSFV de muestras ambientales de las salas experimentales.

3.7. PBMC secretoras de IFN- -específico del CSFV

Se examinaron células secretoras de IFN- -específicas de CSFV en las PBMC de los lechones de los grupos 2 a 5 entre 7 y 35 DPE (Figura 4). En los lechones del Grupo 2, el número de células secretoras de IFN- -, aunque con una frecuencia inferior al 0.1% de las PBMC, fue significativamente mayor que el de los Grupos 3, 4 y 5. entre 7 y 35 DPE. Los números de células secretoras de IFN- -en Piglet 8134 del Grupo 2, que tuvieron viremia TD/96 transitoria dentro de un período de tiempo similar (Figura 2A), se correlacionaron con números significativamente más bajos de 56 (21 DPE) y 62 (28 DPE; promedio del grupo Mayor o igual a 116); sin embargo, estas cifras alcanzaron el promedio del grupo en 35 DPE. El número de células secretoras de IFN- -específicas del CSFV en los grupos 3, 4 y 5 no fue significativamente diferente.

Figura 4. Se examinaron células secretoras de IFN- -específicas de CSFV en las PBMC de lechones de los grupos 2 a 5 entre 7 y 35 DPE. Los lechones del Grupo 2 con vacunación LPC en el 0 DPE y los del Grupo 3 sin vacunación LPC convivieron con el lechón donante de CSFV del Grupo 1 de 7 a 17 DPE. Los lechones de los Grupos 4 y 5 convivieron con los de los Grupos 2 y 3, respectivamente, de 17 a 35 DPE. Los valores con diferentes letras en superíndice, a y b, indican una diferencia estadísticamente significativa (p < 0.05) entre sí. No existen diferencias significativas entre valores que contienen la misma letra.

3.8. AN anti-PPCV

Los NA anti-CSFV en los sueros de los lechones se generaron en respuesta a la cepa LPC (Figura 5A) o a la cepa TD/96 (Figura 5B). No se detectaron NA anti-CSFV en el donante de CSFV del grupo 1 entre el 7 y el 17 DPE. Los sueros de los lechones de los grupos 2 a 5 en {{10}} DPE exhibieron títulos que oscilaban entre 5 y 7 log2 (entre 32- y 128-veces). Después de que los lechones del Grupo 2 fueron vacunados con la vacuna LPC y cohabitaron con el donante de CSFV, el título promedio no disminuyó entre 0 y 28 DPE. Debido al aumento de NA anti-LPC en Piglet 8134 de 31 a 35 DPE, el título promedio del Grupo 2 aumentó significativamente. En los lechones del Grupo 3 sin vacunación LPC que convivieron con el donante de CSFV, el título medio disminuyó gradualmente entre 0 y 28 DPE. A medida que el título de Piglet 8138 aumentó gradualmente entre 21 y 35 DPE, el título promedio del Grupo 3 aumentó, por el contrario, entre 31 y 35 DPE. Los títulos promedio de los Grupos 4 y 5 disminuyeron con el tiempo. En general, el perfil de NA anti-TD/96 de cada grupo fue paralelo al de los perfiles de NA anti-LPC, aunque el promedio de NA anti-TD/96 estuvo entre 1,3 y 3,7 log2 (aproximadamente 2–12- veces; Figura 5B), que fue inferior al promedio de NA anti-LPC.

Figura 5. Los NA anti-LPC (A) o TD/96 (B) en los sueros de los lechones de cada grupo durante el periodo experimental. Irónicamente, el lechón del Grupo 1 fue inoculado con TD/96 a los 7 DPE y sirvió como donante de CSFV (es decir, invasor primario), y posteriormente cohabitó con los lechones de los Grupos 2 y 3 de 7 a 17 DPE. Los lechones del grupo 2 fueron vacunados con LPC en el 0 DPE y los lechones del grupo 3 no fueron vacunados con LPC. Los lechones de los Grupos 4 y 5 convivieron con los de los Grupos 2 y 3, respectivamente, de 17 a 35 DPE.

La vida media estimada de los MDA derivados de los títulos de anticuerpos de los lechones del Grupo 4 transferidos a través del calostro de cerdas vacunadas con LPC fue de 10,7 días (Figura 5A). Esta estimación está respaldada por la fiebre negativa y los signos clínicos (Tabla 1), la viremia negativa, la saliva y las cargas virales fecales (Figuras 2 y 3), y los tejidos (Tabla 2; ver Sección 3.9) y muestras ambientales (Tabla 3). ) de los lechones del Grupo 4, lo que indicó que no habían sido infectados con el virus TD/96 durante el periodo experimental.

3.9. Inmunohistoquímica que detecta señales de antígeno del CSFV en muestras de tejido de necropsia

Las señales de CSFV TD/96 se detectaron en los tejidos linfoides del donante de CSFV del Grupo 1 (Figura 6I), de un lechón del Grupo 2 (Lechón 8134, que tenía cargas de CSFV en la sangre que estaban en el nivel más alto de 104,9 TCID50 /mL a los 24 DPE y que posteriormente disminuyó a 101,7 TCID50/mL a los 35 DPE), de tres lechones en el Grupo 3 y de tres lechones en el Grupo 5. Los lechones del Grupo 4 no fueron positivos para TD/96 (Figura 6J). Las fuertes señales de CSFV TD/96 se distribuyeron ampliamente en las amígdalas, el bazo y los ganglios linfáticos de los lechones de los Grupos 1, 3 (excepto Piglet 8138) y 5. Para Piglet 8134 (Grupo 2) con viremia transitoria de TD/96 , las señales positivas dispersas de TD/96-se localizaron principalmente en las regiones parenquimatosas de las amígdalas, la médula de los ganglios linfáticos inguinales y los ganglios linfáticos submaxilares (Figura 6A-D), lo que concuerda con los resultados de la carga viral. cuantificación de estos tejidos (Tabla 2). La morfología y distribución de las células TD/96-positivas eran fuertemente macrófagas. En Piglet 8138 (Grupo 3) con viremia TD/96 transitoria, el número y la distribución de las señales positivas de TD/96-(Figura 6E-H) fueron similares a las de Piglet 8134.

Figura 6. Los antígenos del VSFV en los tejidos linfoides fueron marcados por el anticuerpo monoclonal 1C7A1. Un ganglio linfático (A, B) y una amígdala (C, D) de Piglet 8134 (Grupo 2), que tenía viremia TD/96 transitoria, presentan la señal marrón TD/96-positiva. Un ganglio linfático (E, F) y una amígdala (G, H) de Piglet 8138 (Grupo 3), que tenían viremia TD/96 transitoria, presentan la señal marrón TD/96-positiva. Un ganglio linfático (I) de Piglet 8150 (Grupo 1) presenta una señal marrón difusa TD/96-positiva en la paracorteza. Un ganglio linfático (J) de Piglet 8146 (Grupo 4) fue negativo para TD/96

En Piglet 8134 (Grupo 2) y Piglet 8138 (Grupo 3), ambos con viremia transitoria de bajo nivel (Figuras 2A y 3A; Tabla 2), los antígenos del VSFV aún eran detectables en los macrófagos tisulares de las amígdalas (Figura 6A-H). , que demostró nuevamente que las amígdalas son un tejido ideal para el diagnóstico del CSFV.

4. Discusión

La vacunación es crucial para la prevención y el control de la peste porcina clásica en zonas endémicas de peste porcina clásica. Una práctica ampliamente aplicada es proporcionar MDA a los recién nacidos a través del calostro de cerdas vacunadas y luego administrar una dosis única de MLV (como LPC) cuando los lechones tienen entre 3 y 6 semanas de edad; este procedimiento se empleó para el Grupo 2 en el presente estudio (Figura 1). Muchos factores, incluida la calidad de la vacuna, los procedimientos del programa de vacunación (p. ej., calendarios, tipos y rutas) y los niveles de MDA y el estado de salud de los cerdos (incluida la variación individual), pueden influir en la eficacia de la vacunación contra el VSFV, reduciendo la protección contra la infección [14- dieciséis]. En el presente estudio, aunque los lechones de los Grupos 2 y 3 tenían niveles altos de MDA de 1:32 a 128- veces en 7 DPE (Figura 5A; es decir, 0 DP1C con el donante de CSFV del Grupo 1; Figura 1), los MDA retrasaron el progreso de la infección, como lo indica la aparición tardía de la viremia en 10 DP1C (Grupos 2 y 3; Figura 2A). Esto provocó que los lechones fueran asintomáticos (Tabla 1), aunque algunos de ellos aún eliminaban el virus en su saliva y heces (Figura 2B, C). Estos transmisores virales ocasionales en el Grupo 2 representaron variaciones individuales en los estados de salud del grupo o las respuestas inmunes analizadas en este estudio. Los MDA por sí solos sólo pueden ofrecer una protección parcial antes de que se produzca la replicación viral en la sangre y los tejidos. El nivel de NA anti-CSFV TD/96 no se convirtió positivamente después de la vacunación con LPC (Figura 5B), incluso después de que los lechones cohabitaran con el invasor primario del Grupo 1. Esto probablemente ocurrió porque el nivel de MDA efectivamente interfirió con la eficacia del MLV y debido a la naturaleza inmunosupresora del CSFV TD/96 invasor.

cistanche tubulosa-mejora el sistema inmunológico

Los títulos de NA anti-CSFV y CMI representados por el número de células secretoras de IFN- -específicas de CSFV están estrechamente relacionados con la protección de los cerdos contra la infección por CSFV [17,22-24]. El lechón 8134 (Grupo 2), con niveles bajos de NA anti-CSFV y un número bajo de células secretoras de IFN- -específicas de CSFV después de la inoculación de MLV (Figuras 4 y 5), exhibió viremia transitoria y excreción de CSFV después del contacto con el CSFV. donante (Figuras 2 y 3). Por el contrario, los otros lechones del grupo 2, con bajos NA anti-PPCV pero relativamente altas células secretoras de IFN- -específicas de PPCV después de la inoculación de MLV, no fueron infectados con PPCV, incluso después de convivir con el donante de CSFV durante 10 días. . Además, aunque Piglet 8138 (Grupo 3) tenía un título alto de NA anti-LPC (más de 128-veces) sin vacunación con MLV y con un mínimo de células secretoras de IFN- -específicas para CSFV, también exhibió CSFV transitorio. viremia después de convivir con el donante TD/96, pero estaba libre de CSFV al final del período experimental. Los otros lechones del grupo 3, con niveles bajos de anti-LPC NA (inferiores a 64-veces) y sin vacunación MLV, presentaron signos clínicos graves asociados al CSFV, lesiones y altas cargas tisulares de CSFV, que provocaron la muerte. Una comparación de los resultados de los Grupos 2 y 3, que tenían títulos y perfiles anti-CSFV similares (Figura 5), ​​indica que el CMI es el factor clave en la eliminación y recuperación viral. Los lechones del Grupo 2 tuvieron más CMI (Figura 4), lo que concuerda con las puntuaciones clínicas libres (Tabla 1) y todos los parámetros probados (Figura 2, Figura 3 y Figura 6).

En particular, en el Grupo 2 y en los otros grupos, los niveles de CMI no aumentaron notablemente (y solo con una frecuencia inferior al 0.1% de las PBMC) durante todo el período experimental (Figura 4), a pesar de que los lechones exposición constante a la eliminación viral del donante de CSFV del grupo 1 y de los lechones del grupo 3 de 7 a 17 DPE (Figuras 2 y 3). Las bajas frecuencias de las células secretoras de IFN- - probablemente reflejen lo siguiente: (1) la naturaleza inmunosupresora del CSFV, (2) la interferencia de MDA y (3) la limitación técnica del ensayo que realizamos. Por lo tanto, determinar una ventana adecuada en la que el nivel de MDA sea lo suficientemente bajo para evitar interferencias y, sin embargo, lo suficientemente alto para proporcionar protección inicial y mejorar la CMI anti-CSFV es esencial para mejorar la inmunidad de los rebaños.

Para los lechones del Grupo 2 tratados con el procedimiento de vacunación ampliamente aplicado, la eliminación ocasional de CSFV en saliva y heces ocurrió durante un período corto (Figura 2) con cargas bajas de CSFV (Figura 3); por lo tanto, los lechones del Grupo 4 (solo con MDA) bloquearon la transmisión del CSFV al Grupo 4, como lo indican los resultados negativos para CSFV de las muestras ambientales recolectadas de la Sala 2 (Tabla 3), la ausencia de fiebre y signos clínicos (Tabla 1). ), y la ausencia de saliva y excreción fecal y viremia (Figuras 2 y 3) durante la convivencia. Sin embargo, los portadores asintomáticos del virus de la peste porcina clásica en el grupo 2 podrían haber sido un problema indetectable en el campo.

La respuesta inmune se puede inducir de forma rápida y constante en lechones SPF vacunados con MLV. Las respuestas inmunitarias celular y humoral de los lechones vacunados con MLV se revelan como mínimo 5 y 12 días después de la vacunación, respectivamente, [14-16,22]. Cuando el MLV se utiliza en hatos comerciales, los MDA reducen la eficacia del MLV. En el presente estudio, el CMI de los lechones del Grupo 2 con niveles sustanciales de MDA aumentó rápidamente en 0 DP1C (7 DPE; Figura 4; es decir, mucho más rápido que en los cerdos SPF sin MDA), aunque ni el anticuerpo ni el CMI Los perfiles cambiaron dramáticamente (Figuras 4 y 5). Un aumento tan rápido a los 7 DPE (Figura 4) después de la vacunación con LPC sugiere que el calostro puede proporcionar otros componentes inmunológicos, además de los MDA, que inducen una respuesta similar a la anamnésica.

Los AN anti-PPCV se utilizan comúnmente para evaluar la eficacia de la vacuna y realizar pruebas de infección por PPCV en rebaños. Según la cepa de CSFV, el título de los AN anti-CSFV contra cepas homólogas (p. ej., LPC de genotipo 1.1) es mayor que el de cepas heterogéneas (p. ej., TD/96 de genotipo 2.1) y, en este estudio, fue log2 1.3 a 3,7 (Figura 5A) mayor que el de la cepa TD/96 (Figura 5B) [14]. También se observó una diferencia similar en los títulos de NA en diferentes cepas del virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRSV) y el SARS-CoV-2 [25,26]. Como los MDA son un factor de interferencia vital para la eficacia de MLV, el programa de vacunación óptimo para la inoculación de MLV en lechones es cuando los MDA de los lechones son inferiores a 1:32- veces el título de NA anti-LPC. Por lo tanto, el tiempo óptimo de vacunación con MLV en el presente estudio fue a los 28 DPE, lo que es consistente con nuestra estimación de que la vida media de los MDA fue de 10,7 días (Grupo 2; Figura 5A) y similar a los resultados del análisis de los anti- Títulos de LPC NA de los Grupos 4 y 5. Paradójicamente, el nivel de 32-veces del título de NA anti-CSFV (aproximadamente equivalente a 1:128-veces de los NA anti-LPC) se considera el índice protector para Infección por CSFV [17]. La mayoría de los lechones de los grupos 4 y 5 tenían menos de 1:32-veces de títulos de anti-TD/96 NA desde el 7 DPE en adelante. Por lo tanto, el período de ventana en el que los niveles de MDA son suficientemente bajos para no interferir con la vacunación con MLV pero lo suficientemente altos como para ser protectores es estrecho, mientras que el período de ventana para el riesgo de infección por CSFV es amplio. El período adecuado para la vacunación con MLV sólo puede ampliarse si el MLV se produce a partir de cepas homólogas, que normalmente no están disponibles en la mayoría de las zonas endémicas del virus de la peste porcina clásica.

La inmunidad colectiva se correlaciona negativamente con la propagación de patógenos en la prevención y el control de enfermedades. Una mayor inmunidad colectiva puede reducir tanto la susceptibilidad a la infección como la magnitud de la eliminación del patógeno en el rebaño [27,28]. La vacunación se utiliza comúnmente como una herramienta directa y rápida para aumentar la inmunidad colectiva. Se ha demostrado que mejorar la cobertura de la inmunidad colectiva mediante la inmunización con vacunas para reducir la propagación de patógenos es eficaz para el control del PRRSV, el circovirus porcino tipo 2, el CSFV, el virus de la pseudorrabia y el SARS-CoV-2 [29–36]. En estudios sobre el virus de la peste porcina clásica, la administración de vacunas tanto MLV como de subunidad E2 también redujo la transmisión del virus de la peste porcina clásica en rebaños [14-16,22,32]. En el presente estudio, aunque algunos lechones vacunados con MLV exhibieron viremia y excreción transitorias de CSFV (Grupos 2 y 3; Figuras 2 y 3), la inoculación de MLV no solo ofreció una protección completa a los cerdos vacunados sino que también aseguró que la cepa TD/96 no se transmitió del invasor primario (Grupo 1) al grupo invadido secundariamente (Grupo 4). Por el contrario, TD/96 se propagó del donante de PPC del grupo 1 al grupo 3 (sin vacunación MLV) y al grupo 5, lo que demuestra que la vacunación MLV contra el PPC puede bloquear la transmisión del PPC, aumentando así la probabilidad de erradicación del PPC al reducir el valor de el número de reproducción básico (R0) del patógeno [28]. Se necesita una cobertura vacunal más amplia para erradicar las enfermedades con patógenos con alto R0. El R0 del CSFV está asociado con la virulencia de la cepa y la dosis de inoculación del CSFV. Los niveles del patógeno R0 de dosis de inoculación moderada y alta de una cepa moderadamente virulenta y de la dosis de inoculación baja de una cepa altamente virulenta son sustancialmente más altos que los de una dosis de inoculación alta de una cepa de baja virulencia. cepa [13]. Estos resultados indican que se requiere una mayor cobertura de inmunidad colectiva en áreas endémicas de PPC con cepas de PPCV moderadas o altamente virulentas.

Las células del linaje monocitos-macrófagos son células con tropismo del CSFV que desempeñan un papel en la transmisión del CSFV [37-39]. En el presente estudio, los lechones que se recuperaron estaban sanos y asintomáticos; sin embargo, el CSFV puede infectar persistentemente y esconderse en los tejidos linfoides (Figura 6), evitando así la eliminación inmune; esto también respalda el uso de tejidos linfoides como muestras ideales para el diagnóstico. También se ha observado infección viral persistente por CSFV, virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 y virus respiratorio sincitial [40-42]. El CSFV tiene la capacidad de alterar la expresión de citocinas, receptores de citocinas, quimiocinas, interferones y receptores tipo peaje en macrófagos, lo que refleja su naturaleza inmunosupresora y la casi inactividad de los perfiles de anticuerpos (Figura 5) y CMI (Figura 4) del cerdos experimentales, a pesar de su exposición continua al virus de la peste porcina clásica que se elimina en la saliva y las heces de los invasores primarios (Grupo 1) y secundarios (Grupo 3). La inmunorregulación de los cerdos después de la infección por CSFV implicó aumentos en factores proinflamatorios (IL-1, IL-6, IL-8 y MCF) y antivirales (IFN- y ) [43]. Sin embargo, los mecanismos evolucionados y la infección persistente del CSFV siguen sin estar claros.

Beneficios de cistanche para hombres: fortalece el sistema inmunológico.

5. Conclusiones

Las MDA seguidas de la vacunación MLV pueden inducir inmunidad suficiente, en particular CMI, lo que permite la eliminación y recuperación viral. Aunque algunos lechones vacunados con MLV tuvieron viremia transitoria de bajo nivel y eliminación viral en su saliva y heces, la transmisión del CSFV a terceros (Grupo 4) pudo bloquearse mediante la vacunación MLV, reduciendo así el R0 del CSFV. y aumentar la posibilidad de erradicar la peste porcina clásica.

Referencias

1. ¡GUAU! Capítulo 15.2: Infección por el virus de la peste porcina clásica. En Código Sanitario para los Animales Terrestres; WOAH: París, Francia, 2022.

2. Ganges, L.; Crooke, recursos humanos; Bohórquez, JA; Postel, A.; Sakoda, Y.; Becher, P.; Ruggli, N. Virus de la peste porcina clásica: pasado, presente y futuro. Resolución de virus. 2020, 289, 198151. [CrossRef] [PubMed]

3. WOAH (Sistema Mundial de Información Sanitaria Animal). Peste porcina clásica: situación oficial de la enfermedad. Disponible en línea: www.woah. org/en/disease/classical-swine-fever/#ui-id-2 (consultado el 1 de septiembre de 2022).

4. Sawai, K.; Nishi, T.; Fukai, K.; Kato, T.; Hayama, Y.; Yamamoto, T. Análisis filogenético y filodinámico de un brote del virus de la peste porcina clásica en Japón (2018-2020). Transfronterizo. Emergente. Dis. 2022, 69, 1529–1538. [Referencia cruzada] [PubMed]

5. De Oliveira, LG; Gatto, IRH; Mechler-Dreibi, ML; Almeida, HMS; Sonálio, K.; Storino, GY Logros y desafíos de la erradicación de la peste porcina clásica en Brasil. Virus 2022, 12, 1327. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhu, X.; Liu, M.; Wu, X.; Mamá, W.; Zhao, X. Análisis filogenético de aislados del virus de la peste porcina clásica de China. Arco. Virol. 2021, 166, 2255–2261. [Referencia cruzada] [PubMed]

7. Lindenbach, BD; Thiel, HJ; Rice, CM Flaviviridae: Los virus y su replicación. En Fields Virology, 5ª ed.; Knipe, DM, Howley, PM, Griffin, DE, Eds.; Lippincott Williams & Wilkins: Filadelfia, PA, EE. UU., 2007; págs. 1101-1152.

8. Patón, DJ; McGoldrick, A.; Greiser-Wilke, I.; Parchariyanon, S.; Canción, JY; Liou, PP; Stadejek, T.; Lowings, JP; Björklund, H.; Belak, S. Tipificación genética del virus de la peste porcina clásica. Veterinario. Microbiol. 2000, 73, 137-157. [Referencia cruzada] [PubMed]

9. Depner, KR; Hinrichs, U.; Bickhardt, K.; Greiser-Wilke, I.; Pohlenz, J.; Moennig, V.; Liess, B. Influencia de factores relacionados con la raza en el curso de la infección por el virus de la peste porcina clásica. Veterinario. Rec. 1997, 140, 506–507. [Referencia cruzada]

10. Floegel-Niesmann, G.; Bunzenthal, C.; Fischer, S.; Moennig, V. Virulencia de aislados recientes y anteriores del virus de la peste porcina clásica evaluados por sus signos clínicos y patológicos. J. Veterinario. Medicina. Ser. B 2003, 50, 214-220. [Referencia cruzada]

11. Moennig, V.; Floegel-Niesmann, G.; Greiser-Wilke, I. Signos clínicos y epidemiología de la peste porcina clásica: una revisión de nuevos conocimientos. Veterinario. J. 2003, 165, 11-20. [Referencia cruzada]

12. Durand, B.; Dávila, S.; Cariolet, R.; Mesplède, A.; Le Potier, MF Comparación de estimaciones clínicas y de viremia de la transmisión dentro y entre corrales del virus de la peste porcina clásica a partir de tres experimentos de transmisión. Veterinario. Microbiol. 2009, 135, 196–204. [Referencia cruzada]

13. Weesendorp, E.; Respaldo, J.; Stegeman, A.; Loeffen, W. Efecto de la cepa y la dosis de inoculación del virus de la peste porcina clásica en la transmisión dentro del corral. Veterinario. Res. 2009, 40, 59. [Referencia cruzada]

14. Huang, YL; Deng, MC; Wang, FI; Huang, CC; Chang, CY Los desafíos del control de la peste porcina clásica: vacunas de vida modificada y de subunidad E2. Resolución de virus. 2014, 179, 1–11. [Referencia cruzada] [PubMed]

15. Suradhat, S.; Damrongwatanapokin, S.; Thanawongnuwech, R. Factores críticos para una vacunación exitosa contra la peste porcina clásica en áreas endémicas. Veterinario. Microbiol. 2007, 119, 1–9. [Referencia cruzada] [PubMed]

16. Van Oirschot, JT Vacunología de la peste porcina clásica: del laboratorio al campo. Veterinario. Microbiol. 2003, 96, 367–384. [Referencia cruzada]

17. Terpstra, C.; Wensvoort, G. El valor protector de los títulos de anticuerpos neutralizantes inducidos por vacunas en la peste porcina. Veterinario. Microbiol. 1988, 16, 123–128. [Referencia cruzada]

18. Vandeputte, J.; También HL; Ng, FK; Chen, C.; Chai, KK; Liao, GA Adsorción de anticuerpos calostrales contra la peste porcina clásica, persistencia de anticuerpos maternos y efecto sobre la respuesta a la vacunación en lechones. Soy. J. Veterinario. Res. 2001, 62, 1805–1811. [Referencia cruzada] [PubMed]

19. Ma, WJ; Chen, QL; Chang, CC Investigación del rendimiento de los anticuerpos y la presencia de ARN viral antes y después de la vacunación con la cepa de vacuna contra la peste porcina clásica en granjas de cerdos de Taiwán. Veterinario de Taiwán. J. 2010, 36, 45–54.

20. Mittelholzer1, C.; Moser, C.; Tratschin, JD; Hofmann, MA El análisis de la cinética de replicación del virus de la peste porcina clásica permite diferenciar cepas altamente virulentas de avirulentas. Veterinario. Microbiol. 2000, 74, 293–308. [Referencia cruzada]

21. Huang, YL; Pang, VF; Pan, CH; Chen, TH; Jong, MH; Huang, TS; Jeng, CR Desarrollo de una PCR multiplex en tiempo real con transcripción inversa para la detección y genotipado del virus de la peste porcina clásica. J. Virol. Métodos 2009, 160, 111-118. [Referencia cruzada]

22. Huang, YL; Meyer, D.; Postel, A.; Tsai, KJ; Liu, HM; Yang, CH; Huang, YC; Berkley, N.; Deng, MC; Wang, FI; et al. Identificación de un epítopo conformacional común en la glicoproteína E2 del virus de la peste porcina clásica y del virus de la enfermedad fronteriza. Virus 2021, 13, 1655. [CrossRef]

23. Graham, SP; Everett, ÉL; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, OA; Salguero, FJ; Clifford, DJ; Steinbach, F.; Dibujó, TW; Crooke, H. El desafío de los cerdos con los virus de la peste porcina clásica después de la vacunación con la cepa C revela una protección notablemente rápida y conocimientos sobre la inmunidad temprana. MÁS UNO 2012, 7, e29310. [Referencia cruzada]

24. Graham, SP; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, O.; Rocca, SAL; Lámpara, B.; Rumenapf, T.; Everett, H.; Crooke, H. Caracterización de las respuestas de las células T secretoras de IFN, inducidas por vacunas y con reacción cruzada amplia, que se correlacionan con una protección rápida contra el virus de la peste porcina clásica. Vacuna 2012, 30, 2742–2748. [Referencia cruzada] [PubMed]

25. Suradhat, S.; Intrakamhaeng, M.; Damrongwatanapokin, S. La correlación entre la producción de interferón gamma específico del virus y la protección contra la infección por el virus de la peste porcina clásica. Veterinario. Inmunol. Inmunopatol. 2001, 83, 177–189. [Referencia cruzada] [PubMed]

26. Planas, D.; Veyer, D.; Baidaliuk, A.; Staropoli, I.; Guivel-Benhassine, F.; Rajá, MM; Planchais, C.; Porrot, F.; Robillard, N.; Puech, J.; et al. Sensibilidad reducida de la variante delta del SARS-CoV-2 a la neutralización de anticuerpos. Naturaleza 2021, 596, 276–280. [Referencia cruzada]

27. Zhang, C.; Hu, J. Vacunas contra el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino: estado actual y estrategias para una vacuna universal. Transfronterizo. Emergente. Dis. 2014, 61, 109-120.

28. André, FE; Booy, R.; Bock, HL; Clemente, J.; Datta, SK; Juan, TJ; Lee, BW; Lolekha, S.; Peltola, H.; Ruff, TA; et al. La vacunación reduce en gran medida las enfermedades, la discapacidad, la muerte y la inequidad en todo el mundo. Toro. Órgano Mundial de la Salud. 2008, 86, 140–146. [Referencia cruzada] [PubMed]

29. Rosa, N.; Andraud, M. El uso de vacunas para controlar la propagación de patógenos en poblaciones de cerdos. Gerencia de Sanidad Porcina. 2017, 3, 8. [CrossRef] [PubMed]

30. Andraud, M.; Grasland, B.; Durand, B.; Cariolet, R.; Jestin, A.; Madec, F.; Rose, N. Cuantificación de la transmisión del circovirus porcino tipo 2 (PCV-2) dentro y entre corrales en cerdos. Veterinario. Res. 2008, 39, 43. [Referencia cruzada]

31. Rosa, N.; Andraud, M.; Bigault, L.; Jestin, A.; Grasland, B. Una vacuna comercial basada en PCV2a reduce significativamente la transmisión de PCV2b en condiciones experimentales. Vacuna 2016, 34, 3738–3745. [Referencia cruzada]

32. Rosa, N.; Renson, P.; Andraud, M.; Paboeuf, F.; Le Potier, MF; Bourry, O. La vacuna viva modificada contra el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRSv) reduce la transmisión del virus en condiciones experimentales. Vacuna 2015, 33, 2493–2499. [Referencia cruzada]

33. Bouma, A.; De Smit, AJ; De Jong, MCM; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Determinación del inicio de la inmunidad colectiva inducida por la vacuna de la subunidad E2 contra el virus de la peste porcina clásica. Vacuna 2000, 18, 1374–1381. [Referencia cruzada]

34. De Smit, AJ; Bouma, A.; Van Gennip, HGP; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Los virus quiméricos (marcadores) de cepa C inducen protección clínica contra el virulento virus de la peste porcina clásica (CSFV) y reducen la transmisión del CSFV entre cerdos vacunados. Vacuna 2001, 19, 1467–1476. [Referencia cruzada] [PubMed]

35. Van Nes, A.; Stegeman, JA; De Jong, MCM; Loeffen, WLA; Kimman, TG; Verheijden, JHM No hay brotes importantes del virus de la pseudorrabia en granjas de cerdas bien inmunizadas. Vacuna 1996, 14, 1042–1044. [Referencia cruzada] [PubMed]

36. Shrestha, NK; Burke, ordenador personal; Nowacki, AS; Terpeluk, P.; Gordon, SM Necesidad de la vacunación contra la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) en personas que ya han tenido COVID-19. Clínico. Infectar. Dis. 2022, 75, e662–e671. [Referencia cruzada] [PubMed]

37. Gómez-Villamandos, JC; Ruiz-Villamor, E.; Bautista, MJ; Sánchez, CP; Sánchez-Cordón, PJ; Salguero, FJ; Jover, A. Cambios morfológicos e inmunohistoquímicos en macrófagos esplénicos de cerdos infectados con peste porcina clásica. J.Comp. Patol. 2001, 125, 98-109. [Referencia cruzada]

38. Sánchez-Cordón, PJ; Romanini, S.; Salguero, FJ; Ruiz-Villamor, E.; Carrasco, L.; Gómez-Villamandos, JC Estudio histopatológico, inmunohistoquímico y ultraestructural del intestino en cerdos inoculados con el virus de la peste porcina clásica. Veterinario. Patol. 2003, 40, 254–262. [Referencia cruzada]

39. Sah, V.; Kumar, A.; Dhar, P.; Upmanyu, V.; Tiwari, Alaska; Wani, SA; Sahu, AR; Kumar, A.; Badasara, SK; Pandey, A.; et al. Firma de la expresión genética de todo el genoma en macrófagos infectados por el virus de la peste porcina clásica y PBMC de cerdos autóctonos frente a mestizos. Gen 2020, 731, 144356. [CrossRef]

40. Coronado, L.; Bohórquez, JA; Muñoz-González, S.; Pérez, LJ; Rosell, R.; Fonseca, O.; Delgado, L.; Perera, CL; Frías, MT; Ganges, L. Investigación de infecciones crónicas y persistentes de peste porcina clásica en condiciones de campo y su impacto en la eficacia de la vacuna. Veterinario BMC. Res. 2019, 15, 247. [Referencia cruzada]

41. Rivera-Toledo, E.; Gómez, B. La persistencia del virus respiratorio sincitial en macrófagos altera el perfil de expresión génica celular. Virus 2012, 4, 3270–3280. [Referencia cruzada]

42. Kruize, Z.; Kootstra, NA El papel de los macrófagos en la persistencia y patogénesis del VIH-1. Frente. Microbiol. 2019, 10, 2828. [Referencia cruzada]

43. Borca, MV; Gudmundsdóttir, I.; Fernández-Sainz, IJ; Holinka, LG; Risatti, GR Patrones de expresión de genes celulares en macrófagos porcinos infectados con la cepa Brescia del virus de la peste porcina clásica altamente virulenta. Resolución de virus. 2008, 138, 89–96. [Referencia cruzada]