Efecto de reducción de ácido úrico y mecanismo de acteósido y equinacósido extraído de Cistanche tubulosa

Abstracto:Objetivo explorar los efectos y los mecanismos de disminución del ácido úrico de aceósido (as) y equinacósido (ECH) extraído deCistanche tubulosa.

MétodosEl modelo de rata de hiperuricemia (HUA) se estableció utilizando oxonato de potasio (1.5 g · kg -1 · d -1) combinado con adenine (100 mg · kg -1 · d -1). Las ratas modelo HUA se dividieron aleatoriamente en un grupo de control de modelos, un grupo de alopurinol (30 mg · kg -1 · d -1), como bajos y altos (50, 100 mg · kg -1 · d -1) grupos de dosis, y islas bajas (50, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100. mg · kg -1 · d -1) Grupos de dosis. Se estableció previamente un grupo de control normal. Después de cuatro semanas de administración, el analizador de bioquímica de sangre se usó para detectar los niveles de urea, crea, adenosina desaminasa (ADA) y ácido úrico (UUA) en la orina. El ensayo de inmunosorbente vinculado a la enzima se usó para detectar los niveles de xantina oxidasa (XOD) en suero. Se recogió el tejido renal y se pesó y calculó el coeficiente renal. Se usó tinción de hematoxilina eosina (HE) para observar cambios patológicos renales. La inmunohistoquímica (IHC) y la PCR en tiempo real se usaron para detectar los niveles de expresión de proteínas y ARNm del transportador de urato 1 (URAT1), el transportador de glucosa 9 (GLUT9), el transportador de aniones orgánicos 1 (OAT1) y el transportador de aniones orgánico 3 (OAT3) en el tejido renal. Los resultados AS y ECH podrían mejorar la función renal en las ratas modelo HUA, reducir los niveles de ácido úrico en sangre, promover la excreción de ácido úrico, regular negativamente los niveles séricos de ADA y XOD, y regular positivo y regular la expresión de proteínas y ARNm de URAT1 y GLUT9 en el tejido renal, mientras que la expresión de proteína y ARNm de ARNm de OAT1 y OAT3 en el tejido renal.

Conclusiones Los glucósidos feniletanoides como y ECH de Cistanche tubulosa pueden ejercer efectos de disminución del ácido úrico al mejorar la función renal en ratas modelo HUA, reducir los niveles de ADA y XOD, y regular la expresión de URAT1, GLUT9, OAT1 y OAT3.

Palabras clave: Cistanche tubulosa; actúo; equinacósido; hiperuricemia; reduciendo el ácido úrico; mecanismo

 

 

 

Extracto de tubulosa de Cistanche con 16% de aceósido

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La hiperuricemia (HUA) es una enfermedad metabólica causada por el metabolismo purino desordenado en el cuerpo humano, lo que lleva a niveles elevados de ácido úrico en sangre [1]. Se diagnostica típicamente cuando los niveles de ácido úrico de sangre exceden 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·l⁻¹) en hombres y 6. 0 mg · dl⁻¹ (357. 0 μmol·l⁻¹) en mujeres [2]. El desarrollo de la hiperuricemia se relaciona principalmente con factores tales como dietas altas de púrina, consumo de alcohol crónico, uso de medicamentos e hipotiroidismo. No solo aumenta el riesgo de enfermedades cardiovasculares, diabetes e hipertensión [3-4], sino que también afecta significativamente la salud de los pacientes.

Actualmente, los tratamientos clínicos para la hiperuricemia incluyen principalmente fármacos que inhiben la producción de ácido úrico y promueven la excreción de ácido úrico. Sin embargo, estos tratamientos tienen ciertas limitaciones para pacientes con una función de hígado o renal deteriorado [5-6]. Por lo tanto, explorar medicamentos efectivos con bajos efectos secundarios es de gran importancia para la prevención y el tratamiento de la hiperuricemia.

Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, comúnmente utilizado en la medicina tradicional china como hierba que tonifica el riñón, se emplea para tratar afecciones como la impotencia, la infertilidad, la deficiencia de la esencia y la sangre, la debilidad en la parte baja de la espalda y las rodillas, la debilidad muscular y el estreñimiento debido a la sequedad intestinal [7]. Los estudios han demostrado queCistanche tubulosaPosee los efectos neuroprotector [8], antiinflamatorio [9], reguladores del metabolismo óseo [10] y que aumentan la eficacia en la quimioterapia para pacientes con cáncer [11]. Entre sus diversos componentes activos, los glucósidos feniletanoides son los más abundantes.

Acteósido (as) y equinacósido (ECH), dos glucósidos feniletanoides con alto contenido enCistanche tubulosa, exhiben una fuerte actividad biológica y posee un potencial significativo para el desarrollo y la aplicación. En consecuencia, nuestro grupo de investigación seleccionado AS y ECH para su posterior estudio. A través de las predicciones de farmacología de la red y los preexperimentos en ratones, descubrimos que los extractos de glucósidos feniletanoides deCistanche tubulosapuede tener un cierto efecto reductor de ácido úrico. Sin embargo, las vías y los mecanismos de estos efectos siguen sin estar claros.

Por lo tanto, utilizando los mecanismos de producción de ácido úrico y sus primas vías de excreción como enfoque de investigación, investigamos los efectos reducidos por el ácido úrico de los extractos de glucósidos feniletanoides como y ECH. Este estudio tiene como objetivo dilucidar las vías y mecanismos a través de los cuales AS y ECH ejercen sus efectos reductores de ácidos úricos.

1 materiales

1.1 animales experimentales

Se compraron setenta ratas machos de SPF-grado Sprague-Dawley (SD), que pesaban 150-180 g, del Centro de Animales Experimental de la Universidad de Medicina Xinjiang. Número de licencia de producción de animales: scxk (xin) 2023-0001. Este experimento fue aprobado por el Comité de Ética Animal del Instituto de Investigación de Medicina Oygur Autónoma de Xinjiang, con el número de aprobación de ética animal: IAcuc- (Zhun) -2024-009.

1.2 Drogas y reactivos

Extractos de glucósidos feniletanoides (AS y ECH)deCistanche tubulosa (purity >El 98%, verificado por la cromatografía líquida de alto rendimiento) se extrajeron, purificó y preparó por el laboratorio clave de la ciencia de la formulación de uygur, el Instituto de Investigación de Medicina de Uygur de Xinjiang, la región autónoma. Números de lotes: 20220617 (AS) y 20220526 (ECH).

Tabletas de alopurinol, Número de lotes: 62208726, fabricado por Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.

Oxonato de potasioyadenina, Números de lotes: I2130050 y C2202255, comprados en Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

Kits de ensayo Crea (creatinina), UA (ácido úrico), urea y ADA (adenosina desaminasa), Números de lotes: 141123010, 141223004, 141323008 y 043624005, comprado a Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.

Kit de ensayo de actividad XOD (xantina oxidasa), Número de lotes: Y10001219, comprado en Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.

Anticuerpos (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), Números de lotes: 3i5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2i44618, comprado a Affinity Biosciences.

IgG anti-conejo de cabra marcada con HRP, Número de lotes: 245440113, comprado a ZSGB-BIO.

Solución de tinción de hematoxilina, Número de lotes: 24135741H, comprado a Beijing Lanjieke Technology Co., Ltd.

Kit de reactivo cromogénico DAB, Número de lotes: 240010512, comprado a ZSGB-BIO.

DEPC (pirocarbonato de dietilo), Número de catálogo: D 60029-500 ml, comprado a Amresco (EE. UU.).

Marcador de ADN Hiclear DL2000 M5, Número de catálogo: MF025, comprado en Beijing Genomics Biotechnology Co., Ltd.

Reactivo TRIZOL ™, Número de catálogo: 15596026, comprado a Thermo Fisher Scientific (EE. UU.).

5x todo en uno RT MasterMixyEvagreen Express 2 × QPCR MasterMix-Low Rox, Números de catálogo: G492 y G891, ambos comprados de Applied Biological Materials Inc. (ABM).

2 métodos

2.1 Establecimiento y agrupación del modelo

Setenta ratas Male Sprague-Dawley (SD) se aclimataron y se dividieron en dos grupos: un grupo de control normal (1 0 ratas) y un grupo de control de modelo (60 ratas). El grupo de control normal se administró al 0,5% de CMC-NA a través de Gavage. El grupo de control del modelo se administró oxonato de potasio (1,5 g · kg⁻¹) combinado con adenina (100 mg · kg⁻¹) a una dosis de 10 ml · kg⁻¹, una vez al día durante 14 días consecutivos. El modelo se consideró con éxito cuando los niveles de urea, Crea y SuA aumentaron significativamente, según lo medido por un analizador bioquímico.

Las ratas modelo de hiperuricemia se dividieron aún más en los siguientes grupos basados ​​en niveles de sua, urea y CREA: grupo de control de modelos, grupo de alopurinol (3 0 mg · kg⁻¹), dosis baja como grupo (50 mg · kg⁻¹), dosis altas como grupo (100 mg · kg⁻¹), grupo de dosis baja (50 mg · · · · kg ·, y altas dos) como grupo (100 mg · kg⁻¹), dosis de dosis baja (50 mg · kg · · · ·, y altas dos) como grupo (100 mg · kg⁻¹), dosis de dosis baja (50 mg · · · · · ·, y altas dos) como grupo (100 mg (100 mg · kg⁻lor. Grupo ECH (100 mg · kg⁻¹), con 10 ratas en cada grupo. Para mantener una hiperuricemia estable, todos los grupos, excepto el grupo de control normal, se administró oxonato de potasio (500 mg · kg⁻¹) combinado con adenina (100 mg · kg⁻¹) a través de la sonda en la mañana, seguido de la administración de los fármacos respectivos en cada grupo de tratamiento en la tarde. El grupo de control normal recibió una solución CMC-NA al 0,5% en la mañana y agua potable en la tarde a una dosis de 10 ml · kg⁻¹, una vez al día durante 14 días consecutivos. Posteriormente, se detuvo la administración de agentes de modelado, y los medicamentos respectivos se administraron continuamente diariamente durante 14 días adicionales.

 

2.2 Colección de muestras

Después de la dosis final, las ratas se ayunaron durante la noche (el agua no estaba restringida). La orina de cada grupo se recogió para pruebas de ácido úrico. El peso corporal se midió después del ayuno, y las muestras de sangre se recogieron bajo anestesia. El suero se separó por centrifugación y se almacenó para uso futuro. Los tejidos renales fueron recolectados y pesados. Un riñón se fijó en una solución de paraformaldehído al 4%, mientras que el otro se congeló en nitrógeno líquido para un análisis posterior.

 

2.3 Medición de ácido úrico en orina de rata

Las muestras de orina de cada grupo se centrifugaron (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, radio de centrífuga 14 cm), y se recolectó el sobrenadante. Las muestras de orina se diluyeron 1: 9 con solución salina y se analizaron para determinar el contenido de ácido úrico utilizando un analizador bioquímico.

2.4 Medición de ADA, urea, crea y sua en suero de rata

Las muestras de sangre de cada grupo se centrifugaron (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, radio de centrífuga 14 cm), y se recogió suero. Los niveles de ADA, urea, Crea y SuA en el suero se midieron usando un analizador bioquímico.

 

2.5 Medición de XOD en suero de rata

Los cambios en los niveles de XOD en suero de rata se midieron utilizando un ensayo enzimático de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se registró la absorbancia inicial (A₁) y la absorbancia final (a₂) a 290 nm, y se calculó ΔA (ΔA=a₂ - a₁). ΔA fue sustituido en la fórmula:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × Sistema de reacción Volumen total ÷ (coeficiente de extinción molar de ácido úrico × longitud de ruta óptica) × 10⁹] ÷ Volumen de muestra ÷ tiempo=4262 × Δa,
para calcular la cantidad de ácido úrico catalizado por minuto por mililitro de suero.

 

2.6 Medición del coeficiente renal

Los tejidos renales se recogieron, se lavaron con solución salina y se eliminaron el exceso de agua. El peso del órgano se midió con precisión y el coeficiente renal se calculó de la siguiente manera:
Coeficiente renal=peso renal (mg) / peso corporal (g).

 

2.7 Observación histopatológica del tejido renal mediante tinción con él

Los tejidos renales fijados en solución de paraformaldehído al 4% se deshidrataron con concentraciones de etanol graduadas, se eliminaron con xileno, incrustado en parafina y se seccionaron en cortes 4-} μm. Las secciones se desparafinizaron con xileno, hidratados con etanol graduado, teñido con hematoxilina y eosina (HE) y se sellaron con goma neutral. Los cambios morfológicos en el tejido renal se observaron bajo un microscopio óptico, y las imágenes se capturaron con un aumento de 400 ×.

 

2.8 Detección de la expresión de proteínas URAT1, GLUT9, OAT1 y OAT3 en tejido renal por IHC

Los tejidos renales fijados en una solución de paraformaldehído al 4% se deshidrataron con concentraciones de etanol graduadas, se eliminaron con xileno, incrustado en parafina y se seccionaron. Se realizaron recuperación de antígeno y bloqueo de suero de cabra. Los anticuerpos primarios (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) se agregaron a una dilución 1: 200 y se incubaron durante la noche a 4 grados. Al día siguiente, las secciones se lavaron con PBS, se secaron al aire y se incubaron con IgG anti-conejo de cabra marcada con biotina a 37 grados durante 30 minutos. Las secciones se lavaron con PBS y se incubaron con reactivo cromogénico DAB durante 10 minutos, seguido de enjuague de PBS, tinción de hematoxilina durante 3 minutos, diferenciación con solución de etanol de ácido clorhídrico, azul de carbonato de litio, deshidratación con etanol gradiente, limpieza con xileno y sellado con goma neutral.

Para cada rata, se seleccionaron dos campos aleatorios 4 0 0 × de secciones de riñón. Se analizó la tinción positiva (amarillo marrón), y la densidad óptica integrada (IOD) de cada campo se midió utilizando Image-Pro Plus 6.0 para el análisis estadístico.