Efecto renoprotector de la isoliquiritigenina en la lesión renal aguda inducida por cisplatino a través de la inhibición de FPR2 en macrófagos

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Tan Rui-Zhi et al.

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Resumen

Lesión renal aguda (LRA) es una complicación grave en pacientes críticamente enfermos. La evidencia acumulada indicó que los macrófagos juegan un papel proinflamatorio importante enLesión renal agudae isoliquiritigenina (ISL) pueden inhibir la inflamación macrofágica, pero su papel enLesión renal aguday el mecanismo subyacente es desconocido. El presente estudio tiene como objetivo investigar el efecto renoprotector de ISL en AKI y el papel de los receptores de Formylpeptide 2 (FPR2) en este proceso. En este estudio, se emplearon el modelo AKI inducido por cisplatino y el modelo inflamatorio de macrófagos inducido por lipopolisacáridos para realizar los experimentos in vivo e in vitro. Los resultados mostraron que ISL alivió fuertementelesión renale inhibió la inflamación renal in vivo y suprimió la respuesta inflamatoria macrofágica in vitro. Es importante destacar que se encontró que FPR2 estaba significativamente regulado al alza en comparación con el grupo de control en AKI y macrófagos inducidos por LPS, mientras que ISL lo suprimió fuertemente. Curiosamente, la sobreexpresión de FPR2 con la transfección de pcDNA3.1-FPR2 revirtió efectivamente el efecto antiinflamatorio de ISL en macrófagos, lo que sugiere que FPR2 puede ser el objetivo potencial de ISL para prevenir la inflamación y mejorarlesión renaldeLesión renal aguda. Tomados en conjunto, estos hallazgos indicaron que ISL mejoró la inducción de cisplatinolesión renalal inhibir FPR2 involucró la inflamación macrofágica, lo que puede proporcionar una posible opción terapéutica para la LRA.

1. Introducción

Agudoriñónlesión (AKI) es un tipo grave común deriñónenfermedad con alta mortalidad.1 Se caracteriza por una rápida disminución de la función renal que ocurre dentro de los 7 días o menos. Publicaciones recientes informaron que la incidencia de AKI es tan alta como el 5 por ciento de los pacientes hospitalizados y el 30 por ciento de los pacientes graves, yLRAcausa 2 millones de muertes en todo el mundo cada año, lo que se ha convertido en un problema de salud mundial. Aunque la definición es ordinaria y uniforme, la LRA puede ser causada por una variedad de razones, que incluyen la ingesta de fármacos nefrotóxicos, lesión por isquemia-reperfusión (lesión por isquemia-reperfusión, IRI), sepsis, cirugía cardiovascular, hipertensión y diabetes.2,3 Old la edad, la diabetes y la insuficiencia cardíaca aumentan el riesgo de LRA, que generalmente conduce a enfermedad renal crónica (ERC) irreversible y enfermedad renal en etapa terminal (ESRD) en algunos pacientes.4 En particular, los estudios han demostrado que casi todas las células inmunitarias están involucradas. en la inflamación inmune del riñón en AKI.5 Entre ellos, se ha demostrado que los macrófagos tienen un papel importante en la promoción de la inflamación renal.6 La eliminación de macrófagos mejora la inflamación y la lesión renal de AKI. mejorar los enfoques terapéuticos actuales para el manejo de AKI.

La isoliquiritigenina (ISL) es un flavonoide con estructura de chalcona, que tiene sus raíces en la famosa medicina tradicional china a base de hierbas.8 En los últimos años, ha atraído la atención de los científicos debido a sus propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, propiedades antivirales, antitumorales, hepatoprotectoras, neuroprotectoras, de protección cardíaca y de desintoxicación.9 Se ha demostrado que ISL inhibe la proliferación celular, reduce las ERO e induce la apoptosis, la necrosis y la muerte de las células cancerosas en varios grados.10 Recientes los informes indicaron que la isoliquiritigenina puede inhibir la producción de IL-6 y TNF-a inducida por la porción del lípido A de LPS en los macrófagos RAW264.7 y atenuar la formación del complejo LPS-TLR4/MD-2. Además, ISL puede inducir la apoptosis de las células HepG2 a través de las vías de señalización MAPK, STAT3 y NF-kB mediadas por ROS.11 Las pruebas experimentales también mostraron que ISL induce la activación intrínseca mediada por ROS y activa el mecanismo mitocondrial-citocromo c-cisteína proteasa de la apoptosis de las células PC-12. Vale la pena señalar que ISL se usa a menudo como suplemento dietético para mujeres.12 Estudios recientes han demostrado que ISL tiene un efecto antiinflamatorio significativo en AKI, pero el mecanismo de acción específico aún no está claro.

Investigaciones anteriores de nuestro equipo encontraron que Mincle, la lectina de tipo C inducida por macrófagos, es un receptor de reconocimiento de patrones transmembrana involucrado en la inflamación renal,13 a través del cual, seleccionamos los receptores de péptidos de formilo 2 (FPR2) que tienen cierta relación con Mincle de la base de datos GEO. Sin embargo, su papel en la enfermedad renal aguda no ha sido verificado. FPR2 es un gen que codifica proteínas que pertenece a la familia de receptores acoplados a proteínas G y contiene 351 residuos de aminoácidos.14,15 Son 7- receptores acoplados a proteínas G transmembrana que pueden mediar la regulación inmunitaria, la secreción de factores inflamatorios, la quimiotaxis celular y la adhesión celular, que están estrechamente relacionadas con la aparición y el desarrollo de diversas enfermedades.16 Su homología con FPR1 y FPR3 es tan alta como 69 por ciento y 83 por ciento. Las subcélulas FPR2 están localizadas en la membrana celular y son proteínas de membrana de paso múltiple. Se expresan principalmente en neutrófilos, eosinófilos, monocitos, células epiteliales, fibroblastos, células gliales, células mesangiales, etc., distribuidos en diversos órganos como pulmón, bazo e hígado. En particular, FPR2 se expresa abundantemente en el intersticio renal,17 donde residen las células inflamatorias. La función principal de FPR2 es combinar ciertos medios especializados que promueven la descomposición (SPM) para mediar en la actividad de estos metabolitos en la supresión y eliminación de la inflamación. Sin embargo, aún se desconoce el papel de FPR2 en la inflamación de AKI y si puede usarse como objetivo para una intervención farmacológica.

En el presente estudio, empleamos un modelo de AKI de ratón inducido por cisplatino con fármacos nefrotóxicos y un modelo de células inflamatorias inducidas por LPS para explorar el efecto de mejora de ISL sobre la lesión y la inflamación de los riñones en AKI, así como el papel clave de FPR2 en la inflamación renal. y tratamiento ISL de AKI. Este estudio proporcionará nuevas direcciones para comprender el mecanismo de la lesión inflamatoria y las estrategias de tratamiento para la LRA.

2. Materiales y métodos

2.1. drogas

Isoliquiritigenin (purity>98 por ciento) es un compuesto de isoflavonas extraído de la raíz de regaliz. Su fórmula molecular es C15H12O4. En este estudio, la isoliquiritigenina se adquirió de Chengdu Bio purify Phytochemicals Ltd. (BP0787), se disolvió en DMSO al 10 % (ST038, Beyotime, China) y se administró por vía intragástrica a ratones inducidos con cisplatino en una dosis de 7,5 mg/kg y 30 mg /kg, respectivamente.

2.2. Aislamiento de BMDM

Se seleccionaron ratones C57BL/6 macho con edades de 6 a 8 semanas para aislar las células BMDM. Separe con cuidado el hueso de la pata trasera del fémur y retire los músculos adjuntos. Moler los huesos en PBS con un mortero hasta que el color de los huesos cambie de rojo a blanco. Posteriormente, recoger el sobrenadante y filtrar a través de un colador de 70, seguido de centrifugación a 1500 rpm durante 5 min. Los eritrocitos se rompieron en líquido filtrado con 10 - PBS, que luego se filtró en un filtro de células de 40 mm. Incubar las células obtenidas en una placa de cultivo de 10 cm e inducir con sobrenadante L929 al 30 por ciento durante 7 días. Las células BMDM se estimularon con 100 ng/ml de LPS para construir el modelo de células inflamatorias.

2.3. Eliminación y sobreexpresión de FPR2 en BMDM

FPR2 se reguló a la baja por transfección con Zeta LifeAdvanced Transfection Reagent (AD600050, Zeta life, EE. UU.) y siRNA de FPR2 a BMDM (las secuencias de siRNA de FPR2: Sentido, 5'-GGAGAUGUGUAUUGUACAUTT-3'; Antisentido, 5'-AUGUACAAUACA CAUCUCCCTT-3'. Sangon Biotech, China). De manera similar, el plásmido pcDNA3.1-FPR2 (construido por Fenghui Biotech, China) se transfectó en BMDM con ZETA para sobreexpresar FPR2 en las células.

2.4. experimentos con animales

Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las pautas del Comité de Ética de Southwest MedicalUniversity. Se compraron 32 ratones macho C57BL/6 de ChengduDaShuo Animal Co., Ltd, que se dividieron aleatoriamente en 4 grupos: grupo simulado, grupo modelo (grupo LRA inducida por cisplatino), grupo de dosis baja de ISL (7,5 mg/kg, grupo L), y grupo de dosis alta (30 mg/kg, grupo H). Al grupo modelo se le inyectó 20 mg/kg de cisplatino (P4394, Sigma-Aldrich, EE. UU.) el primer día, mientras que al grupo de dosis baja se le administró 7,5 mg/kg de ISL y al grupo de dosis alta se le administró 30 mg/kg de ISL durante 3 días. . Después de 3 días, se recogieron el suero y el riñón de los ratones sacrificados.

2.5. Prueba de función renal

Después de recolectar el suero de cada grupo de ratones, siga estrictamente las instrucciones de los kits para detectar los niveles de creatinina sérica (C011-2-1, Jiancheng Biotech, China) y nitrógeno ureico (C013-2-1, Jiancheng Biotech, China). Porcelana).

2.6. tinción patológica

Tinción con H&E: Desparafinado y rehidratación de rutina de la sección, tinción con hematoxilina durante 5 min, enjuague con agua RO, separación de alcohol con ácido clorhídrico al 1 % durante 2 s, enjuague con agua del grifo, inmersión en etanol al 75 % durante 2 s, eosina soluble en alcohol al 1 % durante 30 s , enjuague con agua del grifo, etanol al 100 % Deshidratar durante 1 min, secar, xileno transparente durante 10 min, secar, sellar con medio de montaje de bálsamo neutro (36313ES60, Yepsen, China).

Tinción con PAS: las rebanadas se colocaron en una solución de ácido peryódico a temperatura ambiente durante 5 a 8 min, y luego se enjuagaron dos veces con agua RO. Luego, coloque estas rebanadas en el reactivo de Schiff durante 10e20 min, enjuague con agua del grifo durante 10 min, tiñe con hematoxilina durante 1e2 min, deshidrate y transparente en alcohol al 100 por ciento, seque, selle con medio de montaje de bálsamo neutro.

2.7. inmunofluorescencia

Coloque secciones de tejido congeladas en PBS, lave dos veces, fije con formaldehído al 10 por ciento durante 10 min. El tejido de las secciones se bloqueó con suero de cabra al 5 % durante 30 min, seguido de una incubación con anti-ratón FPR2 primario (1:200, sc-57141, Santa Cruz, EE. UU.) y anti-ratón F4/80 de rata. anticuerpos (1:200, sc-52664, Santa Cruz, EE. UU.) a4 - C durante la noche. Al día siguiente, lave las secciones dos veces con PBS, incube con anticuerpo secundario (1: 200) a temperatura ambiente durante 1 h y tiñe el núcleo con DAPI. Las imágenes fueron capturadas por el sistema EVOS.

2.8. Elisa

La concentración de IL-1b, IL-6, TNF-a en suero y sobrenadante celular se analizó utilizando kits ELISA (EMC001B, EMC004, EMC102A, Neobioscience, China) de acuerdo con las instrucciones del kit.

2.9. PCR en tiempo real

El ARN total se extrajo utilizando un kit de extracción de ARN (Tiangen, China) siguiendo las instrucciones del fabricante. Después de transcribir inversamente el ARN extraído en ADNc, agregarlo a un sistema de reacción de 10 ml para realizar la PCR en tiempo real mediante el sistema Roche LightCycler 480 y el sistema de reacción es el siguiente: Eastep® qPCR mezcla maestra 2 -, 5 ml; plantilla de ADNc, 1 ml; cebador aguas arriba (10 mM), 0,5 ml; cebador aguas abajo (10 mM), 0,5 ml; Agua libre de nucleasas, 3 mL. Los cebadores utilizados en este experimento fueron sintetizados por Sangon (Shanghai, China), y las secuencias de todos los cebadores se enumeran en la Tabla 1.

2.10. mancha occidental

Se usó tampón de lisis RIPA para extraer proteínas de tejidos renales y células BMDM. Después de resolver la proteína en SDS-PAGEgel al 10 % y transferirla a una membrana de PVDF, bloquear la membrana en BSA al 5 % durante 1 h y lavarla con TBST 3 veces, seguido de incubar la membrana con anticuerpos primarios a 4 - C durante la noche (preparada con 5 por ciento de BSA, 1: 1000). Luego, las membranas se incubaron con el anticuerpo secundario (IgG de cabra anti-ratón conjugada con peroxidasa (ZB-2305, 1:3000), IgG de cabra anti-conejo (ZB-2301, 1:3000)) a temperatura ambiente durante 1 h. Las imágenes fueron capturadas por un sistema de imágenes en gel (BIORAD, EE. UU.). La intensidad de gris de las bandas se calculó mediante el software Image J.

2.11. análisis estadístico

Los resultados se mostraron como media ± desviación estándar. El análisis de datos se realizó con una prueba ANOVA unidireccional seguida de una comparación múltiple con la prueba LSD utilizando el software SPSS 21.0. P < 0.05="" se="" consideró="" estadísticamente="" significativo.="" cada="" grupo="" de="" experimentos="" se="" duplica="" 3="">

3. Resultados

3.1. La isoliquiritigenina mejoró la lesión renal inducida por cisplatino e inhibió la inflamación renal

Para investigar los efectos renoprotectores y antiinflamatorios de la isoliquiritigenina en AKI, detectamos los niveles séricos de Cre y BUN de cada grupo, así como la expresión y secreción de citoquinas inflamatorias por PCR en tiempo real y ELISA. Además, la patología renal se midió mediante tinción con H&E y PAS. Los resultados mostraron que, en comparación con el grupo normal, los niveles séricos de Cre y BUN aumentaron en el modelo AKI, mientras que el tratamiento con 7,5 mg/kg o 30 mg/kg de ISL redujo significativamente los niveles séricos de Cre y BUN, entre ellos , la dosis de 30 mg/kg tiene el mejor efecto terapéutico (Fig. 1A y B). Cabe destacar que 30 mg/kg de ISL pueden mejorar el daño tubular renal según el porcentaje de necrosis tubular evaluado (fig. 1C). Los resultados de ELISA y PCR mostraron que la secreción de IL-1b, IL-6 y TNF-a disminuyó después de la intervención de ISL (7,5 mg/kg y 30 mg/kg), y la expresión de ARNm de IL-1b, IL-6 y TNF-a también se redujeron notablemente mediante la administración de 30 mg/kg de ISL (Fig. 1DeI). Por otro lado, los resultados de la tinción de H&E y PAS demostraron que el riñón en el grupo AKI presentó daño tubular renal severo, desprendimiento del epitelio renal, células mesangiales e hiperplasia intersticial mesangial e infiltración de células inflamatorias, sorprendentemente, 30 mg/kg de ISL puede revertir efectivamente la lesión del riñón en AKI (Fig. 1J). Todos los resultados revelaron que la administración de 7,5 mg/kg y 30 mg/kg de ISL puede mejorar la lesión renal inducida por cisplatino e inhibir la inflamación renal, en la que 30 mg/kg de ISL tiene el mejor efecto.

3.2. La isoliquiritigenina redujo la expresión de FPR2 en macrófagos de ratones AKI

Muchos informes anteriores indicaron que FPR2 juega un papel vital en la respuesta inmune y las enfermedades relacionadas con la inflamación. Sin embargo, el efecto potencial de FPR2 en el riñón de AKI no está definido. En este estudio, realizamos inmunofluorescencia para colocar el FPR2 y los macrófagos (F4/80, un fabricante de macrófagos). Los resultados mostraron que los macrófagos (manchas verdes) se infiltraron voluminosamente en el riñón de los ratones AKI, mientras que FPR2 (manchas rojas) se ubicaron junto con F4/80, lo que ilustra que FPR2 se expresó principalmente en macrófagos y el nivel de FPR2 fue significativamente aumentó en el riñón de ratones AKI (Fig. 2A). Detectamos además la expresión de ARNm de FPR2 y proteínas relacionadas con la inflamación mediante PCR en tiempo real y transferencia Western en el riñón, y los resultados demostraron que 30 mg/kg de ISL pueden regular a la baja de manera efectiva los niveles de proteína y ARNm de FPR2 en el riñón. riñón de ratones AKI en comparación con 7,5 mg/kg del grupo ISL (Fig. 2B, G, H). Es importante destacar que los resultados de la transferencia Western mostraron que 30 mg/kg de ISL también inhibían la activación de p-65 y reducían los niveles de proteína de TNF-a, IL-6 e IL{{28} }b en el riñón de ratones AKI (Fig. 2CeF). Todos los datos anteriores sugirieron que ISL alivió la inflamación renal de los ratones AKI y puede relacionarse con la reducción de la expresión de FPR2 en los macrófagos.

3.3. La isoliquiritigenina suprimió la expresión y secreción de FPR2 y citocinas inflamatorias en células BMDM inducidas por LPS

Para detectar aún más los efectos de ISL en células BMDM inducidas por LPS, examinamos el nivel de ARNm de FPR2, la expresión y la secreción de citocinas inflamatorias en células BMDM inducidas por LPS después de la administración de ISL mediante PCR en tiempo real y ELISA. Los resultados demostraron que ISL disminuyó el nivel de ARNm de FPR2, IL-1b, IL-6 y TNF-a (Fig. 3AeD), así como la secreción de IL-1b , IL-6 y TNF-a en sobrenadante celular en células BMDM inducidas por LPS (Fig. 3EeG). Los resultados anteriores sugirieron que el tratamiento de ISL con la concentración de 40 mM inhibió fuertemente la inflamación en células BMDM inducidas por LPS.

3.4. La isoliquiritigenina reguló a la baja los niveles de proteína de FPR2 y las citocinas inflamatorias en células BMDM inducidas por LPS

También detectamos los niveles de proteína de FPR2 y citocinas inflamatorias en células BMDM inducidas por LPS después de la administración de ISL mediante transferencia Western. Los datos mostraron que, en comparación con el grupo de control, los niveles de proteína de FPR2, p-p65, IL-6 y TNF-a aumentaron significativamente en las células BMDM inducidas por LPS y se redujeron fuertemente con la administración de 40 mM de ISL ( Figura 4AeE). Estos resultados ilustraron además que ISL puede suprimir la activación de NF-kB y regular a la baja los niveles de proteína de citocinas inflamatorias en células BMDM inducidas por LPS.

3.5. La inhibición de FPR2 suprimió la inflamación inducida por LPS en células BMDM

Para explorar el papel de FPR2 en la inflamación de los macrófagos, utilizamos siRNA para eliminar FPR2 en células BMDM. Los resultados mostraron que la transfección de siRNA puede inhibir significativamente la expresión de FPR2 en macrófagos inducidos por LPS (Fig. 5A) y reducir efectivamente la expresión de IL-1b y TNF-a (Fig. 5B y C). Además, los resultados de Western blot demostraron que después de la transfección de siRNA, el nivel de proteína de FPR2 se inhibió significativamente, independientemente de si fue estimulado por LPS (Fig. 5D y E). En particular, la eliminación de FPR2 redujo significativamente los niveles de proteína de las citocinas inflamatorias e inhibió la actividad de señalización de NF-kB (Fig. 5FeK), lo que indica que FPR2 desempeña un papel importante en la promoción de la respuesta inflamatoria en los macrófagos. Además, puede ser el objetivo clave de ISL para inhibir la inflamación de los macrófagos.

3.6. La sobreexpresión de FPR2 contrarrestó el efecto antiinflamatorio de la isoliquiritigenina en células BMDM inducidas por LPS

Para determinar que ISL suprime la inflamación en AKI mediante la inhibición de FPR2 en macrófagos, utilizamos el plásmido de sobreexpresión de FPR2 para regular al alza la expresión de FPR2 en células BMDM inflamatorias tratadas con ISL. Como se muestra en la Fig. 6, el nivel de proteína y ARNm de FPR2 aumentó significativamente en el grupo transfectado con pcDNA3.1- FPR2 (Fig. 6A, B, G), y la sobreexpresión de FPR2 eliminó efectivamente el efecto inhibidor de 40 ISL mM sobre la activación de p65 y los niveles de proteína de IL-1b, IL-6 y TNF-a en células BMDM inducidas por LPS (Fig. 6CeF). De manera similar, la regulación positiva de FPR2 eliminó el efecto supresor de ISL 40 mM sobre la expresión y secreción de citocinas inflamatorias en células BMDM inducidas por LPS, como IL-1b, IL-6 y TNF-a (Fig. 6HeM), lo que sugiere que ISL redujo la inflamación en células BMDM inducidas por LPS al inhibir FPR2.

4. Discusión

La lesión renal aguda es una de las enfermedades clínicas comunes. Por lo general, conduce al deterioro de la función inmune de los pacientes en un período corto. En casos de trauma, pérdida de sangre, daño de órganos, shock, el riñón es el órgano más susceptible y es propenso a convertirse en una lesión aguda. 18e20 Numerosos estudios han confirmado que la inflamación juega un papel clave en el desarrollo de AKI, que se ha considerado como un posible objetivo de intervención para el tratamiento de la LRA. En los últimos años, las medicinas chinas han logrado un gran progreso en la intervención de la inflamación, incluida la curcumina, la quercetina, la naringenina y otros monómeros. La iso-liquiritigenina es un compuesto flavonoide que tiene muchas actividades biológicas, como antiinflamatoria, antiradicales libres, antitumoral y otros efectos.21 Estudios previos encontraron que la ISL inhibía la apoptosis, la inflamación y la producción de matriz extracelular en la angiotensina. células HK-2 inducidas por II.22 Los estudios de Wu Yangping demostraron que ISL puede regular a la baja IL-6 e IL-8 al inhibir la actividad de NF-kB en el modelo de psoriasis, lo que sugiere ISL puede ser un candidato para el tratamiento de la psoriasis y otras enfermedades inflamatorias autoinmunes.23 Por otro lado, un estudio reciente demostró que ISL podría aliviar la LRA séptica al suprimir la translocación de NF-kB p65 e inhibir las respuestas inflamatorias.24 En este estudio, encontró que ISL puede mejorar efectivamente la función renal en ratones AKI inducidos por cisplatino, reducir el daño renal e inhibir la inflamación renal. Sin embargo, el mecanismo preciso de ISL que inhibe la inflamación no está claro.

FPR2 pertenece a la familia de los receptores quimiotácticos y es un receptor acoplado a proteína G de 7 veces transmembrana. Estudios previos han encontrado que FPR2 está involucrado en una variedad de procesos fisiológicos y patológicos, incluyendo respuestas de defensa, inflamación, enfermedades neurodegenerativas, tumores, trastornos relacionados con el metabolismo de glucosa y lípidos.25,26 FPR2 puede ser regulado al alza por lipopolisacáridos, varios factores inflamatorios, y la prostaglandina E2 en el proceso inflamatorio que puede desempeñar un papel antiinflamatorio y proinflamatorio.27,28 Los diferentes efectos de FPR2 sobre la inflamación dependen del entorno y de los ligandos que activan diferentes vías de señalización.29 En este estudio, encontramos que FPR2 se expresa principalmente en macrófagos en el intersticio renal, y se expresa en gran medida en el riñón de ratones con LRA inducida por cisplatino, lo que sugiere que FPR2 en macrófagos puede estar involucrado en la respuesta inflamatoria de los macrófagos en el riñón con LRA. Cada vez más pruebas han confirmado que una gran cantidad de macrófagos se infiltraron en el riñón unas pocas horas después de la aparición de AKI y agravaron el daño renal al responder a la inflamación. ser una dirección importante para mejorar AKI, y se desconoce si FPR2 está involucrado en este proceso.

Nuestros resultados experimentales mostraron que el tratamiento con dosis bajas y altas de ISL en ratones con LRA inducida por cisplatino no solo puede mejorar la estructura y función renal, sino también reducir el nivel de citocinas inflamatorias. Además, ISL puede regular a la baja de manera efectiva el nivel de proteína de FPR2 y la actividad de p65. Dado que FPR2 se expresa principalmente en macrófagos, indica que ISL puede mejorar la inflamación renal al inhibir FPR2 en macrófagos. Debido al importante papel del macrófago infiltrado en la inflamación renal, extrajimos macrófagos primarios derivados de la médula ósea para la detección in vitro del efecto de mejora de la ISL en la inflamación de los macrófagos y el mecanismo potencial. Nuestros resultados mostraron que ISL puede inhibir significativamente la inflamación de macrófagos inducida por LPS y regular a la baja la expresión y secreción de factores inflamatorios IL-1b, IL-6 y TNF-a. Al mismo tiempo, el ISL también puede reducir el nivel de proteína de las moléculas inflamatorias en los macrófagos e inhibe la expresión de ARNm y los niveles de proteína de FPR2 estimulados por LPS. Para verificar el papel clave de la inhibición de la inflamación por parte de FPR2 con ISL, utilizamos el plásmido pcDNA3.1-FPR2 para sobreexpresar FPR2 y descubrimos que en el macrófago inflamatorio tratado con ISL, la sobreexpresión de FPR2 neutraliza el efecto inhibidor de ISL sobre la inflamación. lo que indica que la inflamación de macrófagos regulada negativamente por ISL se produce principalmente a través de la inhibición de FPR2. En particular, utilizamos el modelo AKI inducido por cisplatino in vivo y seleccionamos el modelo de células inflamatorias inducidas por LPS in vitro. Aunque los reactivos de inducción de los dos modelos no son consistentes, actualmente se reconoce que estos dos métodos construyen modelos de inflamación in vivo e in vitro, respectivamente. Dado que esta investigación se centra en las respuestas inflamatorias, es factible utilizar estos dos métodos en un estudio.

Estos datos demostraron que ISL puede reducir eficazmente la expresión de factores inflamatorios in vivo e in vitro, y puede lograrse mediante la inhibición de la expresión de FPR2. Por lo tanto, ISL puede servir como un fármaco terapéutico potencial para AKI.

Expresiones de gratitud

Este trabajo fue apoyado por el Proyecto Conjunto Luzhou - Universidad Médica del Suroeste (2017LZXNYD-P01 y 2018LZXNYD-PT03), la Universidad Médica del Suroeste - Proyecto Conjunto del Hospital de Medicina Tradicional Afiliado (2018XYLH-034), el Proyecto de Construcción del Laboratorio Provincial Clave de Sichuan de Medicina (2018#53), el proyecto de ciencia y tecnología de Luzhou (2020-JYJ-56) y la Subvención Especial Conjunta de la Universidad Médica del Sudoeste - Municipal de Luzhou para la Introducción de Talentos de Alto Nivel (Equipo Lan Hui-Yao ).

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